丁香葉的提取工藝研究

張繼業(yè)，楊范莉，童 華（.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，西安 7006；2.西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院，西安 7006）

丁香葉folium syringae來源于木犀科Oleaceae丁香屬Syringa植物紫丁香Syringa oblata Lindl.、朝鮮丁香Syringa diatata Nakai、洋丁香Syringa Vulgaris L.的干燥葉［1］，具有抗菌消炎、抗病毒［2－3］、降壓、鎮(zhèn)咳祛痰、保肝護(hù)膽等作用［2，4－5］，且毒副作用較小，其有效成分為原兒茶醛及原兒茶酸［2］。提取工藝研究是中藥有效成分研究的重要組成部分，本文以原兒茶醛及原兒茶酸為指標(biāo)成分初步地研究提取方法，并測(cè)定了有效成分的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC－10A 液相色 譜系統(tǒng)，包 括 LC－10ATvp色譜泵，SPD－10Avp檢測(cè)器及CLASS－vp工作站（日本島津）；TGL－16LC型離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）。

1.2 試藥 紫丁香葉（西安市藥材市場(chǎng)，經(jīng)鑒定為藥典規(guī)定藥材）；原兒茶酸（批號(hào)110809－200604）和原兒茶醛對(duì)照品（批號(hào)11810－200506）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 原兒茶醛和原兒茶酸的含量測(cè)定方法 采用高效液相色譜法測(cè)定。色譜條件：色譜柱：Planetsil C18（150mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－水－冰醋酸（12∶78∶0.5）；流速：1.0mL·min－1；檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm；柱溫：30℃。

2.2 提取方法

2.2.1 溶劑倍數(shù)的影響 取干燥的紫丁香葉粉碎，過120目篩，備用。取3份紫丁香葉細(xì)粉1g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，分別加入50，100和200mL水，回流提取5h，濾過；用鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH至2，用乙酸乙酯萃取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液；揮干溶劑，殘?jiān)蛹状歼m量溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣10μL分析。結(jié)果見表1。

2.2.2 提取時(shí)間的影響 取3份紫丁香葉細(xì)粉1g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，加入100mL水，分別回流提取3，5和7h，濾過；用鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH至2，用乙酸乙酯萃取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液；揮干溶劑，殘?jiān)蛹状歼m量溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣10μL分析。結(jié)果見表1。

2.2.3 回流次數(shù)的影響 取3份紫丁香葉細(xì)粉1g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，加入100mL水，均回流提取5h，分別回流1次，2次（3h，2h），3次（2，2，1h）后，提取液濾過；鹽酸調(diào)節(jié)濾液pH至2，用乙酸乙酯萃取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液；揮干溶劑，殘?jiān)蛹状歼m量溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，定容，濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣10μL分析。結(jié)果見表1。

表1 不同提取因素對(duì)指標(biāo)成分含量的影響Tab.1 The influence of extraction factors on the component content

綜上所述，對(duì)紫丁香葉中原兒茶酸和原兒茶醛同時(shí)進(jìn)行提取，選擇水為溶劑，當(dāng)樣品量為1g、溶劑量為100mL、回流時(shí)間為5h、回流3次時(shí)（2h，2h，1h），提取率相對(duì)較高。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性 在所選色譜條件下，樣品中原兒茶酸和原兒茶醛峰形和分離度良好，如圖1所示，該方法具有良好的專屬性。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 分別精密吸取5，7.5，10，12.5和15μL的原兒茶酸和原兒茶醛對(duì)照品混合溶液，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積積分值，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得到的線性回歸方程分別為：Y＝28 294 X＋12 322，r＝0.999 7（線性范圍0.073～0.219μg）；Y ＝22 294 X ＋3 694.4，r＝0.999 6（線性范圍0.024 5～0.073 5μg）。

圖1 HPLC圖A.混合對(duì)照品；B.樣品；1.原兒茶酸；2.原兒茶醛Fig.1 HPLC chromatogramsA.mixed reference；B.sample；1.protocatechuic acid；2.protocatechualdehyde

