CCR7基因修飾的未成熟樹突狀細胞在大鼠高危角膜移植免疫排斥反應中的作用△

周琨 高曉唯 蔡巖 李文靜 胡裕坤 田麗麗 付燕

各種原因所致的角膜混濁是眼科常見的致盲眼病，角膜移植術是角膜盲患者復明的主要手段。雖然角膜移植有很高的手術成功率，但是穿透性角膜移植術后排斥反應的發生率仍然較高，而術后免疫排斥反應是角膜移植失敗的最主要原因［1］。尤其在高危角膜移植，術后免疫排斥反應發生率高達65%［2-3］。角膜移植術后免疫排斥反應的預防和治療已成為目前眼科領域亟待解決的問題。

樹突狀細胞(dendritic cells，DC)作為主要的抗原遞呈細胞(antigen presenting cells，APC)，其誘導免疫耐受已成為器官移植領域的研究熱點，如角膜移植、心臟移植、腎臟移植等［4］。根據 DC在免疫反應中的作用和成熟狀態不同分為:成熟樹突狀細胞(mature dendritic cells，mDC)和未成熟樹突狀細胞(immature dendritic cells，imDC)，mDC 刺激免疫應答，而imDC介導特異性的免疫耐受。趨化因子受體7(chemokine receptor 7，CCR7)在趨化 DC從外周組織遷移至次級淋巴器官中起關鍵作用［5-6］。本研究利用CCR7及imDC的特點，將含大鼠CCR7基因的腺病毒轉染修飾imDC，輸入受體體內，觀察其對大鼠高危角膜移植免疫排斥反應的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 受體為健康清潔級 SD大鼠60只，供體為健康清潔級Wistar大鼠30只，受、供體均為雄性，6～8周齡，體質量180～220 g，購于新疆醫科大學實驗動物中心。所有動物喂養和實驗過程符合ARVO有關用于研究目的實驗動物的相關規定。1.1.2 主要試劑 重組大鼠白細胞集落刺激因子(rrGM-CSF)、重組大鼠白細胞介素-4(rrIL-4)(美國Peprotech公司);RPMI-1640培養液、胎牛血清(美國Gibco公司);Anti-CCR7抗體(英國 Abcam公司);Ad-CCR7-EGFP 溶液:滴度 36×109PFU·mL－1、Ad-EGFP溶液:滴度 0.195×1012PFU·mL－1均購自廣州賽業生物科技有限公司。……