殼寡糖對番茄灰霉病菌的抑制作用

顧麗嬙

摘要：研究了殼寡糖對番茄灰霉病菌的抑制作用，分別測定在不同濃度梯度下灰霉病菌的菌落直徑、產孢量、孢子萌發(fā)率，觀察了殼寡糖對菌絲生長形態(tài)的影響。結果表明，殼寡糖的濃度越大對灰霉病菌的抑制作用越明顯，1 500 mg/L 的殼寡糖對菌絲生長的抑制率1 d時為100%，2 d為86.32%，5 d為81.95%，菌絲形態(tài)發(fā)生顯著變化，菌絲直徑明顯增粗，菌隔增多，該濃度下對灰霉病菌的產孢抑制率達到83.82%，抑制孢子萌發(fā)率達52.97%。殼寡糖對灰霉病菌菌絲生長2 d的EC50為346.96 mg/L，對灰霉病菌產孢的EC50為521.96 mg/L，對孢子萌發(fā)的EC50為1 451.59 mg/L。

關鍵詞：殼寡糖；灰霉病菌；菌絲生長；產孢；EC50

1材料與方法

1.1試驗材料

灰霉病菌：采自河北省唐山市郊區(qū)保護地番茄灰霉病果，PDA培養(yǎng)基分離、純化。殼寡糖：相對分子質量≤3 000，脫乙酰度（DD）≥85%（浙江澳興科技生物有限公司生產）。番茄品種：巨豐（唐山市農業(yè)科學研究院科技開發(fā)中心提供）。

1.2試驗方法

1.2.1殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長和產孢影響的測定制備含殼寡糖濃度為300、600、900、1 200、1 500 mg/L 的含藥平板，用打孔法反接5 mm的灰霉菌菌餅。25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天測量菌落直徑，待對照組菌落長滿整個培養(yǎng)皿為止，計算菌絲生長抑制率。光暗周期12 h-12 h交替條件下繼續(xù)培養(yǎng)產孢，分別取各濃度梯度的菌落打取直徑為5 mm的菌餅5個，用2 mL無菌水配制成孢懸液，用血球計數(shù)板計數(shù)，計算產孢抑制率。分別求出毒力回歸方程，計算EC50。

菌絲生長抑制率=（對照組菌落直徑-處理組菌落直徑）/（對照組菌落直徑-5 mm）×100%；

產孢量=（孢子平均數(shù)/80）×4×106。

1.2.2殼寡糖對番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)影響的測定灰霉病菌培養(yǎng)9～10 d后使其產孢，加無菌水稀釋至40倍鏡下每視野20～30個，用凹玻片加不同濃度的殼寡糖21 ℃黑暗培養(yǎng)12 h后，計算抑制孢子萌發(fā)率，求出毒力回歸方程，計算EC50。

孢子萌發(fā)率=萌發(fā)孢子數(shù)/視野下總孢子數(shù)×100%；

抑制孢子萌發(fā)率=（對照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率）/對照孢子萌發(fā)率×100%。

1.2.3殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)影響的觀察在PDA平板上反接灰霉病菌2 d后，在菌落邊緣加0.2 mL的不同濃度殼寡糖溶液后豎插蓋玻片，待菌絲長到蓋玻片上，取出，直接觀察菌絲形態(tài)進行比較。

2結果與分析

2.1殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長的抑制作用

從表1可以看出，菌落直徑隨著殼寡糖濃度的增大呈現(xiàn)遞降的趨勢，濃度越大抑菌效果越明顯，其中300 mg/L殼寡糖對菌絲生長的抑制率1 d時為32.12%，2 d為4735%，5 d為21.48%，1 500 mg/L的抑制率1 d時為100%，2 d為8632%，5 d為81.95%，900 mg/L以上的殼寡糖對菌絲生長的抑制率5 d內均大于50%，1 500 mg/L 的殼寡糖對菌絲生長抑制率5 d內均大于80%。由表2可見，不同處理天數(shù)下，殼寡糖對菌絲生長的抑制中濃度EC50不同。其中2 d的EC50最小，為34696 mg/L，5 d的EC50最大，為629.65 mg/L。

