肉毒桿菌B誘導大鼠干眼模型中淚腺Lacritin蛋白表達的研究△

高偉 程燕 吳潔 王亮 趙帥

隨著人民生活環境的不斷改變，干眼癥的發病率不斷增加，并有年輕化的傾向。有研究表明［1］，55歲以上的人群中干眼癥發病率高達10%～20%。引起干眼癥的病因很多，其發病機制十分復雜。近年來，對于干眼癥的研究也逐漸增多，動物模型的建立對干眼癥的研究起到重要的基礎作用，而炎癥模型的建立更為重要。我們利用肉毒桿菌B誘導大鼠建立干眼炎癥模型，通過觀察Lacritin蛋白表達變化為干眼癥的診治提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 材料與分組 30只(30眼)健康8周雌性 SD大鼠，體質量200～250 g，隨機分為2組，實驗組20只，對照組10只。實驗組右側淚腺注射肉毒桿菌B，對照組右側淚腺注射生理鹽水。肉毒桿菌B(美國Elan公司)，淚液檢測濾紙條(天津晶明新技術發展有限公司)，抗大鼠腫瘤壞死因子-α單克隆抗體(中杉金橋生物技術有限公司)，羊抗大鼠IL-6單克隆抗體(美國PeproTech公司)，抗鼠Lacritin蛋白抗體(美國Sant Cruz公司)。裂隙燈顯微鏡(SL-1E，日本 Topcon公司)，熒光顯微鏡(BX51，日本Olympus公司)。

1.2 方法

1.2.1 動物模型建立 實驗組20只大鼠腹腔注射100 g·L－1水合氯醛(4 mL·kg－1)，待動物麻醉后在手術顯微鏡下暴露淚腺，將大鼠的右側淚腺注射肉毒桿菌B 0.1 mL(20 mU)，對照組同樣方法注射生理鹽水 0.1 mL。

1.2.2 淚液分泌試驗檢查 分別于術前1 d及術后3 d、7 d、14 d、28 d、42 d，將大鼠基礎麻醉后檢測淚液的分泌，將淚液檢測濾紙條置于下瞼中外1/3處，5 min后測量變色長度。

1.2.3 熒光素鈉染色檢查 分別于術前1 d及術后3 d、7 d、14 d、28 d、42 d，使用 10 g·L－1熒光素鈉溶液染色，1 min后觀察角膜熒光染色并在裂隙燈顯微鏡下拍照。角膜熒光染色評分采用 Park計分方法［2］:0分:無著色點;1分:點狀著色≤1/8象限;2分:1/8象限 ＜點狀著色≤1/4象限;3分:1/4象限＜點狀著色≤1/2象限;4分:點狀著色 ＞1/2象限。……