超高效液相色譜測定雞飼料中的5種類胡蘿卜素添加劑

摘要：研究并建立了雞飼料中角黃素、蝦青素等5種類胡蘿卜素的超高效液相色譜分析法。采用乙腈提取飼料樣品后，將提取液直接進行進樣分析。色譜柱為Waters BEH C18 （1.7 m，2.1 mm×100 mm）；流動相為0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液，采用梯度洗脫；檢測波長450 nm；流速0.25 mL/min。結果表明，5種類胡蘿卜素在 50～500 ng/mL范圍內呈良好的線性關系，檢測限為0.01～0.10 mg/kg，定量限為0.03～0.40 mg/kg，回收率80%～105%，精密度小于15%，說明超高效液相色譜分析法操作簡便，適宜用于測定雞飼料中的類胡蘿卜素。

關鍵詞：類胡蘿卜素；飼料；超高效液相色譜

中圖分類號： O657.7+2文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0273-03

收稿日期：2013-12-04

基金項目：江蘇省“六大人才高峰”高層次人才項目（編號：NY-062）。

作者簡介：曲斌（1979—），男，遼寧盤錦人，博士，獸醫師，研究方向為獸藥殘留分析新技術與新方法。E-mail：qubin2000@hotmail.com。類胡蘿卜素（carotenoids）是一類聚異戊二烯類天然色素，廣泛存在于植物、動物和微生物中，其分子結構中含有大量的共軛雙鍵，在分子鏈的末端具有線性或環狀基團，末端基團、含氧官能團以及氫化作用的強弱不同產生了大量結構不同的類胡蘿卜素，常見的有蝦青素（astaxanthin）、角黃素（canthaxanthin）、β-阿樸-8′-胡蘿卜醛（β-apo-8′-carotenal）、β-隱黃素（β-cryptoxanthin）、β-胡蘿卜素（β-carotene）等[1]。類胡蘿卜素具有抑制多不飽和脂肪酸的氧化、改善視力、提高免疫力、促進色素形成等重要的生物學功能，目前常被添加到禽類或水產動物的飼料中來改善禽蛋產品或水產品的色澤，使其具有誘人的顏色，從而提高產品的商業價值。近年來，不法商家為了謀求經濟利益超量使用類胡蘿卜素，使得某些產品中類胡蘿卜素添加過量，而科學研究也發現，過量食用類胡蘿卜素對人體具有一定的副作用，特別是其中的角黃素，因此，歐盟修正了角黃素的最大殘留限量值為15 mg/kg（除蛋雞外的家禽肝臟）、30 mg/kg（蛋雞蛋黃）[2]、8 mg/kg （產蛋母雞用飼料）[3]。我國農業部第1126號公告僅規定允許角黃素、蝦青素、β-胡蘿卜素等在家禽或水產動物中使用，但未明確提出飼料中的允許限量[4]。因此，從源頭控制產品質量，建立飼料中類胡蘿卜素的分析測定方法具有重要意義。本研究采用高效液相色譜分析法測定三黃雞飼料中的類胡蘿卜素類色素添加劑，以期建立雞飼料中類胡蘿卜素的多種組分測定方法。

1材料與方法

1.1試驗儀器

超高效液相色譜儀（UPLC）：Waters Acquity 超高效液相色譜系統（含高壓二元泵、自動進樣器、柱溫箱、TUV紫外可見波長檢測器、Empower2數據處理系統）；KS 501振蕩器，IKA公司；Sigma 3K30離心機，Sartorius公司。

1.2材料與試劑

對照品：蝦青素、角黃素、β-阿樸-8′-胡蘿卜醛、β-隱黃素、β-胡蘿卜素，Sigma公司、Dr. Ehrenstorfer公司；色譜純乙腈，Fisher公司；色譜純甲酸，Tedia公司；分析純乙腈，南京化學試劑有限公司；化學純2，6-二叔丁基對甲酚（BHT），百靈威公司；純凈水；PTFE（30 mm×0.45 μm）針式過濾器，National Scientific公司。

1.3試驗方法

1.3.1對照品溶液的配置取適量上述5種對照品，精確稱定后置于棕色容量瓶中，用含1%BHT的丙酮溶解并稀釋定容，得100 g/mL的對照品溶液，于-18 ℃避光保存。