2.2殼寡糖對番茄灰霉病菌孢子產生及萌發(fā)的抑制作用

從表3可見，殼寡糖對灰霉病菌的產孢量和孢子萌發(fā)率都有明顯的抑制作用，并且隨著處理濃度的升高產孢量和萌發(fā)量降低，抑制率增大。300 mg/L條件下，比對照組產孢量減少1.84×107個，抑制率達33.82%；孢子萌發(fā)率降低1360百分點，抑制孢子萌發(fā)率達到18.38%。

2.3殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)的影響

通過顯微觀察，對照組菌絲細長、細胞壁光滑（圖1）；而不同濃度梯度的殼寡糖溶液處理組菌絲則出現(xiàn)不同程度的腫脹、菌絲變粗、分隔增多現(xiàn)象。殼寡糖濃度越大菌絲形態(tài)變化越明顯（圖2、圖3）。

3結論與討論

為了減少對灰霉病防治的農藥使用，科研人員研究了不同抑菌物質對灰霉病菌的抑制作用。黃芳等研究結果表明，用0.1% 硼處理灰霉病菌孢子后， 顯著抑制了孢子萌發(fā)和芽管伸

長[4]；白文苑等研究蒼耳的丙酮提取物，其抑制菌絲生長的EC50 為20. 27 mg/mL，在30 mg/mL 濃度下，對番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌發(fā)的抑制率均在70%以上，對孢子形成和孢子萌發(fā)的EC50 分別為9. 06 、15. 21 mg/mL[5]；廖敏等研究結果表明，硅酸鈉在一定程度上能抑制灰霉病菌的生長[6]。本試驗研究可食用的殼寡糖對番茄灰霉病菌生長的影響，結果表明，1 500 mg/L殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長的抑制率均在80%以上，殼寡糖對菌絲生長2dEC50使用濃度為

346.96 mg/L，低于蒼耳丙酮提取物；而對菌絲形態(tài)變化的觀察表明，在濃度為1 500 mg/L時，出現(xiàn)最大程度的腫脹、菌絲變粗、分隔增多的現(xiàn)象。1 500 mg/L殼寡糖對灰霉菌產孢量抑制率高達83. 82%，對孢子萌發(fā)的最大抑制率達55.97%。表明殼寡糖對番茄灰霉病菌生長有一定的抑制作用，本試驗結果為殼寡糖作為一種綠色藥劑防治番茄灰霉病提供了科學依據。

參考文獻：

[1]王克勤. 灰霉病菌抗藥性研究進展及防治對策[J]. 黑龍江農業(yè)科學，2000，7（5）：40-42.

[2]張新虎，何靜，沈慧敏. 蒼耳提取物對番茄灰霉病菌的抑制作用及抑菌機理初探[J]. 草業(yè)學報，2008，17（3）：99-104.

[3]張筠，杜鵬，張亞東. 殼寡糖抑菌作用的研究[J]. 食品工業(yè)科技，2009，30（1）：88-90.

[4]黃芳，王建明，徐玉梅. 硼抑制灰霉病菌孢子萌發(fā)機制的初步研究[J]. 植物病理學報，2008，38（4）：370-376.

[5]白文苑，沈慧敏. 蒼耳愈傷組織提取物對番茄灰霉病菌的抑菌活性[J]. 甘肅農業(yè)大學學報，2008，43（4）：82-86.

[6]廖敏，李淼. 硅對草莓灰霉病的防治效果研究[J]. 宿州教育學院學報，2011，14（2）：174-176.王程亮，徐麗君，倪萌，等. 無錫地區(qū)桃園梨小食心蟲發(fā)生規(guī)律[J]. 江蘇農業(yè)科學，2014，42（9）：117-119.

