體外擴增自體脂肪干細胞對空鼻綜合征患者黏膜功能重建的臨床研究

李梁，賈德進，閆俊靈，陳沖，丁紅，湯蘇陽

空鼻綜合征(empty nose syndrome，ENS)是一種由鼻-鼻腔手術切除引起的醫源性鼻生理功能慢性衰退性疾病。文獻顯示，下鼻甲切除后約有20%的患者會發展為ENS[1-2]。ENS主觀感覺的嚴重程度與客觀檢查不平行，很容易引發醫患矛盾；令人痛惜的“溫嶺殺醫血案”、“北大襲醫案”都是由此病而引發的。建立ENS的診斷標準，阻斷ENS的發生發展，緩解ENS的臨床癥狀是當前亟須解決的問題。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2013年8月－2014年2月在武警總醫院皮膚再生醫學科、耳鼻喉科就診的ENS患者，經SCL-90自評癥狀量表心理測試(250分以下)、焦慮自評量表測試(中度以下)及抑郁自評量表測試(中度以下)，篩選出5例患者，其中男4例，女1例，年齡22～30歲，平均26歲，健康狀況良好，無其他系統性疾病，均為雙側鼻腔手術后繼發ENS。其中3例ENS患者有鼻甲殘留，2例無鼻甲殘留。主觀癥狀：鼻黏膜干燥，通氣過度，吸氣干冷，睡眠質量差。治療前均行鼻內鏡檢查、鼻腔鼻竇結局測試20條(sino-nasal outcome test -20，SNOT-20)問卷調查[1-2]、鼻聲阻力和鼻黏膜纖毛清除功能測定。所有患者均簽訂知情同意書，并經武警總醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 自體脂肪干細胞(adipose tissue-derived stromal cells，ASCs)制備 入選患者行血液常規檢查及傳染病抗原抗體檢測(包括各項肝炎、梅毒、艾滋病抗體)。從患者下腹部和大腿通過吸脂手術抽取脂肪15～20ml，經終濃度0.1%Ⅰ型膠原蛋白酶、胰酶消化、離心，去除脂肪及上清液，重懸沉淀，經200目細胞篩過濾，再次離心，經紅細胞裂解液裂解紅細胞、磷酸鹽緩沖液洗滌2次，所得細胞提取物用含15%胎牛血清的高糖DMEM培養液重懸，以適當密度接種于無菌培養瓶中，4～5d后加液，之后每3d換液1次，待原代細胞達85%融合，用0.05%胰蛋白酶消化，按照1:2比例傳代。……