丹參酚酸抗類風濕性關節炎致骨質疏松的實驗研究

林民貴 肖彥燊

類風濕性關節炎(RA)在疾病發展和治療過程中會并發骨質疏松, 骨關節的破壞和骨質疏松是其致殘的主要原因。新的研究表明［1］, 骨礦密度減少在RA病程早期就已經出現,抗骨質疏松的治療在疾病早期即應考慮。此外, RA引起骨質疏松跟激素療法有關, 糖皮質激素治療RA過程中會誘發或加重骨質疏松。選擇有效的治療方法, 治療RA致骨質疏松成為臨床科室研究的重點問題［2］。本研究通過對丹參酚酸抗RA致骨質疏松的實驗進行觀察和分析, 現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 首先建立RA的大鼠模型, 1月齡雌性SD大鼠每只于左后足跖皮內注射濃度為2.5 mg/ml的Ⅱ型膠原蛋白(collagen Ⅱ, CⅡ)0.1 ml(將酸可溶性CⅡ用弗氏完全佐劑配成于CⅡ濃度為2.5 mg/ml乳劑)。1周后以相同劑量于每只大鼠尾部及左后足跖部加強注射1次。2周后把上述成功建立RA模型的大鼠篩選出40只, 隨機分為生理鹽水組、丹參骨寶高劑量組、丹參骨寶中劑量組、丹參骨寶低劑量組, 每組10支。灌胃1次/d, 連續給藥12周。給藥12周后處死取材。

1.2 方法

1.2.1 制備丹參總酚酸 稱取干燥至恒質量的丹參飲片適量, 以80% 的乙醇溶液為溶劑, 按體積比1：5加入, 置錐形瓶中, 混勻, 放入超聲清洗器中超聲提取30 min, 冷卻至室溫,過濾取濾液, 濾渣再進行二次超聲振蕩提取, 合并濾液, 密閉冷藏保存, 備用。采用Folin-Ciocalteu 法測定總酚酸含量。

1.2.2 通過ELISA法對三種類風濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗CCP抗體和OPG、RNAKL進行測定。

1.3 觀察指標 觀察研究對象三種類風濕因子IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗環瓜氨酸多肽抗體(抗CCP抗體)、骨保護素(OPG)、核因子κB受體激活配體(RNAKL)指標變化情況：IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率判定標準是≥20 RU/ml。

1.4 統計學方法 采用統計學軟件SPSS19.0建立數據庫。計量資料以均數±標準差(±s)表示, 采用t檢驗；計數資料采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

研究對象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL情況, 見表1。丹參骨寶高、中、低劑量組 IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽 性 素、 抗 CCP抗 體、OPG、RNAKL均優于生理鹽水組, 差異均具有統計學意義(P<0.05)。

表1 研究對象IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL情況

3 討論

類風濕性關節炎(RA)及RA性骨質疏松是一種老年性、疑難性重癥疾病, 對人類和社會危害極大［3］。RA患者的骨丟失有三種類型：關節軟骨下骨和關節邊緣骨丟失、受累關節周圍骨丟失、軀干和四肢骨骼廣泛骨丟失。研究證實［4］,在各關節骨質破壞的環境中, 破骨細胞是骨侵蝕和骨質疏松的主要因素。此外, 炎癥因子作用下的成骨細胞加速凋亡和成骨細胞的功能下降, 使RA中的成骨細胞數量不足, 功能不佳；在加上過度活化的破骨細胞系統, 這就使得骨重建的平衡大大偏向骨丟失的一端。而治療RA過程中, 大量使用糖皮質激素藥物, 會誘發或加重骨質疏松, 因此糖皮質激素治療RA受到一定的限制。目前國內約有400萬RA患者,如能尋找到一種低毒有效的藥物將大有市場［5］。因此, 將丹參酚酸開發成防治RA性骨質疏松的新藥, 將造福于廣大RA患者, 具有良好的市場前景和具有廣闊的發展前景。丹參是著名抗衰老中藥, 為唇形科植物丹參(salvia miltiorrhiza bge)的干燥根, 是著名的傳統中藥, 具有抗氧化、改善微循環防止血栓形成等多種功能［6］。丹參可促進骨愈合, 預防股骨頭壞死, 有效降低絕經期婦女骨質疏松血中骨吸收生物指標,還具有抗炎和增強免疫的調節作用［7］。近代已從中分離得多種化學成分, 包括脂溶性成分和水溶性成分, 水溶性成分有原兒茶醛、丹參素(丹參酸甲)、丹參酸乙等。丹參富含丹參素,丹參酚酸等具有抗脂質氧化、擴張血管、改善微循環作用,也具有抗炎和增強免疫的調節作用的活性成分［8］。但丹參酚酸是否對RA性骨質疏松有預防作用未見有相關報道, 本研究通過成功建立RA模型的大鼠篩選出40只, 隨機分為生理鹽水組10只、丹參骨寶高劑量組10只、丹參骨寶中劑量組10只、丹參骨寶低劑量組10只。結果：丹參骨寶高劑量組、中劑量組、低劑量組IgG-RF、IgM-RF、IgA-RF陽性率、抗CCP抗體、OPG、RNAKL均優于生理鹽水組, 提示丹參酚酸可以有效的改善風濕性關節炎并骨質疏松的各項因子陽性率和因子水平。

綜上所述, 丹參酚酸開發成治療類風濕性關節炎致骨質疏松的相關藥品或食品具有重要的社會意義和經濟價值。

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