摘要：研究了殼寡糖對番茄灰霉病菌的抑制作用，分別測定在不同濃度梯度下灰霉病菌的菌落直徑、產孢量、孢子萌發(fā)率，觀察了殼寡糖對菌絲生長形態(tài)的影響。結果表明，殼寡糖的濃度越大對灰霉病菌的抑制作用越明顯，1 500 mg/L 的殼寡糖對菌絲生長的抑制率1 d時為100%，2 d為86.32%，5 d為81.95%，菌絲形態(tài)發(fā)生顯著變化，菌絲直徑明顯增粗，菌隔增多，該濃度下對灰霉病菌的產孢抑制率達到83.82%，抑制孢子萌發(fā)率達52.97%。殼寡糖對灰霉病菌菌絲生長2 d的EC50為346.96 mg/L，對灰霉病菌產孢的EC50為521.96 mg/L，對孢子萌發(fā)的EC50為1 451.59 mg/L。

關鍵詞：殼寡糖；灰霉病菌；菌絲生長；產孢；EC50

1材料與方法

1.1試驗材料

灰霉病菌：采自河北省唐山市郊區(qū)保護地番茄灰霉病果，PDA培養(yǎng)基分離、純化。殼寡糖：相對分子質量≤3 000，脫乙酰度（DD）≥85%（浙江澳興科技生物有限公司生產）。番茄品種：巨豐（唐山市農業(yè)科學研究院科技開發(fā)中心提供）。

1.2試驗方法

1.2.1殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長和產孢影響的測定制備含殼寡糖濃度為300、600、900、1 200、1 500 mg/L 的含藥平板，用打孔法反接5 mm的灰霉菌菌餅。25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天測量菌落直徑，待對照組菌落長滿整個培養(yǎng)皿為止，計算菌絲生長抑制率。光暗周期12 h-12 h交替條件下繼續(xù)培養(yǎng)產孢，分別取各濃度梯度的菌落打取直徑為5 mm的菌餅5個，用2 mL無菌水配制成孢懸液，用血球計數(shù)板計數(shù)，計算產孢抑制率。分別求出毒力回歸方程，計算EC50。

菌絲生長抑制率=（對照組菌落直徑-處理組菌落直徑）/（對照組菌落直徑-5 mm）×100%；

產孢量=（孢子平均數(shù)/80）×4×106。

1.2.2殼寡糖對番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)影響的測定灰霉病菌培養(yǎng)9～10 d后使其產孢，加無菌水稀釋至40倍鏡下每視野20～30個，用凹玻片加不同濃度的殼寡糖21 ℃黑暗培養(yǎng)12 h后，計算抑制孢子萌發(fā)率，求出毒力回歸方程，計算EC50。

孢子萌發(fā)率=萌發(fā)孢子數(shù)/視野下總孢子數(shù)×100%；

抑制孢子萌發(fā)率=（對照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率）/對照孢子萌發(fā)率×100%。

1.2.3殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)影響的觀察在PDA平板上反接灰霉病菌2 d后，在菌落邊緣加0.2 mL的不同濃度殼寡糖溶液后豎插蓋玻片，待菌絲長到蓋玻片上，取出，直接觀察菌絲形態(tài)進行比較。

2結果與分析

2.1殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長的抑制作用

從表1可以看出，菌落直徑隨著殼寡糖濃度的增大呈現(xiàn)遞降的趨勢，濃度越大抑菌效果越明顯，其中300 mg/L殼寡糖對菌絲生長的抑制率1 d時為32.12%，2 d為4735%，5 d為21.48%，1 500 mg/L的抑制率1 d時為100%，2 d為8632%，5 d為81.95%，900 mg/L以上的殼寡糖對菌絲生長的抑制率5 d內均大于50%，1 500 mg/L 的殼寡糖對菌絲生長抑制率5 d內均大于80%。由表2可見，不同處理天數(shù)下，殼寡糖對菌絲生長的抑制中濃度EC50不同。其中2 d的EC50最小，為34696 mg/L，5 d的EC50最大，為629.65 mg/L。

