NCOA—1基因型對長白豬繁殖性能的影響

摘要：利用PCR-RFLP技術，檢測101頭長白豬NCOA-1基因多態性，并分析其與繁殖性狀的關系。結果表明，NCOA-1基因AA、AB、BB基因型頻率分別為0.500、0.335、0.165；NCOA-1基因中BB型在窩產仔數和窩產仔活數、初生窩重和斷奶窩重與AA型、AB型有顯著性差異（P<0.05）。

關鍵詞：長白豬；NCOA-1；繁殖；性能

中圖分類號： S828.3文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0175-03

收稿日期：2013-11-20

基金項目：國家自然科學基金（編號：30901014，31060295）。

作者簡介：魯慧文（1987—），男，黑龍江綏化人，碩士，研究方向為農業推廣（養殖）。E-mail：lhw0417@126.com。

通信作者：黃濤，副教授，從事豬分子遺傳育種研究。E-mail：taohuang100@sina.com。豬的繁殖性能是一類重要的經濟性狀，其好壞直接影響豬場的經濟效益。繁殖性能屬于限性表達的低遺傳力性狀，運用常規的育種方法對該類性狀進行改良進展緩慢，從分子水平上尋找控制豬產仔數的主基因并應用到育種實踐中成為可能。核受體/類固醇輔激活因子1（NCOA-1/SRC-1）是p160類固醇受體輔激活因子（SRC）家族中的一員，有研究表明，SRC家族在發育、體生長、類固醇激素應答、新陳代謝、繁殖、心血管系統和炎性反應中有獨特的生物學功能[1-2]。NCOA-1作為轉錄輔助激活因子，是第1個被發現的類固醇受體[3]，核受體輔助活化因子1（NCOA-1）是細胞核激素受體的輔助激活劑，這些受體有雌性激素、孕酮受體和某些其他轉錄因子如Ets-2和PEA3[4]。NCOA-1敲除的小鼠展現正常的發育能力和體軀生長，但顯示部分激素抑制類固醇和甲狀腺激素、延遲浦肯野細胞的發育、降低雌激素依賴的血管保護、出現多種代謝異常[5-9]。另有研究發現，NCOA-1表達異常是引起乳腺癌的誘因[4，10]。

NCOA-1是豬繁殖性狀候選基因，研究表明，其多態性與豬的產仔數可能有關聯，定位于豬3號染色體上，豬的NCOA-1基因總共有97 681 bp，含有19個外顯子，其cDNA長度為4 451 bp。核受體輔激活蛋白通過與結合到DNA上的核受體相互作用并增強轉錄活性[11]，受到影響的雄激素受體、雌激素受體等在動物的生長發育和繁殖等生理過程起到重要作用[12]。NCOA-1蛋白不僅增強了雌激素受體的活性，而且反過來刺激特定的雌激素反應基因的轉錄，調節隨后的生理反應[13]。國外學者已經對NCOA-1基因與豬多產性的相關性進行研究，將其定位于SSC3，稱其是繁殖性狀的“開關”[14]。NCOA-1基因在對不同品種或不同地區母豬群體研究得到的結果不盡相同，本研究擬分析NCOA-1基因對新疆地區長白豬繁殖力性狀的遺傳效應，為該候選基因的選種應用積累數據，以期為分子標記輔助選擇育種提供依據。

1材料與方法

1.1試驗材料

試驗豬均來自新疆農八師142團豬場，用隨機抽樣法選擇有完整繁殖性狀記錄的長白母豬101頭進行活體采樣，同時收集試驗母豬的窩產仔數、窩產活仔數、胎次、初生窩重和斷奶窩重等資料。

1.2主要儀器和試劑

主要儀器：RT-PCR儀、DYY-4穩流穩壓電泳儀、恒溫水浴鍋、臺式恒溫振蕩器、電泳凝膠成像系統、微波爐、臺式高速離心機；主要試劑：Taq DNA聚合酶、蛋白酶K及DNA限制性內切酶RsaⅠ，均購自TaKaRa。

1.3試驗方法

1.3.1基因組DNA的提取采用酚-氯仿常規提取法提取基因組DNA。

1.3.2引物的設計與合成根據豬NCOA-1基因序列設計引物，由上海生工生物有限公司合成。引物序列為：F-5′-AGGGGCTACCCTCCTGTAAG-3′；R-5′-CTTCTCTGCCAGTTCTCCAGTC-3′。

