白菜葉綠素含量的測定方法篩選

牟建梅等

摘要：以白菜品種蘇州青、華王為試驗材料，研究95%乙醇，80%丙酮，V乙醇 ∶V丙酮=1 ∶1、2 ∶1、1 ∶2，V乙醇 ∶V丙酮 ∶V水=4.5 ∶4.5 ∶1 6種提取液對白菜葉片葉綠素提取效果的影響，并測定葉綠素在這6種不同提取液中的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，葉綠素提取效果較好的為V乙醇 ∶V丙酮=1 ∶1、1 ∶2 的浸提液。葉綠素的穩(wěn)定性測定結(jié)果表明，浸提48 h后穩(wěn)定性較好，提取最為充分。

關(guān)鍵詞：白菜；葉綠素；穩(wěn)定性；浸提；乙醇；丙酮；吸光度

中圖分類號： S634.301文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0289-02

收稿日期：2013-12-12

基金項目：江蘇省蘇州市應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃（編號：SYN201326）。

作者簡介：牟建梅（1975—），女，遼寧康平人，副研究員，研究方向為蔬菜育種及安全高效生產(chǎn)技術(shù)。Tel：（0512）65386213。E-mail：244823091@qq.com。

通信作者：張國芹，助理研究員，研究方向為蔬菜栽培生理。E-mail：guoqin1981@163.com。葉綠素是植物葉片進行光合作用的主要色素，葉綠素含量是植物生理研究中的重要指標。生產(chǎn)中也往往根據(jù)葉色變化作為看苗診斷和采取施肥措施的重要指標。葉綠素含量測定方法主要有分光光度計法、活體葉綠素儀法和光聲光譜法。但用手持葉綠素儀或光譜分析儀測得的是色素相對含量指標，并且不同種類植物葉片中的色素指標與實際葉綠素含量之間的關(guān)系方程式不同，即不能用同一種色素指標關(guān)系來轉(zhuǎn)換不同植物的色素含量[1]。在日常試驗中以分光光度計法應(yīng)用最為廣泛。另外，根據(jù)所用提取溶劑不同又有多種測定方法，早期葉綠素測定廣泛采用Arnon法。但該方法由于需要先研磨后除渣，工作量大、步驟多且易受光氧化而引起偏差，不適宜田間大量樣品的提取和測定。張憲政提出了丙酮、乙醇混合液法浸提葉綠素，證明利用混合液進行葉綠素浸提的可行性[2]；洪法水等發(fā)現(xiàn)，丙酮與乙醇混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng)，且二者在等摩爾混合時提取效果最好[3]；徐芬芬等研究認為，丙酮與乙醇體積比1 ∶1混合液浸提白菜葉綠素效果最好[4]；而麻明友等發(fā)現(xiàn)，丙酮與乙醇體積比2 ∶1的混合液浸提獼猴桃葉片葉綠素效果較好[5]。

白菜（Brassica campestris ssp. chinensis Makino）別稱不結(jié)球白菜、青菜、油菜等，是原產(chǎn)于我國的、重要的葉菜類作物，在長江中下游及以南廣泛栽培，可周年生產(chǎn)，具有極大的經(jīng)濟價值。葉綠素是葉菜類作物重要生長指標，準確地測定其含量可為葉菜類生長發(fā)育以及逆境脅迫等試驗提供基礎(chǔ)。為了探討實現(xiàn)白菜葉片葉綠素提取并能盡量避免光分解，建立適合大量樣品的葉綠素提取及其含量測定方法的可能性和科學性，本試驗以蘇州青、華王2個白菜品種為試材，就不同比例的丙酮與乙醇混合溶液提取測定白菜葉片中葉綠素含量及其穩(wěn)定性進行比較分析，為白菜田間大樣本葉綠素含量測定提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

