體外擴(kuò)增自體脂肪干細(xì)胞對空鼻綜合征患者黏膜功能重建的臨床研究

李梁，賈德進(jìn)，閆俊靈，陳沖，丁紅，湯蘇陽

空鼻綜合征(empty nose syndrome，ENS)是一種由鼻-鼻腔手術(shù)切除引起的醫(yī)源性鼻生理功能慢性衰退性疾病。文獻(xiàn)顯示，下鼻甲切除后約有20%的患者會發(fā)展為ENS[1-2]。ENS主觀感覺的嚴(yán)重程度與客觀檢查不平行，很容易引發(fā)醫(yī)患矛盾；令人痛惜的“溫嶺殺醫(yī)血案”、“北大襲醫(yī)案”都是由此病而引發(fā)的。建立ENS的診斷標(biāo)準(zhǔn)，阻斷ENS的發(fā)生發(fā)展，緩解ENS的臨床癥狀是當(dāng)前亟須解決的問題。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年8月－2014年2月在武警總醫(yī)院皮膚再生醫(yī)學(xué)科、耳鼻喉科就診的ENS患者，經(jīng)SCL-90自評癥狀量表心理測試(250分以下)、焦慮自評量表測試(中度以下)及抑郁自評量表測試(中度以下)，篩選出5例患者，其中男4例，女1例，年齡22～30歲，平均26歲，健康狀況良好，無其他系統(tǒng)性疾病，均為雙側(cè)鼻腔手術(shù)后繼發(fā)ENS。其中3例ENS患者有鼻甲殘留，2例無鼻甲殘留。主觀癥狀：鼻黏膜干燥，通氣過度，吸氣干冷，睡眠質(zhì)量差。治療前均行鼻內(nèi)鏡檢查、鼻腔鼻竇結(jié)局測試20條(sino-nasal outcome test -20，SNOT-20)問卷調(diào)查[1-2]、鼻聲阻力和鼻黏膜纖毛清除功能測定。所有患者均簽訂知情同意書，并經(jīng)武警總醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 自體脂肪干細(xì)胞(adipose tissue-derived stromal cells，ASCs)制備 入選患者行血液常規(guī)檢查及傳染病抗原抗體檢測(包括各項(xiàng)肝炎、梅毒、艾滋病抗體)。從患者下腹部和大腿通過吸脂手術(shù)抽取脂肪15～20ml，經(jīng)終濃度0.1%Ⅰ型膠原蛋白酶、胰酶消化、離心，去除脂肪及上清液，重懸沉淀，經(jīng)200目細(xì)胞篩過濾，再次離心，經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞、磷酸鹽緩沖液洗滌2次，所得細(xì)胞提取物用含15%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)液重懸，以適當(dāng)密度接種于無菌培養(yǎng)瓶中，4～5d后加液，之后每3d換液1次，待原代細(xì)胞達(dá)85%融合，用0.05%胰蛋白酶消化，按照1:2比例傳代。……