2.2殼寡糖對番茄灰霉病菌孢子產生及萌發(fā)的抑制作用

從表3可見，殼寡糖對灰霉病菌的產孢量和孢子萌發(fā)率都有明顯的抑制作用，并且隨著處理濃度的升高產孢量和萌發(fā)量降低，抑制率增大。300 mg/L條件下，比對照組產孢量減少1.84×107個，抑制率達33.82%；孢子萌發(fā)率降低1360百分點，抑制孢子萌發(fā)率達到18.38%。

2.3殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)的影響

通過顯微觀察，對照組菌絲細長、細胞壁光滑（圖1）；而不同濃度梯度的殼寡糖溶液處理組菌絲則出現(xiàn)不同程度的腫脹、菌絲變粗、分隔增多現(xiàn)象。殼寡糖濃度越大菌絲形態(tài)變化越明顯（圖2、圖3）。

3結論與討論

為了減少對灰霉病防治的農藥使用，科研人員研究了不同抑菌物質對灰霉病菌的抑制作用。黃芳等研究結果表明，用0.1% 硼處理灰霉病菌孢子后， 顯著抑制了孢子萌發(fā)和芽管伸

長[4]；白文苑等研究蒼耳的丙酮提取物，其抑制菌絲生長的EC50 為20. 27 mg/mL，在30 mg/mL 濃度下，對番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌發(fā)的抑制率均在70%以上，對孢子形成和孢子萌發(fā)的EC50 分別為9. 06 、15. 21 mg/mL[5]；廖敏等研究結果表明，硅酸鈉在一定程度上能抑制灰霉病菌的生長[6]。本試驗研究可食用的殼寡糖對番茄灰霉病菌生長的影響，結果表明，1 500 mg/L殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長的抑制率均在80%以上，殼寡糖對菌絲生長2dEC50使用濃度為

346.96 mg/L，低于蒼耳丙酮提取物；而對菌絲形態(tài)變化的觀察表明，在濃度為1 500 mg/L時，出現(xiàn)最大程度的腫脹、菌絲變粗、分隔增多的現(xiàn)象。1 500 mg/L殼寡糖對灰霉菌產孢量抑制率高達83. 82%，對孢子萌發(fā)的最大抑制率達55.97%。表明殼寡糖對番茄灰霉病菌生長有一定的抑制作用，本試驗結果為殼寡糖作為一種綠色藥劑防治番茄灰霉病提供了科學依據。

參考文獻：

[1]王克勤. 灰霉病菌抗藥性研究進展及防治對策[J]. 黑龍江農業(yè)科學，2000，7（5）：40-42.

[2]張新虎，何靜，沈慧敏. 蒼耳提取物對番茄灰霉病菌的抑制作用及抑菌機理初探[J]. 草業(yè)學報，2008，17（3）：99-104.

[3]張筠，杜鵬，張亞東. 殼寡糖抑菌作用的研究[J]. 食品工業(yè)科技，2009，30（1）：88-90.

[4]黃芳，王建明，徐玉梅. 硼抑制灰霉病菌孢子萌發(fā)機制的初步研究[J]. 植物病理學報，2008，38（4）：370-376.

[5]白文苑，沈慧敏. 蒼耳愈傷組織提取物對番茄灰霉病菌的抑菌活性[J]. 甘肅農業(yè)大學學報，2008，43（4）：82-86.

[6]廖敏，李淼. 硅對草莓灰霉病的防治效果研究[J]. 宿州教育學院學報，2011，14（2）：174-176.王程亮，徐麗君，倪萌，等. 無錫地區(qū)桃園梨小食心蟲發(fā)生規(guī)律[J]. 江蘇農業(yè)科學，2014，42（9）：117-119.