2個白菜品種為蘇州青和華王。將新鮮白菜葉片洗凈，用吸水紙吸干表面水分，去除大葉脈后，將葉片剪碎成約 0.2 cm×1.0 cm 的小細絲，混勻備用。

1.2儀器與試劑

試驗用752s紫外可見分光光度計測定吸光度。丙酮、乙醇等試劑均為分析純，試驗用水為超純水。

1.3試驗方法

1.3.1浸提試驗按體積比配制浸提液，設(shè)6個處理：處理1，95%乙醇；處理2，80%丙酮；

2結(jié)果與分析

2.1不同浸提液對白菜葉綠素提取效果的影響

2.2不同提取液對葉綠素穩(wěn)定性的影響

用不同浸提溶劑提取白菜葉片葉綠素含量，其穩(wěn)定性結(jié)果見表2、表3。從表2、表3可以看出，2種白菜的葉綠素a和總?cè)~綠素含量均在第2天達到最大值。處理3、處理4、處理5中葉綠素b含量均在第3天達最大，但與第2天結(jié)果相差不大。蘇州青葉綠素含量的測定結(jié)果顯示，第3天葉綠素a含量比第2天低17.3%～22.2%，致使總?cè)~綠素含量均在第3天下降，說明葉綠素a相對容易降解。同時，試驗也表明葉綠素提取液不適宜長時間放置。

3結(jié)論與討論

室溫下，采用不同比例的丙酮、乙醇混合溶劑提取小白菜葉片中葉綠素。試驗結(jié)果表明，混合液提取法所得葉綠素含量高于單一溶液提取，其中以混合液V乙醇 ∶V丙酮= 1 ∶1、1 ∶2效果最好，并且這2個處理間差異不顯著。乙醇與丙酮混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng)，這與洪法水等在菠菜、獼猴桃及菜心上的研究結(jié)果一致[3，5-6]。

隨著測定時間的延長，葉綠素a降解值在各種提取液中均遠遠大于葉綠素b。這與郭勝偉等的研究結(jié)果[7]一致。由此可見，影響葉綠素提取的關(guān)鍵是葉綠素a的提取速度及其穩(wěn)定性。穩(wěn)定性測定結(jié)果表明，室溫下白菜葉片中葉綠素在浸提48 h后的提取穩(wěn)定性較好，提取最為充分。

試驗結(jié)果表明，乙醇與丙酮體積比為1 ∶1和1 ∶2時均可作為白菜葉片葉綠素含量的快速測定方法。該方法省略了研磨、沖洗、離心或過濾等步驟，具有步驟簡單、操作方便、節(jié)省時間的優(yōu)點，這對于快速測定大批量白菜樣品葉綠素含量具有重要意義。

參考文獻：

[1]明華，胡春勝，張玉銘，等. 浸提法測定玉米葉綠素含量的改進[J]. 玉米科學，2007，15（4）：93-95，99.

[2]張憲政. 植物葉綠素含量測定——丙酮乙醇混合液法[J]. 遼寧農(nóng)業(yè)科學，1986（3）：26-28.

[3]洪法水，魏正貴，趙貴文. 菠菜葉綠素的浸提和協(xié)同萃取反應(yīng)[J]. 應(yīng)用化學，2001，8（7）：532-535.

[4]徐芬芬，葉利民，徐衛(wèi)紅，等. 小白菜葉綠素含量的測定方法比較[J]. 北方園藝，2010（23）：32-34.

[5]麻明友，麻成金，肖桌柄，等. 獼猴桃葉中葉綠素的提取研究[J]. 食品工業(yè)科技，2006，27（6）：140-143.

[6]任紅，羅豐，許彥，等. 菜心葉綠素測定方法比較研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，40（3）：1455-1456.