1.3.2工作液的配置取適量對照品溶液，用乙腈稀釋，分別制得50、100、150、200、250、375、500 ng/mL的工作液。

1.3.3色譜條件色譜柱：Waters BEH C18柱，1.7 μm，2.1 mm×100 mm；流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：01%甲酸乙腈溶液；梯度洗脫：0→5 min，90% B→90% B，5→6 min，90% B→95%B，6→13 min，95%B→95%B，13→135 min，95%B→100%B，13.5→40 min，100%B→100%B，40→40.5 min，100%B→90%B，40.5→45 min，90%B→90%B，流速0.25 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL；檢測波長：450 nm。

1.3.4工作曲線按工作液濃度由小到大依次在UPLC進樣分析，以色譜峰面積對濃度作圖，計算線性方程和回歸系數。

1.3.5樣品處理稱取5 g雞飼料樣品，置于50 mL聚丙烯離心管中，加入20 mL乙腈，高速振蕩30 min，5 ℃、10 000 r/min 離心5 min，取上清液，經0.45 μm PTFE微孔濾膜過濾至進樣瓶中，UPLC分析測定。

2結果與分析

2.1專屬性分析

5種類胡蘿卜素對照品溶液的色譜圖見圖1，空白飼料的色譜圖見圖2，飼料中陽性添加的色譜圖見圖3，某批次真實檢出的飼料樣品的色譜圖見圖4。

2.2標準曲線

5種類胡蘿卜素的標準曲線線性方程見表1。endprint

摘要：研究并建立了雞飼料中角黃素、蝦青素等5種類胡蘿卜素的超高效液相色譜分析法。采用乙腈提取飼料樣品后，將提取液直接進行進樣分析。色譜柱為Waters BEH C18 （1.7 m，2.1 mm×100 mm）；流動相為0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液，采用梯度洗脫；檢測波長450 nm；流速0.25 mL/min。結果表明，5種類胡蘿卜素在 50～500 ng/mL范圍內呈良好的線性關系，檢測限為0.01～0.10 mg/kg，定量限為0.03～0.40 mg/kg，回收率80%～105%，精密度小于15%，說明超高效液相色譜分析法操作簡便，適宜用于測定雞飼料中的類胡蘿卜素。

關鍵詞：類胡蘿卜素；飼料；超高效液相色譜

中圖分類號： O657.7+2文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0273-03

收稿日期：2013-12-04

基金項目：江蘇省“六大人才高峰”高層次人才項目（編號：NY-062）。

作者簡介：曲斌（1979—），男，遼寧盤錦人，博士，獸醫師，研究方向為獸藥殘留分析新技術與新方法。E-mail：qubin2000@hotmail.com。類胡蘿卜素（carotenoids）是一類聚異戊二烯類天然色素，廣泛存在于植物、動物和微生物中，其分子結構中含有大量的共軛雙鍵，在分子鏈的末端具有線性或環狀基團，末端基團、含氧官能團以及氫化作用的強弱不同產生了大量結構不同的類胡蘿卜素，常見的有蝦青素（astaxanthin）、角黃素（canthaxanthin）、β-阿樸-8′-胡蘿卜醛（β-apo-8′-carotenal）、β-隱黃素（β-cryptoxanthin）、β-胡蘿卜素（β-carotene）等[1]。類胡蘿卜素具有抑制多不飽和脂肪酸的氧化、改善視力、提高免疫力、促進色素形成等重要的生物學功能，目前常被添加到禽類或水產動物的飼料中來改善禽蛋產品或水產品的色澤，使其具有誘人的顏色，從而提高產品的商業價值。近年來，不法商家為了謀求經濟利益超量使用類胡蘿卜素，使得某些產品中類胡蘿卜素添加過量，而科學研究也發現，過量食用類胡蘿卜素對人體具有一定的副作用，特別是其中的角黃素，因此，歐盟修正了角黃素的最大殘留限量值為15 mg/kg（除蛋雞外的家禽肝臟）、30 mg/kg（蛋雞蛋黃）[2]、8 mg/kg （產蛋母雞用飼料）[3]。我國農業部第1126號公告僅規定允許角黃素、蝦青素、β-胡蘿卜素等在家禽或水產動物中使用，但未明確提出飼料中的允許限量[4]。因此，從源頭控制產品質量，建立飼料中類胡蘿卜素的分析測定方法具有重要意義。本研究采用高效液相色譜分析法測定三黃雞飼料中的類胡蘿卜素類色素添加劑，以期建立雞飼料中類胡蘿卜素的多種組分測定方法。

