藍靛果忍冬抗氧化性能分析及組培體系建立

摘要：從5個不同品種藍靛果忍冬（Lonicera edulis Turcz.）果實中提取酚類物質，利用分光光度法進行抗氧化性能分析，并對抗氧化性綜合指標最高的品種建立組織培養體系。結果表明，不同品種的藍靛果忍冬果實中酚類物質對各種氧化自由基均有不同程度的清除能力，其中選育品種C0307抗氧化能力最強。取藍靛果忍冬的枝條進行水培，長出的新芽作為外植體，根據芽的分化率確定誘導形成愈傷組織最佳培養基與激素配比為1/2MS+0.2 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，芽分化率為85%。

關鍵詞：藍靛果忍冬；抗氧化性能；組織培養；酚類物質；愈傷組織；外植體

中圖分類號： Q943.1文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0160-02

收稿日期：2014-05-04

基金項目：公益性行業（農業）科研專項（編號：201103037）。

作者簡介：劉桂伶（1990—），女，碩士，從事園林植物研究。E-mail：178571886@qq.com。

通信作者：閆紹鵬，博士，高級工程師，從事遺傳育種研究。E-mail：ysp_4@126.com。藍靛果忍冬（Lonicera edulis）別稱藍靛果、藍果忍冬，是忍冬科忍冬屬多年生落葉小灌木，主要分布在我國東北（吉林省長白山、黑龍江省大興安嶺東部山區以及內蒙古自治區）、華北、西北、西南（四川省）等地，此外，俄羅斯遠東地區、日本及朝鮮北部等地也都有分布[1]。藍靛果忍冬具有較強的抗寒能力，適應性好，生命力強，果實有很高的營養價值、保健價值，是天然抗氧化劑的良好資源[2]。本研究對不同品種藍靛果忍冬果實的抗氧化性能進行分析，建立了其優良品種組織培養體系，以期為開發利用藍靛果忍冬資源提供依據。

1材料與方法

1.1材料

2012年3月從黑龍江省農業科學院園藝分院漿果園采集了野生品種W0101以及選育品種C0102、C0305、C0307、C0407等5個藍靛果忍冬品種的枝條及果實。

1.2方法

1.2.1藍靛果忍冬果實抗氧化性能測定采用乙醇浸提法從5個藍靛果品種的凍存果實中提取酚類物質，參照徐建國等的方法[3]，采用水楊酸鈉絡合法測定羥自由基清除能力。參照Binsan等的方法[4]，測定ABTS 自由基的清除能力。參照郭艷華等的方法[5]，采用鄰苯三酚自氧化法測定超氧陰離子清除能力。參照張建民等的方法[6]，測定DPPH·的清除能力。羥自由基、ABTS 自由基、超氧陰離子自由基、DPPH·清除率計算公式如下：

C=[1-（D1-D2）/D0]×100%。（1）

式中：C為自由基清除率；D0為未加果實酚類物質提取液的吸光度；D1為加入果實酚類物質提取液的吸光度；D2為空白試劑的吸光度。每個試樣重復3次，取平均值。

1.2.2外植體的選擇及材料滅菌選取抗氧化性能較強的藍靛果忍冬選育品種C0307為材料建立組培體系。將藍靛果忍冬C0307枝條插在水中培養，以萌發的嫩芽為外植體。將萌發芽用無菌水浸泡3～5 min，70%乙醇沖洗10 s，無菌水沖洗6次，0.1% HgCl2浸泡5 min，無菌水沖洗8～10次，用濾紙吸干多余水分。

1.2.3組織培養體系的建立

1.2.3.1誘導培養基的篩選將經過表面消毒的外植體分別接種到MS、1/2MS、WPM培養基上，用于誘導分化愈傷組織及繼代培養[7]。在培養基中分別添加不同濃度的6-BA、NAA、IBA（表1），每處理重復3次，每次重復接種30瓶，30 d后統計各處理藍靛果忍冬芽的分化率，并觀察生長情況。

