依達拉奉對腦出血大鼠SOD及MDA的影響

陸紅　朱錦莉

[摘要] 目的 探討依達拉奉對腦出血大鼠血腫周圍腦組織SOD及MDA的影響。方法 選SD大鼠90只，隨機分成3組，每組30只，分別為假手術組、腦出血組及依達拉奉治療組。將大鼠自體血注入尾狀核制成腦出血模型；用黃嘌呤氧化法檢測神經細胞SOD含量，改良的硫代巴比妥酸法測定MDA含量。結果 腦出血組與假手術組比較SOD活性顯著降低，而MDA含量增加（P<0.05），依達拉奉治療組與腦出血組相比，神經細胞SOD含量明顯增高（P<0.05），而MDA含量減低，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 依達拉奉具有清除自由基作用，該作用與增加細胞SOD含量，抑制脂質過氧化過程有關。

[關鍵詞] 依達拉奉； 腦出血；自由基； SOD；MDA

[中圖分類號] R96 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）05（c）-0035-02

[Abstract] Objective To investigate the effect of edaravone on SOD and MDA in brain tissue around the hematoma of rats with cerebral hemorrhage. Methods 90 SD rats were chosen and randomly divided into 3 groups， control group， the cerebral hemorrhage group and edaravone treatment group， respectively， each group of 30 rats. Cerebral hemorrhage model was made by injecting the autologous blood of rats into caudate nucleus. Xanthine oxidation method was used to detect the content of SOD in nerve cells， and improved thiobarbituric acid method was adopted to detect the MDA content. Results Compared with the control group， the SOD activity of the cerebral hemorrhage group decreased significantly， but MDA content increased（P<0.05）； compared with the cerebral hemorrhage group， the SOD content in nerve cells of edaravone treatment group obviously increased， but MDA content decreased， the difference was statistically significant（P<0.05）. Conclusion Edaravone has the effect of scavenging free radicals， which is related to the increase of cellular SOD content and inhibition of the lipid peroxidation process.

[Key words] Edaravone； Cerebral hemorrhage； Free radicals； SOD；MDA

腦出血（ICH）是指腦實質的血管發生破裂出血，因其發病急、進展迅速以及高致殘率和高致死率等特點，被臨床醫生高度重視。研究證明，急性腦出血后生成大量自由基，造成腦組織不可逆的損傷，導致神經功能障礙加重。依達拉奉是自由基清除劑，臨床應用對腦出血具有確切療效[1]。該實驗于2013年5月—2013年10月在遼寧醫學院生理實驗室完成。通過檢測實驗大鼠腦出血經依達拉奉治療后SOD、 MDA含量，觀察大鼠腦出血急性期應用依達拉奉治療后血腫周圍腦細胞自由基清除情況，為探討依達拉奉在腦出血急性期應用提供理論依據。

1 實驗動物與藥品、儀器

實驗動物：90只清潔級SD大鼠，3～4月齡，雌雄不限，重200～300 g，常規室溫25 ℃，正常進食、飲水。（遼寧醫學院實驗動物中心提供，批號033）。實驗過程遵循《關于善待實驗動物的指導性意見》[2]。藥物：依達拉奉注射液（易達生，吉林省博大制藥有限責任公司，國藥準字：H20051992），SOD、MDA試劑盒（購自南京建成生物工程研究所，試劑為國產分析純級）。主要儀器：腦立體定位儀（美國Ridge Tool公司）；微量進樣器（淄博庫侖分析儀器有限公司）。

2 方法

2.1 分組和給藥

90只大鼠隨機分成假手術組，腦出血組和依達拉奉治療組，各30只；3組大鼠均為雌雄各半，年齡為3～4個月，假手術組平均體重為（71±2.0）g，腦出血組平均體重為（72±1.5）g，依達拉奉組平均體重為（73±1.4）g，且3組健康狀況均良好，正常進食和飲水，無明顯差異，具有可比性。治療組造模后立即尾靜脈注射依達拉奉，用量為每次3 mg/kg ， 2次/d。腦出血組造模后立即向大鼠尾靜脈注射同等量生理鹽水，假手術組不注血，其余方法與腦出血組相同。

2.2 模型的制備

按照Xue[3]所提供的方法制成腦出血模型。在立體定位儀引導下以25 uL/min速度向大鼠右側尾狀核（矢狀縫向右旁開3.0 mm，前囟后方0.2 mm，取深度5.8 mm）注入自體尾靜脈血50 uL； 2 min內注完；停針10 min。假手術組不注血，其余方法與腦出血組相同。

2.3 按照Longa評分標準進行評分

0分：無神經系統功能缺損的體征；1分：左側前肢不能完全伸展；2分：爬行時，大鼠向左側追尾轉圈；3分：爬行時，大鼠向左側傾倒；4分：無自發性活動或伴有意識障礙。神經功能評分等于3分的大鼠入選本實驗[4]。

2.4 取材及SOD、MDA測定

各組大鼠均于造模后48 h處死，迅速取針道后腦組織標本稱重，將腦組織與生理鹽水按1 g∶10 mL比例在冰水中用勻漿機充分勻漿，4 000 r/min離心，15 min后取上清液，配成10%的腦組織勻漿，黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，改良的硫代巴比妥酸法測定MDA。