1.3.3PCR擴增PCR反應總體系為25 μL，包括：10×buffer 2.5 μL，dNTP 2 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.5 μL，50 ng/μL模板DNA 0.8 μL，Taq酶0.3 uL，MgCl2 3 μL，ddH2O 15.4 μL。反應條件為：94 ℃變性4 min；94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s 35次循環；72 ℃延伸5 min，4 ℃保存。

1.3.4NCOA-1基因擴增產物的酶切8.5 μL PCR產物加入0.5 μL RsaⅠ及1 μL buffer，37 ℃水浴3 h，酶切產物用15%的瓊脂糖電泳檢測分型。

1.3.5數據處理采用Excel和SPSS軟件分析數據，并參考徐迎寧等的處理模型[15]。基因型數據：NCOA-1、AA、AB、BB；繁殖性狀：窩產仔數、窩產活仔數、初生窩重、斷奶窩重；模型（基因的獨立效應模型）：yi=μ+αi+ei，其中，yi為性狀值，μ為總體平均數，αi為基因型效應值（i=AA、AB、BB），ei為隨機誤差。

2結果與分析

2.1NCOA-1基因擴增結果

NCOA-1基因PCR擴增后經1.5%瓊脂糖凝膠電泳，檢測到1條長約408 bp的清晰條帶（圖1）。

2.2PCR擴增產物酶切結果

由圖2可見，各基因型條帶清晰。

2.3NCOA-1基因的基因頻率和基因型頻率

根據檢測樣品的基因型及檢出總數，計算NCOA-1各基因型在長白豬群體中的頻率和等位基因頻率。由表1可知，NCOA-1基因的基因型頻率是AA>AB>BB，優勢基因型頻率為AA，達到0.500；基因頻率A>B。表1NCOA-1基因的基因頻率和基因型頻率endprint

品種樣本數

（頭）基因型分布（頭）基因型頻率基因頻率AAABBBAAABBBAB長白1015034170.500 00.335 00.165 00.667 50.332 5

2.4NCOA-1基因對豬基因效應的影響

由表2可見，在初產母豬中，NCOA-1各基因型之間窩產仔數差異顯著（P<0.05），各基因型之間窩產活仔數差異顯著（P<0.05），其中，AB基因型母豬的窩產仔數、窩產活仔數最多；在經產母豬中，NCOA-1各基因型之間窩產仔數差異顯著（P<0.05），各基因型之間窩產活仔數差異顯著（P<005），其中，AA基因型母豬的窩產仔數、窩產活仔數最多；在所有胎次中，NCOA-1各基因型之間窩產仔數和窩產活仔數差異均達到顯著水平（P<0.05）；AA基因型的窩產仔數、窩產活仔數為最多。

由表3可見，初產母豬、經產母豬和所有胎次中，NCOA-1基因各基因型之間初生窩重和斷奶窩重的差異均顯著（P<0.05）；AA型母豬比AB、BB型母豬所產的初生窩重、斷奶窩重都高。

3小結與討論

通過NCOA-1分別對長白豬繁殖性狀的統計分析，表明NCOA-1基因對長白豬窩產仔數、窩產活仔數、初生窩重、 斷奶窩重等繁殖性狀，無論在初產、經產還是所有胎次中都有顯著影響。

核受體輔激活蛋白1（NCOA-1）基因的產物核受體輔激活蛋白與結合在DNA上的雌激素受體相互作用并加強其轉錄活性。施啟順等研究表明，NCOA-1基因RsaⅠ酶切多態性對母豬產仔性狀有顯著影響，在窩產仔數和窩產活仔數上都出現AA>AB>BB趨勢，基因型間差異極顯著（P<0.01）[16]，本研究結果和施啟順等報道基本一致。NCOA-1基因大部分AA和BB、AB和BB差異顯著，如該基因TNB加性效應為0.33，NBA加性效應為1.38，與Melville等報道結果[17]基本一致。總之，試驗結果表明，NCOA-1中AA為優勢基因，這可以為今后的生產研究提供良好的選擇方向。

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