1.2.3.2生根培養以WPM+NAA 0.5 mg/L為藍靛果忍冬的生根培養基，移栽前將試管苗放于溫室中，打開瓶口，逐漸降低溫度，并逐漸增加光強，隨后移栽。

1.3數據統計

采用DPS7.05軟件進行方差分析及多重比較。

2結果與分析

2.1藍靛果忍冬果實抗氧化性能

具有氧化性自由基的物質在特定波長處有最大吸收峰，多酚類物質可以清除自由基，從而使其在特定波長處的吸光度發生變化。因此，可以通過測定吸光度來反映多酚類物質對自由基的清除能力，進而測定藍靛果忍冬果實中酚類物質的抗氧化能力。從表2可以看出，不同品種的藍靛果忍冬果實中的酚類物質均能一定程度上削弱鄰苯三酚的自氧化，對超氧陰離子都有一定的清除作用，其中野生型品種W0101、選育品種C0370對超氧陰離子清除能力較強，清除率分別達到37.14%、31.48%。選育品種C0307、野生型品種W0101對羥自由基清除能力也較強，清除率分別為44.44%、3907% 。野生型品種W0101、選育品種C0307對 DPPH· 清除能力較強，清除率均達到50%以上；選育品種C0102對DPPH·清除能力次之；選育品種0305對DPPH·清除能力最弱。將藍靛果忍冬凍存果實酚類物質提取液加入DPPH·溶液中，DPPH·混合液的顏色逐漸變淺，顏色越淺意味著對DPPH·清除能力越強。ABTS 是抗氧化試驗中常用的自由基，不同品種藍靛果忍冬凍存果實酚類物質提取液對ABTS自由基的抑制作用均在50%左右，選育品種C0305、C0307對ABTS自由基清除能力較強，清除率分別為51.77%、5036%。

2.2藍靛果忍冬組培體系建立

2.2.1基本培養基及激素配比對于外植體誘導分化的影響由表3可知，在其他組分條件相同、培養基條件不同的情況下，4～6組分化率大于1～3、7～9組，說明1/2 MS培養基比MS培養基、WPM培養基誘導分化形成愈傷組織效果好。在培養基一致情況下，5組的分化率最高，達85%，增殖倍數為7.8倍，表明1/2MS+0.2 mg/L IBA+30 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA誘導分化形成愈傷組織效果好，確定此為最佳誘導分化的培養基與激素配比。

2.2.2生根培養當苗高1.5～2.0 cm時，切取單芽分別轉接于生根培養基進行培養，培養20 d左右開始長出淺綠色的根，生根率達95%以上，說明控制藍靛果忍冬試管苗生根的主要因素是 NAA，且NAA濃度為 0.5 mg/L時，植株生根狀況最好。由于根粗壯、生根數少，生根狀況好的苗木較易成活，因此選擇培養基1/2MS+NAA 0.5 mg/L為藍靛果忍冬的生根培養基。圖1為選育品種C0307藍靛果忍冬的組培體系建立過程。

3結論與討論

不同品種的藍靛果忍冬果實中酚類物質對各種自由基的清除能力不同。野生型品種W0101、選育品種C0370對超氧陰離子清除能力較強，清除率分別達到37.14%、31.48%。選育品種C0307、野生型品種W0101對羥自由基清除能力也較強，清除率分別為44.44%、39.07% 。野生型品種W0101、選育品種C0307對DPPH·清除能力較強，清除率均達到50%以上；選育品種C0102對DPPH·清除能力次之；選育品種0305對DPPH·清除能力最弱。綜合以上各項指標，確定選擇選育品種C0307進行藍靛果忍冬組培體系建立。根據芽分化率確定誘導形成愈傷組織最佳培養基與激素配比為1/2MS+0.2 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，芽分化率為85%。用1/2MS+0.5 mg/L NAA作為藍靛果忍冬的生根培養基，生根效果較好。

參考文獻：

[1]周以良，董世林，聶紹荃. 黑龍江樹木志[M]. 哈爾濱：黑龍江科學技術出版社，1986：525.

[2]Wang H C，Prior R L. Total antioxidant capacity of fruits[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，1996，44（3）：701-705.

[3]徐建國，胡青平. 決明子水提物體外清除自由基活性的研究[J]. 食品科學，2006，27（6）：73-76.

[4]Binsan W，Benjakul S，Visessanguan W，et al. Antioxidative activity of Mungoong，an extract paste，from the cephalothorax of white shrimp （Litopenaeus vannamei）[J]. Food Chemistry，2008，106（1）：185-193.

[5]郭艷華，胡思前. 荸薺皮提取物的抗氧化活性研究[J]. 食品與發酵工業，2007，33（10）：128-130.

[6]張建民，肖小年，易醒，等. 車前草可溶性膳食纖維的提取及其對自由基清除能力的研究[J]. 天然產物研究與開發，2007，19（4）：667-670.

[7]李桂君，李艷霞，盧慧穎，等. 俄羅斯耐寒藍靛果忍冬組織培養技術研究[J]. 林業科技，2012，37（4）：4-6.姚嵐，周軍，崔懷飛. 沙家浜濕地公園景觀規劃設計分析[J]. 江蘇農業科學，2014，42（9）：162-167.

