肺熱普清散質量標準研究＊

尼瑪潘多 ，何珊珊 ，張 韻 ，萬 軍 ，譚 睿

(1．西藏自治區食品藥品檢驗所，西藏 拉薩 850000;2．西南交通大學生命科學與工程學院，四川 成都 610031)

肺熱普清散(藏藥名洛才更賽)為藏藥復方制劑，由紅花、丁香、木香、安息香等14味藏藥組方，具有清肺泄熱、消炎的作用，用于小兒肺炎、流行性感冒、風熱、癘熱。本試驗中采用薄層色譜(TLC)法對方中主要藥味的定性鑒別進行了研究，建立了簡便、易行、重復性好的鑒別方法，并采用高效液相色譜(HPLC)法考察了其藥效指標成分羥基紅花黃色素A的測定條件，旨在為肺熱普清散質量標準研究提供依據。現報道如下。

1 儀器與試藥

島津LC－10A型高效液相色譜儀，包括2個LC－10A泵、DGμ－12A在線脫氣機、SPD－10A檢測器、SIL－10A自動進樣器、CTO－10A柱溫箱;CLASS－VP5．03色譜工作站。色譜柱為Kromasil 5u C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm)。甲醇(色譜純，批號為20110402，成都市科龍化工試劑廠);水為超純水(自制)，其他試劑為分析純。羥基紅花黃色素A標準品(批號為111637－200502)，紅花對照藥材(批號為120907－200609)，降香對照藥材(批號為120952－201007)，去氫木香內酯(批號為 111525－200505)、木香烴內酯對照品(批號為111524－200503)，均由中國藥品生物制品檢定所提供。肺熱普清散(迪慶藏醫院，批號為20120919;神猴藥業有限公司，批號為20120608，20120609，20120610;青海藏醫院，批號為20110908)。硅膠G、硅膠GF254和硅膠H(薄層層析硅膠，青島海洋化工有限公司)。

2 方法與結果

2．1 薄層色譜鑒別

紅花[1－4]:取5批樣品粉末各10 g，分別加80%丙酮50 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 mL使溶解，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次25 mL，棄去乙酸乙酯液，水溶液加正丁醇振搖提取2次，每次25 mL，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺紅花的陰性樣品約10 g、紅花對照藥材1 g，同法制成缺紅花的陰性對照品溶液和紅花對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB)]試驗，吸取上述溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水－甲醇(7∶2∶3∶0．4)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜相應位置上無此斑點(見圖1A)。

降香[5]:取5批樣品粉末各5 g，加75%乙醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取缺降香的陰性樣品約5 g、降香對照藥材1 g，同法制成缺降香的陰性對照品溶液和降香對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄VI B)]試驗，吸取上述溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚－乙酸乙酯(4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液與無水乙醇(1∶9)的混合溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。除20120919批樣品外，供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照品溶液色譜相應位置上無此斑點(見圖1B)。由迪慶藏醫院提供的批號為20120919的樣品，未呈現與對照藥材一致的特征斑點，建議該醫院對降香藥材進行嚴格的檢查，確保藥材合格。

圖1 紅花及降香薄層色譜鑒別圖

木香[6－8]:取5批樣品粉末各5 g，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取缺木香的陰性樣品約5 g，同法制成缺木香的陰性對照品溶液。另取去氫木香內酯對照品、木香烴內酯對照品，分別加甲醇分別制成每1 mL含0．5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄 VI B)]試驗，吸取上述溶液各 5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷－甲酸乙酯－甲酸(32∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色斑點，陰性對照品溶液色譜則無此斑點(見圖 2)。

圖2 木香薄層色譜鑒別圖

2．2 HPLC法色譜條件考察

檢測波長:取羥基紅花黃色素A對照品溶液和供試品溶液進樣分析，結果見圖3。由紫外光譜圖可見，羥基紅花黃色素A的最大吸收波長為403 nm，故選取403 nm作為檢測波長。