1材料與方法

1.1試驗儀器

超高效液相色譜儀（UPLC）：Waters Acquity 超高效液相色譜系統（含高壓二元泵、自動進樣器、柱溫箱、TUV紫外可見波長檢測器、Empower2數據處理系統）；KS 501振蕩器，IKA公司；Sigma 3K30離心機，Sartorius公司。

1.2材料與試劑

對照品：蝦青素、角黃素、β-阿樸-8′-胡蘿卜醛、β-隱黃素、β-胡蘿卜素，Sigma公司、Dr. Ehrenstorfer公司；色譜純乙腈，Fisher公司；色譜純甲酸，Tedia公司；分析純乙腈，南京化學試劑有限公司；化學純2，6-二叔丁基對甲酚（BHT），百靈威公司；純凈水；PTFE（30 mm×0.45 μm）針式過濾器，National Scientific公司。

1.3試驗方法

1.3.1對照品溶液的配置取適量上述5種對照品，精確稱定后置于棕色容量瓶中，用含1%BHT的丙酮溶解并稀釋定容，得100 g/mL的對照品溶液，于-18 ℃避光保存。

1.3.2工作液的配置取適量對照品溶液，用乙腈稀釋，分別制得50、100、150、200、250、375、500 ng/mL的工作液。

1.3.3色譜條件色譜柱：Waters BEH C18柱，1.7 μm，2.1 mm×100 mm；流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：01%甲酸乙腈溶液；梯度洗脫：0→5 min，90% B→90% B，5→6 min，90% B→95%B，6→13 min，95%B→95%B，13→135 min，95%B→100%B，13.5→40 min，100%B→100%B，40→40.5 min，100%B→90%B，40.5→45 min，90%B→90%B，流速0.25 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL；檢測波長：450 nm。

1.3.4工作曲線按工作液濃度由小到大依次在UPLC進樣分析，以色譜峰面積對濃度作圖，計算線性方程和回歸系數。

1.3.5樣品處理稱取5 g雞飼料樣品，置于50 mL聚丙烯離心管中，加入20 mL乙腈，高速振蕩30 min，5 ℃、10 000 r/min 離心5 min，取上清液，經0.45 μm PTFE微孔濾膜過濾至進樣瓶中，UPLC分析測定。

2結果與分析

2.1專屬性分析

5種類胡蘿卜素對照品溶液的色譜圖見圖1，空白飼料的色譜圖見圖2，飼料中陽性添加的色譜圖見圖3，某批次真實檢出的飼料樣品的色譜圖見圖4。

2.2標準曲線

5種類胡蘿卜素的標準曲線線性方程見表1。endprint

摘要：研究并建立了雞飼料中角黃素、蝦青素等5種類胡蘿卜素的超高效液相色譜分析法。采用乙腈提取飼料樣品后，將提取液直接進行進樣分析。色譜柱為Waters BEH C18 （1.7 m，2.1 mm×100 mm）；流動相為0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液，采用梯度洗脫；檢測波長450 nm；流速0.25 mL/min。結果表明，5種類胡蘿卜素在 50～500 ng/mL范圍內呈良好的線性關系，檢測限為0.01～0.10 mg/kg，定量限為0.03～0.40 mg/kg，回收率80%～105%，精密度小于15%，說明超高效液相色譜分析法操作簡便，適宜用于測定雞飼料中的類胡蘿卜素。