[7]郭勝偉，高云東. 比色法測定中華蘆薈葉片中葉綠素含量方法的研究[J]. 中醫(yī)藥學刊，2004，22（1）：53-76.牛明芬，于海嬌，武肖媛，等. 豬糞秸稈高溫堆肥過程中物質(zhì)變化的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（9）：291-293.endprint

摘要：以白菜品種蘇州青、華王為試驗材料，研究95%乙醇，80%丙酮，V乙醇 ∶V丙酮=1 ∶1、2 ∶1、1 ∶2，V乙醇 ∶V丙酮 ∶V水=4.5 ∶4.5 ∶1 6種提取液對白菜葉片葉綠素提取效果的影響，并測定葉綠素在這6種不同提取液中的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，葉綠素提取效果較好的為V乙醇 ∶V丙酮=1 ∶1、1 ∶2 的浸提液。葉綠素的穩(wěn)定性測定結(jié)果表明，浸提48 h后穩(wěn)定性較好，提取最為充分。

關(guān)鍵詞：白菜；葉綠素；穩(wěn)定性；浸提；乙醇；丙酮；吸光度

中圖分類號： S634.301文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0289-02

收稿日期：2013-12-12

基金項目：江蘇省蘇州市應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃（編號：SYN201326）。

作者簡介：牟建梅（1975—），女，遼寧康平人，副研究員，研究方向為蔬菜育種及安全高效生產(chǎn)技術(shù)。Tel：（0512）65386213。E-mail：244823091@qq.com。

通信作者：張國芹，助理研究員，研究方向為蔬菜栽培生理。E-mail：guoqin1981@163.com。葉綠素是植物葉片進行光合作用的主要色素，葉綠素含量是植物生理研究中的重要指標。生產(chǎn)中也往往根據(jù)葉色變化作為看苗診斷和采取施肥措施的重要指標。葉綠素含量測定方法主要有分光光度計法、活體葉綠素儀法和光聲光譜法。但用手持葉綠素儀或光譜分析儀測得的是色素相對含量指標，并且不同種類植物葉片中的色素指標與實際葉綠素含量之間的關(guān)系方程式不同，即不能用同一種色素指標關(guān)系來轉(zhuǎn)換不同植物的色素含量[1]。在日常試驗中以分光光度計法應(yīng)用最為廣泛。另外，根據(jù)所用提取溶劑不同又有多種測定方法，早期葉綠素測定廣泛采用Arnon法。但該方法由于需要先研磨后除渣，工作量大、步驟多且易受光氧化而引起偏差，不適宜田間大量樣品的提取和測定。張憲政提出了丙酮、乙醇混合液法浸提葉綠素，證明利用混合液進行葉綠素浸提的可行性[2]；洪法水等發(fā)現(xiàn)，丙酮與乙醇混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng)，且二者在等摩爾混合時提取效果最好[3]；徐芬芬等研究認為，丙酮與乙醇體積比1 ∶1混合液浸提白菜葉綠素效果最好[4]；而麻明友等發(fā)現(xiàn)，丙酮與乙醇體積比2 ∶1的混合液浸提獼猴桃葉片葉綠素效果較好[5]。

白菜（Brassica campestris ssp. chinensis Makino）別稱不結(jié)球白菜、青菜、油菜等，是原產(chǎn)于我國的、重要的葉菜類作物，在長江中下游及以南廣泛栽培，可周年生產(chǎn)，具有極大的經(jīng)濟價值。葉綠素是葉菜類作物重要生長指標，準確地測定其含量可為葉菜類生長發(fā)育以及逆境脅迫等試驗提供基礎(chǔ)。為了探討實現(xiàn)白菜葉片葉綠素提取并能盡量避免光分解，建立適合大量樣品的葉綠素提取及其含量測定方法的可能性和科學性，本試驗以蘇州青、華王2個白菜品種為試材，就不同比例的丙酮與乙醇混合溶液提取測定白菜葉片中葉綠素含量及其穩(wěn)定性進行比較分析，為白菜田間大樣本葉綠素含量測定提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