摘要：研究了殼寡糖對番茄灰霉病菌的抑制作用，分別測定在不同濃度梯度下灰霉病菌的菌落直徑、產孢量、孢子萌發(fā)率，觀察了殼寡糖對菌絲生長形態(tài)的影響。結果表明，殼寡糖的濃度越大對灰霉病菌的抑制作用越明顯，1 500 mg/L 的殼寡糖對菌絲生長的抑制率1 d時為100%，2 d為86.32%，5 d為81.95%，菌絲形態(tài)發(fā)生顯著變化，菌絲直徑明顯增粗，菌隔增多，該濃度下對灰霉病菌的產孢抑制率達到83.82%，抑制孢子萌發(fā)率達52.97%。殼寡糖對灰霉病菌菌絲生長2 d的EC50為346.96 mg/L，對灰霉病菌產孢的EC50為521.96 mg/L，對孢子萌發(fā)的EC50為1 451.59 mg/L。

關鍵詞：殼寡糖；灰霉病菌；菌絲生長；產孢；EC50

1材料與方法

1.1試驗材料

灰霉病菌：采自河北省唐山市郊區(qū)保護地番茄灰霉病果，PDA培養(yǎng)基分離、純化。殼寡糖：相對分子質量≤3 000，脫乙酰度（DD）≥85%（浙江澳興科技生物有限公司生產）。番茄品種：巨豐（唐山市農業(yè)科學研究院科技開發(fā)中心提供）。

1.2試驗方法

1.2.1殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長和產孢影響的測定制備含殼寡糖濃度為300、600、900、1 200、1 500 mg/L 的含藥平板，用打孔法反接5 mm的灰霉菌菌餅。25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每天測量菌落直徑，待對照組菌落長滿整個培養(yǎng)皿為止，計算菌絲生長抑制率。光暗周期12 h-12 h交替條件下繼續(xù)培養(yǎng)產孢，分別取各濃度梯度的菌落打取直徑為5 mm的菌餅5個，用2 mL無菌水配制成孢懸液，用血球計數(shù)板計數(shù)，計算產孢抑制率。分別求出毒力回歸方程，計算EC50。

菌絲生長抑制率=（對照組菌落直徑-處理組菌落直徑）/（對照組菌落直徑-5 mm）×100%；

產孢量=（孢子平均數(shù)/80）×4×106。

1.2.2殼寡糖對番茄灰霉病菌孢子萌發(fā)影響的測定灰霉病菌培養(yǎng)9～10 d后使其產孢，加無菌水稀釋至40倍鏡下每視野20～30個，用凹玻片加不同濃度的殼寡糖21 ℃黑暗培養(yǎng)12 h后，計算抑制孢子萌發(fā)率，求出毒力回歸方程，計算EC50。

孢子萌發(fā)率=萌發(fā)孢子數(shù)/視野下總孢子數(shù)×100%；

抑制孢子萌發(fā)率=（對照孢子萌發(fā)率-處理孢子萌發(fā)率）/對照孢子萌發(fā)率×100%。

1.2.3殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)影響的觀察在PDA平板上反接灰霉病菌2 d后，在菌落邊緣加0.2 mL的不同濃度殼寡糖溶液后豎插蓋玻片，待菌絲長到蓋玻片上，取出，直接觀察菌絲形態(tài)進行比較。

2結果與分析

2.1殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長的抑制作用

從表1可以看出，菌落直徑隨著殼寡糖濃度的增大呈現(xiàn)遞降的趨勢，濃度越大抑菌效果越明顯，其中300 mg/L殼寡糖對菌絲生長的抑制率1 d時為32.12%，2 d為4735%，5 d為21.48%，1 500 mg/L的抑制率1 d時為100%，2 d為8632%，5 d為81.95%，900 mg/L以上的殼寡糖對菌絲生長的抑制率5 d內均大于50%，1 500 mg/L 的殼寡糖對菌絲生長抑制率5 d內均大于80%。由表2可見，不同處理天數(shù)下，殼寡糖對菌絲生長的抑制中濃度EC50不同。其中2 d的EC50最小，為34696 mg/L，5 d的EC50最大，為629.65 mg/L。