關鍵詞：類胡蘿卜素；飼料；超高效液相色譜

中圖分類號： O657.7+2文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0273-03

收稿日期：2013-12-04

基金項目：江蘇省“六大人才高峰”高層次人才項目（編號：NY-062）。

作者簡介：曲斌（1979—），男，遼寧盤錦人，博士，獸醫師，研究方向為獸藥殘留分析新技術與新方法。E-mail：qubin2000@hotmail.com。類胡蘿卜素（carotenoids）是一類聚異戊二烯類天然色素，廣泛存在于植物、動物和微生物中，其分子結構中含有大量的共軛雙鍵，在分子鏈的末端具有線性或環狀基團，末端基團、含氧官能團以及氫化作用的強弱不同產生了大量結構不同的類胡蘿卜素，常見的有蝦青素（astaxanthin）、角黃素（canthaxanthin）、β-阿樸-8′-胡蘿卜醛（β-apo-8′-carotenal）、β-隱黃素（β-cryptoxanthin）、β-胡蘿卜素（β-carotene）等[1]。類胡蘿卜素具有抑制多不飽和脂肪酸的氧化、改善視力、提高免疫力、促進色素形成等重要的生物學功能，目前常被添加到禽類或水產動物的飼料中來改善禽蛋產品或水產品的色澤，使其具有誘人的顏色，從而提高產品的商業價值。近年來，不法商家為了謀求經濟利益超量使用類胡蘿卜素，使得某些產品中類胡蘿卜素添加過量，而科學研究也發現，過量食用類胡蘿卜素對人體具有一定的副作用，特別是其中的角黃素，因此，歐盟修正了角黃素的最大殘留限量值為15 mg/kg（除蛋雞外的家禽肝臟）、30 mg/kg（蛋雞蛋黃）[2]、8 mg/kg （產蛋母雞用飼料）[3]。我國農業部第1126號公告僅規定允許角黃素、蝦青素、β-胡蘿卜素等在家禽或水產動物中使用，但未明確提出飼料中的允許限量[4]。因此，從源頭控制產品質量，建立飼料中類胡蘿卜素的分析測定方法具有重要意義。本研究采用高效液相色譜分析法測定三黃雞飼料中的類胡蘿卜素類色素添加劑，以期建立雞飼料中類胡蘿卜素的多種組分測定方法。

1材料與方法

1.1試驗儀器

超高效液相色譜儀（UPLC）：Waters Acquity 超高效液相色譜系統（含高壓二元泵、自動進樣器、柱溫箱、TUV紫外可見波長檢測器、Empower2數據處理系統）；KS 501振蕩器，IKA公司；Sigma 3K30離心機，Sartorius公司。

1.2材料與試劑

對照品：蝦青素、角黃素、β-阿樸-8′-胡蘿卜醛、β-隱黃素、β-胡蘿卜素，Sigma公司、Dr. Ehrenstorfer公司；色譜純乙腈，Fisher公司；色譜純甲酸，Tedia公司；分析純乙腈，南京化學試劑有限公司；化學純2，6-二叔丁基對甲酚（BHT），百靈威公司；純凈水；PTFE（30 mm×0.45 μm）針式過濾器，National Scientific公司。

1.3試驗方法

1.3.1對照品溶液的配置取適量上述5種對照品，精確稱定后置于棕色容量瓶中，用含1%BHT的丙酮溶解并稀釋定容，得100 g/mL的對照品溶液，于-18 ℃避光保存。

1.3.2工作液的配置取適量對照品溶液，用乙腈稀釋，分別制得50、100、150、200、250、375、500 ng/mL的工作液。

1.3.3色譜條件色譜柱：Waters BEH C18柱，1.7 μm，2.1 mm×100 mm；流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：01%甲酸乙腈溶液；梯度洗脫：0→5 min，90% B→90% B，5→6 min，90% B→95%B，6→13 min，95%B→95%B，13→135 min，95%B→100%B，13.5→40 min，100%B→100%B，40→40.5 min，100%B→90%B，40.5→45 min，90%B→90%B，流速0.25 mL/min；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL；檢測波長：450 nm。

1.3.4工作曲線按工作液濃度由小到大依次在UPLC進樣分析，以色譜峰面積對濃度作圖，計算線性方程和回歸系數。

1.3.5樣品處理稱取5 g雞飼料樣品，置于50 mL聚丙烯離心管中，加入20 mL乙腈，高速振蕩30 min，5 ℃、10 000 r/min 離心5 min，取上清液，經0.45 μm PTFE微孔濾膜過濾至進樣瓶中，UPLC分析測定。

2結果與分析

2.1專屬性分析

5種類胡蘿卜素對照品溶液的色譜圖見圖1，空白飼料的色譜圖見圖2，飼料中陽性添加的色譜圖見圖3，某批次真實檢出的飼料樣品的色譜圖見圖4。

2.2標準曲線

5種類胡蘿卜素的標準曲線線性方程見表1。endprint