2個白菜品種為蘇州青和華王。將新鮮白菜葉片洗凈，用吸水紙吸干表面水分，去除大葉脈后，將葉片剪碎成約 0.2 cm×1.0 cm 的小細絲，混勻備用。

1.2儀器與試劑

試驗用752s紫外可見分光光度計測定吸光度。丙酮、乙醇等試劑均為分析純，試驗用水為超純水。

1.3試驗方法

1.3.1浸提試驗按體積比配制浸提液，設(shè)6個處理：處理1，95%乙醇；處理2，80%丙酮；

2結(jié)果與分析

2.1不同浸提液對白菜葉綠素提取效果的影響

2.2不同提取液對葉綠素穩(wěn)定性的影響

用不同浸提溶劑提取白菜葉片葉綠素含量，其穩(wěn)定性結(jié)果見表2、表3。從表2、表3可以看出，2種白菜的葉綠素a和總?cè)~綠素含量均在第2天達到最大值。處理3、處理4、處理5中葉綠素b含量均在第3天達最大，但與第2天結(jié)果相差不大。蘇州青葉綠素含量的測定結(jié)果顯示，第3天葉綠素a含量比第2天低17.3%～22.2%，致使總?cè)~綠素含量均在第3天下降，說明葉綠素a相對容易降解。同時，試驗也表明葉綠素提取液不適宜長時間放置。

3結(jié)論與討論

室溫下，采用不同比例的丙酮、乙醇混合溶劑提取小白菜葉片中葉綠素。試驗結(jié)果表明，混合液提取法所得葉綠素含量高于單一溶液提取，其中以混合液V乙醇 ∶V丙酮= 1 ∶1、1 ∶2效果最好，并且這2個處理間差異不顯著。乙醇與丙酮混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng)，這與洪法水等在菠菜、獼猴桃及菜心上的研究結(jié)果一致[3，5-6]。

隨著測定時間的延長，葉綠素a降解值在各種提取液中均遠遠大于葉綠素b。這與郭勝偉等的研究結(jié)果[7]一致。由此可見，影響葉綠素提取的關(guān)鍵是葉綠素a的提取速度及其穩(wěn)定性。穩(wěn)定性測定結(jié)果表明，室溫下白菜葉片中葉綠素在浸提48 h后的提取穩(wěn)定性較好，提取最為充分。

試驗結(jié)果表明，乙醇與丙酮體積比為1 ∶1和1 ∶2時均可作為白菜葉片葉綠素含量的快速測定方法。該方法省略了研磨、沖洗、離心或過濾等步驟，具有步驟簡單、操作方便、節(jié)省時間的優(yōu)點，這對于快速測定大批量白菜樣品葉綠素含量具有重要意義。

參考文獻：

[1]明華，胡春勝，張玉銘，等. 浸提法測定玉米葉綠素含量的改進[J]. 玉米科學，2007，15（4）：93-95，99.

[2]張憲政. 植物葉綠素含量測定——丙酮乙醇混合液法[J]. 遼寧農(nóng)業(yè)科學，1986（3）：26-28.

[3]洪法水，魏正貴，趙貴文. 菠菜葉綠素的浸提和協(xié)同萃取反應(yīng)[J]. 應(yīng)用化學，2001，8（7）：532-535.

[4]徐芬芬，葉利民，徐衛(wèi)紅，等. 小白菜葉綠素含量的測定方法比較[J]. 北方園藝，2010（23）：32-34.

[5]麻明友，麻成金，肖桌柄，等. 獼猴桃葉中葉綠素的提取研究[J]. 食品工業(yè)科技，2006，27（6）：140-143.

[6]任紅，羅豐，許彥，等. 菜心葉綠素測定方法比較研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，40（3）：1455-1456.