圖3 紫外光譜圖

柱溫:分別考察了柱溫為25，30，35，40℃時的色譜行為，結果見表1。不同柱溫條件下的色譜峰峰形均對稱，分離度均較好，理論板數均較高，故柱溫對色譜峰影響不大。

表1 柱溫考察結果

流動相:根據查閱的文獻[9－11]，分別考察了甲醇 － 乙腈 －0．7% 磷酸(26 ∶2 ∶72)、甲醇 －0．5% 磷酸(26 ∶74)和甲醇 －0．1%磷酸(30∶70)。通過比較各流動相組成條件下羥基紅花黃色素A的對稱因子及理論板數優選流動相，結果見表2。可見甲醇－0．1%磷酸(30∶70)作為流動相時分離度較好、峰形較好，故選擇其流動相。

表2 流動相考察結果

色譜條件確定:綜合上述考察結果，樣品中羥基紅花黃色素A的色譜分析條件為，色譜柱為Kromasil5u C18柱(250 mm×4．6 mm，5 μm)，流動相為甲醇 －0．1%磷酸(30 ∶70)，檢測波長 403 nm，柱溫 30 ℃，流速 1．0 mL/min。

3 討論

肺熱普清散原質量標準中無定性鑒別項。本試驗對方中紅花、降香、木香進行了定性鑒別，結果顯示，所建立的方法、定性鑒別指標專屬性強、重復性和穩定性好，可作為肺熱普清散定性鑒別的依據，也可作為其質量標準提高的一部分，具有實際應用意義。

選用兩根不同廠家的色譜柱，即Kromasil 5u C18柱(250 mm×4．6 mm，5μm)和 Gemini 5u C18柱(250 mm ×4．6mm，5μm)，按擬訂的色譜條件分別對羥基紅花黃色素A對照品溶液和供試品溶液進行分析，結果都能得到良好的分離。因此，本試驗得出的HPLC色譜條件可作為研究肺熱普清散定量標準的依據，為進一步的定量方法研究、使其標準全面提高打下了基礎。

[1]聶明華，黃淑君．中風康復膠囊中黃芪、紅花、丹參的薄層色譜鑒別 [J]．中國藥業，2006，15(8):29．

[2]崔東煥，崔龍哲．康骨膠囊中紅花、三七的薄層色譜鑒別[J]．中國藥業，2008，17(10):39．

[3]周海燕，常新全，趙潤懷，等．七厘膠囊中紅花和兒茶的薄層色譜鑒別[J]．中國現代中藥，2009，11(2):32 －33．

[4]金 鳴，高子淳，李金榮，等．大孔樹脂柱色譜法制備紅花黃色素和羥基紅花黃色素 A[J]．中草藥，2004，35(1):25－28．

[5]藍賢軍．降香揮發油薄層色譜鑒別[J]．基層中藥雜志，2000，14(2):27．

[6]沙拉買提，凱賽爾·阿不拉，蘇來曼·哈力克．維藥金鎖昆都爾片中乳香木香胡椒香附的薄層色譜鑒別[J]．中國民族醫藥雜志，2010(5):50－51．

[7]趙杰明，張秀麗，陳 靜．木香順氣丸的顯微鑒別及薄層色譜鑒別[J]．中國藥業，2007，16(23):31．

[8]胡春艷，閆媛博，鮑勁松，等．土木香薄層色譜鑒別方法的探討[J]．北方藥學，2009，6(1):7．

[9]鄭永彪，魏玉海．七味紅花殊勝丸中藥材的鑒定及羥基紅花黃色素A 的測定[J]．華西藥學雜志，2011，26(4):395－396．

[10]劉衛東，王蘭英，吳維智，等．扎沖十三味片的質量控制研究[J]．時珍國醫國藥，2010，21(7):1 647－1 648．

[11]賈曉英，楊明榮，王煥云．蒙成藥克感額日敦片中訶子的薄層鑒別及含量測定研究[J]．中國民族醫藥雜志，2012(2):50－52．