頂空氣相色譜法測定鹽酸倍他洛爾中6種有機溶劑殘留量

黃宇玫，羅文艷（.南昌大學科學技術學院，南昌 33009；.南昌大學第四附屬醫院藥劑科，南昌 330003）

鹽酸倍他洛爾屬于心臟選擇性β1－受體阻滯劑，無內在擬交感活性及膜穩定作用，臨床主要用于中度高血壓、心絞痛［1－2］，另外還可用于治療眼內壓增高和開角型青光眼［3－5］。鹽酸倍他洛爾在合成與制備工藝中使用了第二類溶劑乙腈、甲苯和二甲基甲酰胺，第三類溶劑丙酮、乙酸乙酯、異丙醇等，在成品中可能會有一定量的殘留，為了控制有機溶劑，提高藥品的安全性和可靠性，本文建立了氣相色譜法測定鹽酸倍他洛爾中6種殘留溶劑。該方法簡便靈敏，準確可靠。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 6890N型氣相色譜儀。氫火焰離子化檢測器（FID，南京科捷分析儀器有限公司）；Sartorius BP211D精密電子天平（Sartorius Corporation）。

1.2 試藥 鹽酸倍他洛爾原料（山東海山藥業有限公司）；丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯和二甲基甲酰胺均為色譜純（上海德正化工有限公司）；其余為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件［6］色譜柱：DB－WAX石英毛細管柱（30m×0.53mm×1.0μm）；柱溫：50℃保持5min，以15℃·min－1的升溫速率升至200℃，保持6min；進樣口溫度：250℃，檢測器溫度：280℃；FID檢測器；載氣為N2；恒流流速：1.0mL·min－1；H2：30mL·min－1；Air：400mL·min－1；分流比10∶1，進樣體積1.0μL。

2.2 溶液的配制 精密稱取丙酮50mg、乙酸乙酯50mg、異丙醇50mg、乙腈4.1mg、甲苯8.9mg、N，N－二甲基甲酰胺8.8mg，置于50mL量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，作為對照品儲備溶液；精密量取對照品儲備液5mL，置于100mL量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品約0.1g，精密稱定，置于10mL量瓶中，加二甲基亞砜溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 系統適用性實驗 取對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，測定理論板數及分離度。結果丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺色譜峰的理論板數均大于5 000，峰之間的分離度均大于3.0，空白溶劑二甲基亞砜對測定無干擾，如圖1所示。

圖1 氣相色譜圖A.對照品；B.樣品1.丙酮；2.乙酸乙酯；3.異丙醇；4.乙腈；5.甲苯；6.N，N－二甲基甲酰胺Fig.1 GC chromatogramsA.reference substance solution；B.sample solution；1.acetone；2.ethyl acetate；3.iso－propanol；4.acetonitrile；5.toluene；6.N，N－dimethylformamide

2.3.2 線性關系及檢測限 精密量取對照品儲備液0.5，1.0，2.5，5，10和25mL，分別置于50mL量瓶中，用二甲基亞砜稀釋至刻度。按2.1項下色譜條件測定，以各自測得的峰面積Y為縱坐標、相應質量濃度X為橫坐標進行線性回歸，取對照品溶液，采用逐步稀釋法，按上述色譜條件測定，檢測限以S／N＝3計算。結果如表1所示。

表1 線性關系與檢測限Tab.1 Linear ranges and limits of detection （n＝6）

2.3.3 精密度實驗 取對照品溶液，重復進樣6次，計算相對標準偏差（RSD）。結果丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺的RSD在0.21%～0.76%之間。

2.3.4 穩定性實驗 取對照品溶液，經0，3，6，12和24h分別進樣，按外標法以峰面積計算，6種殘留有機溶劑的RSD在0.23%～1.14%之間。結果表明，24h內上述6種殘留溶劑穩定性良好。

2.3.5 加樣回收率實驗 取鹽酸倍他洛爾原料9份，每份約0.1g，精密稱定，置于10mL量瓶中，分為3組，各3份。每組分別精密加入對照品溶液4，5和6mL，用二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，進行回收率測定。結果丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺的平均回收率（n＝9）分別為100.5%，99.8%，98.2%，99.1%，99.2%和99.13%；RSD分別為0.43%，0.52%，0.78%，0.64%，1.28%和1.03%。

2.4 樣品測定 取對照品溶液及供試品溶液，按上述色譜條件進樣，記錄色譜圖，以外標法按峰面積計算，結果：鹽酸倍他洛爾原料中檢出乙醚和乙酸乙酯，含量分別為0.08%和0.02%，其余有機溶劑均未檢出。

3 討論

3.1 色譜柱選擇 本品控制的丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺6種殘留溶劑均為極性溶劑，按照相似相溶的原理，考察了DB－624、DB－WAX、DB－1、DB－1701不同極性毛細管柱，結果DB－WAX毛細管柱對這6種有機溶劑峰形和分離效果最佳。

3.2 柱溫選擇 通過對升溫程序的比較發現，本實驗采用程序升溫時，對丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺6種有機溶劑分離度與峰形均較好。

3.3 殘留溶劑限度 丙酮、乙酸乙酯、異丙醇、乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺均為鹽酸倍他洛爾在合成和制備過程中引入的有機溶劑。根據“藥品注冊的國際技術要求（ICH）［7］”和《中國藥典》（2010年版二部）［8］關于藥品中有機溶劑殘留量指導原則的規定，其中丙酮、乙酸乙酯、異丙醇為第二類應該限制使用的溶劑，乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺為第三類藥品GMP或其他質量要求限制使用的溶劑，應按藥品生產質量管理規范（GMP）或其他質量要求加以限制使用，即指導原則規定，乙腈、甲苯、N，N－二甲基甲酰胺限度分別為0.041%，0.089%和0.088%，其余均為0.5%。本次研究的樣品中，檢出了部分殘留溶劑，但所測結果均在藥典規定的范圍內。

本實驗方法簡便、快捷，結果準確，靈敏度高，適用于鹽酸倍他洛爾中6種有機溶劑殘留量的檢測。

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［7］周海鈞.藥品注冊的國際技術要求：質量部分［M］.北京：人民衛生出版社，2001：343.

［8］國家藥典委員會.中國藥典2010年版［S］.二部.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄63.