2.2殼寡糖對番茄灰霉病菌孢子產生及萌發(fā)的抑制作用

從表3可見，殼寡糖對灰霉病菌的產孢量和孢子萌發(fā)率都有明顯的抑制作用，并且隨著處理濃度的升高產孢量和萌發(fā)量降低，抑制率增大。300 mg/L條件下，比對照組產孢量減少1.84×107個，抑制率達33.82%；孢子萌發(fā)率降低1360百分點，抑制孢子萌發(fā)率達到18.38%。

2.3殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲形態(tài)的影響

通過顯微觀察，對照組菌絲細長、細胞壁光滑（圖1）；而不同濃度梯度的殼寡糖溶液處理組菌絲則出現(xiàn)不同程度的腫脹、菌絲變粗、分隔增多現(xiàn)象。殼寡糖濃度越大菌絲形態(tài)變化越明顯（圖2、圖3）。

3結論與討論

為了減少對灰霉病防治的農藥使用，科研人員研究了不同抑菌物質對灰霉病菌的抑制作用。黃芳等研究結果表明，用0.1% 硼處理灰霉病菌孢子后， 顯著抑制了孢子萌發(fā)和芽管伸

長[4]；白文苑等研究蒼耳的丙酮提取物，其抑制菌絲生長的EC50 為20. 27 mg/mL，在30 mg/mL 濃度下，對番茄灰霉菌孢子形成和孢子萌發(fā)的抑制率均在70%以上，對孢子形成和孢子萌發(fā)的EC50 分別為9. 06 、15. 21 mg/mL[5]；廖敏等研究結果表明，硅酸鈉在一定程度上能抑制灰霉病菌的生長[6]。本試驗研究可食用的殼寡糖對番茄灰霉病菌生長的影響，結果表明，1 500 mg/L殼寡糖對番茄灰霉病菌菌絲生長的抑制率均在80%以上，殼寡糖對菌絲生長2dEC50使用濃度為

346.96 mg/L，低于蒼耳丙酮提取物；而對菌絲形態(tài)變化的觀察表明，在濃度為1 500 mg/L時，出現(xiàn)最大程度的腫脹、菌絲變粗、分隔增多的現(xiàn)象。1 500 mg/L殼寡糖對灰霉菌產孢量抑制率高達83. 82%，對孢子萌發(fā)的最大抑制率達55.97%。表明殼寡糖對番茄灰霉病菌生長有一定的抑制作用，本試驗結果為殼寡糖作為一種綠色藥劑防治番茄灰霉病提供了科學依據。

參考文獻：

[1]王克勤. 灰霉病菌抗藥性研究進展及防治對策[J]. 黑龍江農業(yè)科學，2000，7（5）：40-42.

[2]張新虎，何靜，沈慧敏. 蒼耳提取物對番茄灰霉病菌的抑制作用及抑菌機理初探[J]. 草業(yè)學報，2008，17（3）：99-104.

[3]張筠，杜鵬，張亞東. 殼寡糖抑菌作用的研究[J]. 食品工業(yè)科技，2009，30（1）：88-90.

[4]黃芳，王建明，徐玉梅. 硼抑制灰霉病菌孢子萌發(fā)機制的初步研究[J]. 植物病理學報，2008，38（4）：370-376.

[5]白文苑，沈慧敏. 蒼耳愈傷組織提取物對番茄灰霉病菌的抑菌活性[J]. 甘肅農業(yè)大學學報，2008，43（4）：82-86.

[6]廖敏，李淼. 硅對草莓灰霉病的防治效果研究[J]. 宿州教育學院學報，2011，14（2）：174-176.王程亮，徐麗君，倪萌，等. 無錫地區(qū)桃園梨小食心蟲發(fā)生規(guī)律[J]. 江蘇農業(yè)科學，2014，42（9）：117-119.