2.2.2生根培養當苗高1.5～2.0 cm時，切取單芽分別轉接于生根培養基進行培養，培養20 d左右開始長出淺綠色的根，生根率達95%以上，說明控制藍靛果忍冬試管苗生根的主要因素是 NAA，且NAA濃度為 0.5 mg/L時，植株生根狀況最好。由于根粗壯、生根數少，生根狀況好的苗木較易成活，因此選擇培養基1/2MS+NAA 0.5 mg/L為藍靛果忍冬的生根培養基。圖1為選育品種C0307藍靛果忍冬的組培體系建立過程。

3結論與討論

不同品種的藍靛果忍冬果實中酚類物質對各種自由基的清除能力不同。野生型品種W0101、選育品種C0370對超氧陰離子清除能力較強，清除率分別達到37.14%、31.48%。選育品種C0307、野生型品種W0101對羥自由基清除能力也較強，清除率分別為44.44%、39.07% 。野生型品種W0101、選育品種C0307對DPPH·清除能力較強，清除率均達到50%以上；選育品種C0102對DPPH·清除能力次之；選育品種0305對DPPH·清除能力最弱。綜合以上各項指標，確定選擇選育品種C0307進行藍靛果忍冬組培體系建立。根據芽分化率確定誘導形成愈傷組織最佳培養基與激素配比為1/2MS+0.2 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，芽分化率為85%。用1/2MS+0.5 mg/L NAA作為藍靛果忍冬的生根培養基，生根效果較好。

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[4]Binsan W，Benjakul S，Visessanguan W，et al. Antioxidative activity of Mungoong，an extract paste，from the cephalothorax of white shrimp （Litopenaeus vannamei）[J]. Food Chemistry，2008，106（1）：185-193.

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[7]李桂君，李艷霞，盧慧穎，等. 俄羅斯耐寒藍靛果忍冬組織培養技術研究[J]. 林業科技，2012，37（4）：4-6.姚嵐，周軍，崔懷飛. 沙家浜濕地公園景觀規劃設計分析[J]. 江蘇農業科學，2014，42（9）：162-167.

2.2.2生根培養當苗高1.5～2.0 cm時，切取單芽分別轉接于生根培養基進行培養，培養20 d左右開始長出淺綠色的根，生根率達95%以上，說明控制藍靛果忍冬試管苗生根的主要因素是 NAA，且NAA濃度為 0.5 mg/L時，植株生根狀況最好。由于根粗壯、生根數少，生根狀況好的苗木較易成活，因此選擇培養基1/2MS+NAA 0.5 mg/L為藍靛果忍冬的生根培養基。圖1為選育品種C0307藍靛果忍冬的組培體系建立過程。

3結論與討論

不同品種的藍靛果忍冬果實中酚類物質對各種自由基的清除能力不同。野生型品種W0101、選育品種C0370對超氧陰離子清除能力較強，清除率分別達到37.14%、31.48%。選育品種C0307、野生型品種W0101對羥自由基清除能力也較強，清除率分別為44.44%、39.07% 。野生型品種W0101、選育品種C0307對DPPH·清除能力較強，清除率均達到50%以上；選育品種C0102對DPPH·清除能力次之；選育品種0305對DPPH·清除能力最弱。綜合以上各項指標，確定選擇選育品種C0307進行藍靛果忍冬組培體系建立。根據芽分化率確定誘導形成愈傷組織最佳培養基與激素配比為1/2MS+0.2 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，芽分化率為85%。用1/2MS+0.5 mg/L NAA作為藍靛果忍冬的生根培養基，生根效果較好。

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[4]Binsan W，Benjakul S，Visessanguan W，et al. Antioxidative activity of Mungoong，an extract paste，from the cephalothorax of white shrimp （Litopenaeus vannamei）[J]. Food Chemistry，2008，106（1）：185-193.

[5]郭艷華，胡思前. 荸薺皮提取物的抗氧化活性研究[J]. 食品與發酵工業，2007，33（10）：128-130.

[6]張建民，肖小年，易醒，等. 車前草可溶性膳食纖維的提取及其對自由基清除能力的研究[J]. 天然產物研究與開發，2007，19（4）：667-670.

[7]李桂君，李艷霞，盧慧穎，等. 俄羅斯耐寒藍靛果忍冬組織培養技術研究[J]. 林業科技，2012，37（4）：4-6.姚嵐，周軍，崔懷飛. 沙家浜濕地公園景觀規劃設計分析[J]. 江蘇農業科學，2014，42（9）：162-167.