2.3.3 精密度 原兒茶酸和原兒茶醛對(duì)照品溶液精密度：根據(jù)樣品所測(cè)的原兒茶酸的質(zhì)量濃度，精密量取原兒茶酸和原兒茶醛混合對(duì)照品儲(chǔ)備液5mL，稀釋到10mL作為原兒茶酸和原兒茶醛的混合對(duì)照品溶液，在相同條件下，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得其精密度RSD為0.7%和0.8%。

樣品精密度：精密稱取柴丁香葉細(xì)粉1.0g，用100倍量的水回流提取3次（第1次2h，第2次2h，第3次1h）后，濾過，濾液濃縮至100mL，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至2.0，用乙酸乙酯萃取3次，每次40mL，合并乙酸乙酯液，揮干，殘?jiān)蛹状既芙獠⒍ㄈ葜?0 mL的量瓶中，濾過。精密吸取續(xù)濾液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積。原兒茶酸和原兒茶醛的RSD分別為1.0%和2.4%。

2.3.4 重復(fù)性 取同一批紫丁香葉藥材約1.0g，精密稱定，共5份，按供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜條件測(cè)定，原兒茶酸和原兒茶醛含量的RSD分別為1.8%和1.4%。

2.3.5 穩(wěn)定性 精密稱取紫丁香葉藥材1.0g，按供試品溶液制備方法制備，并在配制好的0，2，4，8，12，24和48h測(cè)定，結(jié)果表明樣品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.6 加樣回收率 取已知含量的樣品，研細(xì)，精密稱取6份（每份約0.5g），分別置于索氏提取器中，再精密量取適量原兒茶醛及原兒茶酸對(duì)照品溶液（預(yù)先配制的與樣品中原兒茶醛及原兒茶酸含量相當(dāng)?shù)膶?duì)照品溶液），分別加入樣品中，按供試品溶液制備方法制備，并按上述色譜條件測(cè)試，計(jì)算回收率。原兒茶醛回收率為98.6%，RSD為1.50%；原兒茶酸回收率為98.2%，RSD為0.889%（n＝6）。

2.4 不同批次藥材含量測(cè)定 取干燥的紫丁香葉粉末約1g，精密稱定，按供試品處理方法處理，進(jìn)樣10μL分析，測(cè)得峰面積積分值，計(jì)算原兒茶酸和原兒茶醛含量，結(jié)果見表2。

表2 3批紫丁香葉藥材中有效成分含量測(cè)定結(jié)果Tab.2 Contents of protocatechuic acid and protocatechualdehyde in three batches of folium syringae （n＝5）

3 討論

在選擇提取溶劑時(shí)，首先選擇了不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液按照同一種提取方式（超聲1h）對(duì)紫丁香葉中的原兒茶酸和原兒茶醛同時(shí)進(jìn)行提取，但含量較低，原因可能是提取溶劑或提取方式不合適。回流提取后，仍沒有獲得較好的提取效果，根據(jù)原兒茶酸和原兒茶醛的性質(zhì)，其為酚酸類成分，具有水溶性，采用水為溶劑進(jìn)行提取。

溶劑量與提取效果緊密相關(guān)，當(dāng)溶劑倍數(shù)為100倍時(shí)，對(duì)紫丁香葉中的原兒茶酸和原兒茶醛基本完全提取。提取回流時(shí)間過長(zhǎng)，導(dǎo)致原兒茶酸和原兒茶醛的含量下降，可能是原兒茶酸和原兒茶醛對(duì)熱不穩(wěn)定所致。

［1］李永吉，呂邵娃，王艷宏，等.丁香葉藥用研究進(jìn)展［J］.中醫(yī)藥信息，2003，20（1）：22－24.

［2］米杰，滕佳琳.以丁香命名的幾種中草藥［J］.山東中醫(yī)雜志，1995，14（6）：267.

［3］李倩，廖予菲，楊洋，等.HPLC－TOF－MS法優(yōu)選麻黃中麻黃堿的提取工藝［J］.西北藥學(xué)雜志，2013，28（1）：4－7.

［4］王丹丹，劉盛泉，陳英杰，等.紫丁香有效成分的研究［J］.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1982，17（12）：951－954.

［5］王克輝，李宗友.紫丁香素的降壓作用［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè)，1997，19（1）：32－33.