[7]郭勝偉，高云東. 比色法測定中華蘆薈葉片中葉綠素含量方法的研究[J]. 中醫(yī)藥學刊，2004，22（1）：53-76.牛明芬，于海嬌，武肖媛，等. 豬糞秸稈高溫堆肥過程中物質(zhì)變化的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（9）：291-293.endprint

摘要：以白菜品種蘇州青、華王為試驗材料，研究95%乙醇，80%丙酮，V乙醇 ∶V丙酮=1 ∶1、2 ∶1、1 ∶2，V乙醇 ∶V丙酮 ∶V水=4.5 ∶4.5 ∶1 6種提取液對白菜葉片葉綠素提取效果的影響，并測定葉綠素在這6種不同提取液中的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，葉綠素提取效果較好的為V乙醇 ∶V丙酮=1 ∶1、1 ∶2 的浸提液。葉綠素的穩(wěn)定性測定結(jié)果表明，浸提48 h后穩(wěn)定性較好，提取最為充分。

關(guān)鍵詞：白菜；葉綠素；穩(wěn)定性；浸提；乙醇；丙酮；吸光度

中圖分類號： S634.301文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）09-0289-02

收稿日期：2013-12-12

基金項目：江蘇省蘇州市應(yīng)用基礎(chǔ)研究計劃（編號：SYN201326）。

作者簡介：牟建梅（1975—），女，遼寧康平人，副研究員，研究方向為蔬菜育種及安全高效生產(chǎn)技術(shù)。Tel：（0512）65386213。E-mail：244823091@qq.com。

通信作者：張國芹，助理研究員，研究方向為蔬菜栽培生理。E-mail：guoqin1981@163.com。葉綠素是植物葉片進行光合作用的主要色素，葉綠素含量是植物生理研究中的重要指標。生產(chǎn)中也往往根據(jù)葉色變化作為看苗診斷和采取施肥措施的重要指標。葉綠素含量測定方法主要有分光光度計法、活體葉綠素儀法和光聲光譜法。但用手持葉綠素儀或光譜分析儀測得的是色素相對含量指標，并且不同種類植物葉片中的色素指標與實際葉綠素含量之間的關(guān)系方程式不同，即不能用同一種色素指標關(guān)系來轉(zhuǎn)換不同植物的色素含量[1]。在日常試驗中以分光光度計法應(yīng)用最為廣泛。另外，根據(jù)所用提取溶劑不同又有多種測定方法，早期葉綠素測定廣泛采用Arnon法。但該方法由于需要先研磨后除渣，工作量大、步驟多且易受光氧化而引起偏差，不適宜田間大量樣品的提取和測定。張憲政提出了丙酮、乙醇混合液法浸提葉綠素，證明利用混合液進行葉綠素浸提的可行性[2]；洪法水等發(fā)現(xiàn)，丙酮與乙醇混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng)，且二者在等摩爾混合時提取效果最好[3]；徐芬芬等研究認為，丙酮與乙醇體積比1 ∶1混合液浸提白菜葉綠素效果最好[4]；而麻明友等發(fā)現(xiàn)，丙酮與乙醇體積比2 ∶1的混合液浸提獼猴桃葉片葉綠素效果較好[5]。

白菜（Brassica campestris ssp. chinensis Makino）別稱不結(jié)球白菜、青菜、油菜等，是原產(chǎn)于我國的、重要的葉菜類作物，在長江中下游及以南廣泛栽培，可周年生產(chǎn)，具有極大的經(jīng)濟價值。葉綠素是葉菜類作物重要生長指標，準確地測定其含量可為葉菜類生長發(fā)育以及逆境脅迫等試驗提供基礎(chǔ)。為了探討實現(xiàn)白菜葉片葉綠素提取并能盡量避免光分解，建立適合大量樣品的葉綠素提取及其含量測定方法的可能性和科學性，本試驗以蘇州青、華王2個白菜品種為試材，就不同比例的丙酮與乙醇混合溶液提取測定白菜葉片中葉綠素含量及其穩(wěn)定性進行比較分析，為白菜田間大樣本葉綠素含量測定提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗材料

