10個全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥家系的SCN1A基因突變篩查研究

吳光聲，高峰，沈征，毛姍姍，沈玨，袁哲峰，李珊

全面性癲癇伴熱性驚厥附加癥(generalized epilepsy with febrile seizures plus, GEFS+)是一種常見的在兒童期發病的家族性遺傳性癲癇綜合征。自1997年Scheffer與Berkovic[1]首次報道以來，GEFS+越來越受到醫學界的關注并作為一種新的綜合征在2001年被國際抗癲癇聯盟(International League Against Epilepsy)列入癲癇綜合征分類[2]中。目前，研究主要集中在此病的致病基因上[3]，已證實的相關致病基因有5種離子通道蛋白亞單位，分別為編碼電壓門控鈉離子α1、α2、β1亞單位的SCN1A、SCN2A、SCN1B基因與編碼配體門控氯離子通道GABAA受體γ2、δ亞單位的GABRG2、GABRD基因。本研究將對收集到的10個GEFS+家系進行臨床表型分析及SCN1A基因研究，探討SCN1A基因在我國GEFS+家系中的突變情況。

1 資料與方法

1.1 研究對象 搜集2011年3月－2013年8月在浙江大學醫學院附屬兒童醫院神經科門診及住院的10個GEFS+家系，對每個家系受累成員均建立臨床登記表，內容包括姓名、性別、出生日期、民族、發病年齡、發作時表現、圍產期情況、既往史、家族史、用藥史及輔助檢查結果。另取50例正常兒童用于進行測序對照。

1.2 家系成員表型分析 根據ILAE 2010年癲癇發作與癲癇綜合征分類標準[4]，對所有先證者及家系其他受累成員的臨床表現、腦電圖及頭顱影像學資料進行分析，繪制家系圖。

1.3 SCN1A基因突變篩查 采用DNA直接測序法。應用SeqmanTM軟件對測序結果與SCN1A正常序列進行比對，當突變點在尾部、雜峰較多、信號偏低時給予反向引物進行測序驗證。正常序列為GenBank中SCN1A全基因組序列(NC_000002)，編碼區序列(CDS-AB093548)，蛋白質序列(P35498)。如發現SCN1A基因編碼區異常，則對50例正常對照及患兒家系成員相應片段進行測序、比對，以排除單核苷酸多態性(SNP)并確定突變來源。……