2個白菜品種為蘇州青和華王。將新鮮白菜葉片洗凈，用吸水紙吸干表面水分，去除大葉脈后，將葉片剪碎成約 0.2 cm×1.0 cm 的小細絲，混勻備用。

1.2儀器與試劑

試驗用752s紫外可見分光光度計測定吸光度。丙酮、乙醇等試劑均為分析純，試驗用水為超純水。

1.3試驗方法

1.3.1浸提試驗按體積比配制浸提液，設(shè)6個處理：處理1，95%乙醇；處理2，80%丙酮；

2結(jié)果與分析

2.1不同浸提液對白菜葉綠素提取效果的影響

2.2不同提取液對葉綠素穩(wěn)定性的影響

用不同浸提溶劑提取白菜葉片葉綠素含量，其穩(wěn)定性結(jié)果見表2、表3。從表2、表3可以看出，2種白菜的葉綠素a和總?cè)~綠素含量均在第2天達到最大值。處理3、處理4、處理5中葉綠素b含量均在第3天達最大，但與第2天結(jié)果相差不大。蘇州青葉綠素含量的測定結(jié)果顯示，第3天葉綠素a含量比第2天低17.3%～22.2%，致使總?cè)~綠素含量均在第3天下降，說明葉綠素a相對容易降解。同時，試驗也表明葉綠素提取液不適宜長時間放置。

3結(jié)論與討論

室溫下，采用不同比例的丙酮、乙醇混合溶劑提取小白菜葉片中葉綠素。試驗結(jié)果表明，混合液提取法所得葉綠素含量高于單一溶液提取，其中以混合液V乙醇 ∶V丙酮= 1 ∶1、1 ∶2效果最好，并且這2個處理間差異不顯著。乙醇與丙酮混合液提取葉綠素存在協(xié)同效應(yīng)，這與洪法水等在菠菜、獼猴桃及菜心上的研究結(jié)果一致[3，5-6]。

隨著測定時間的延長，葉綠素a降解值在各種提取液中均遠遠大于葉綠素b。這與郭勝偉等的研究結(jié)果[7]一致。由此可見，影響葉綠素提取的關(guān)鍵是葉綠素a的提取速度及其穩(wěn)定性。穩(wěn)定性測定結(jié)果表明，室溫下白菜葉片中葉綠素在浸提48 h后的提取穩(wěn)定性較好，提取最為充分。

試驗結(jié)果表明，乙醇與丙酮體積比為1 ∶1和1 ∶2時均可作為白菜葉片葉綠素含量的快速測定方法。該方法省略了研磨、沖洗、離心或過濾等步驟，具有步驟簡單、操作方便、節(jié)省時間的優(yōu)點，這對于快速測定大批量白菜樣品葉綠素含量具有重要意義。

參考文獻：

[1]明華，胡春勝，張玉銘，等. 浸提法測定玉米葉綠素含量的改進[J]. 玉米科學，2007，15（4）：93-95，99.

[2]張憲政. 植物葉綠素含量測定——丙酮乙醇混合液法[J]. 遼寧農(nóng)業(yè)科學，1986（3）：26-28.

[3]洪法水，魏正貴，趙貴文. 菠菜葉綠素的浸提和協(xié)同萃取反應(yīng)[J]. 應(yīng)用化學，2001，8（7）：532-535.

[4]徐芬芬，葉利民，徐衛(wèi)紅，等. 小白菜葉綠素含量的測定方法比較[J]. 北方園藝，2010（23）：32-34.

[5]麻明友，麻成金，肖桌柄，等. 獼猴桃葉中葉綠素的提取研究[J]. 食品工業(yè)科技，2006，27（6）：140-143.

[6]任紅，羅豐，許彥，等. 菜心葉綠素測定方法比較研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，40（3）：1455-1456.

[7]郭勝偉，高云東. 比色法測定中華蘆薈葉片中葉綠素含量方法的研究[J]. 中醫(yī)藥學刊，2004，22（1）：53-76.牛明芬，于海嬌，武肖媛，等. 豬糞秸稈高溫堆肥過程中物質(zhì)變化的研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學，2014，42（9）：291-293.endprint