2.5 統計方法

采用SPSS 13.0統計軟件進行數據分析及處理。計量資料采用t檢驗，用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較用方差分析。

3 結果

假手術組和腦出血組相比，SOD含量明顯減少，說明SOD活性明顯降低，而MDA含量顯著增多，表明MDA活性明顯升高，差異有統計學意義（P<0.05）；依達拉奉組與腦出血組比較，SOD含量明顯增高，差異有統計學意義（t=17.624，P<0.05）。而MDA含量明顯降低，差異有統計學意義（t=5.246，P<0.01）。見表1。

4 討論

腦出血后神經細胞損傷是多種原因綜合作用的結果，其中自由基產生是引起神經細胞損傷重要因素之一。依達拉奉親脂性強，在血腦屏障中的透過率達到60%[5]，具有較強的自由基清除能力。由以上表1可知，在3組中，腦出血組SOD值（57.35±7.56）與假手術組SOD值（70.06±3.98）比較，SOD活性顯著降低，而腦出血組MDA值（4.98±0.43），假手術組為（1.31±0.13），相比含量增加（P<0.05），依達拉奉治療組SOD含量為（65.05±8.96）與腦出血組（57.35±7.56）相比，神經細胞SOD明顯增高（P<0.05），而MDA含量，依達拉奉組為（2.24±0.38），腦出血組為（4.98±0.43），明顯減低，差異有統計學意義（P<0.05），由此可推斷，在腦出血急性期，應用依達拉奉可清除血腫周圍的腦細胞自由基，避免腦組織的不可逆損傷，此研究結果與劉春寒 ， 薛慎伍等[6]在關于依達拉奉對慢性腦缺血大鼠神經功能損傷的保護和MDA、SOD的影響中的研究結果相一致，其意義如下所示。

4.1 SOD在3組中的變化及意義

該研究結果顯示：腦出血組與假手術組比較SOD活性顯著降低， 說明ICH后血腫周圍腦組織氧化抗氧化平衡紊亂，有大量自由基產生，可能是清除自由基系統受到消耗或抑制。依達拉奉治療組與ICH組比較SOD活性顯著增加，說明依達拉奉具有清除血腫周圍腦組織中自由基，減輕自由基對腦組織的病理損傷作用。

4.2 MDA在3組中的變化及意義

MDA是脂質過氧化的終產物，其含量間接反映細胞受自由基攻擊的嚴重程度。本研究結果顯示：ICH 組血腫周圍腦組織MDA含量明顯高于假手術組，說明ICH后血腫周圍腦組織氧化抗氧化平衡紊亂，有大量自由基產生，可能是清除自由基系統受到消耗或抑制。而依達拉奉組血腫周圍腦組織MDA含量顯著低于ICH組，說明依達拉奉具有抑制血腫周圍腦組織中自由基產生，提高自由基清除能力，對抗脂質過氧化作用。

綜上所述，依達拉奉具有增加SOD活性，清除自由基、抗脂質過氧化、減輕腦水腫的作用，在腦出血急性期應用效果明顯。其可能的作用機制為通過抑制次黃嘌呤一黃嘌呤氧化酶的活性，降低甚至清除患者體內的氧自由基，從而抑制神經細胞發生遲發型損傷，使腦出血患者的神經功能得到改善[7-8]。研究表明，依達拉奉有減輕腦水腫和腦組織損傷程度的作用[9]，其機制也與清除氧自由基，抑制脂質過氧化及腦細胞過氧化作用有關。依達拉奉尚能通過刺激前列環素生成，減少炎性介質白三烯生成，而降低自由基濃度，阻斷自由基的級聯反應，同時抑制脂質過氧化，阻止腦細胞凋亡，促進神經功能的修復[10]。

該實驗僅從依達拉奉清除自由基， 增加SOD活性，減輕脂質過氧化單一角度探討其作用機制，存在局限性，在實驗條件充裕情況下，應進一步研究依達拉奉多種作用機制綜合作用結果，為其臨床應用提供全面，透徹理論依據。

[參考文獻]

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[2] 程津津，任萍萍.學習《關于善待實驗動物的指導性意見》后的體會[J].實驗動物科學， 2011（3）：78-79.

[3] Xue M，Del Bigio MR. Intracerebral in jection of autologous whole blo- od in rats： time course of inflammation and cell death[J].Neuroscience Le-tters，2000，283：230.

[4] Longa EZ，Weinstein PR，Carlson S，et a1.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989，20（1）：84-91.

[5] 劉貴安.依達拉奉治療急性腦出血的療效觀察[J].中外醫學研究雜志，2013，11（7）：25-26.

[6] 劉春寒，薛慎伍.依達拉奉對慢性腦缺血大鼠神經功能損傷的保護和MDA、SOD的影響[J].藥學與臨床研究，2011（6）：518-520，533.

[7] 屈繼波，劉嶺.依達拉奉聯用尼莫同治療急性腦梗死臨床療效觀察[J].重慶醫學，2011，40（33）：3404-3405.

[8] 林昌福，于朝春，齊一龍. 依達拉奉對腦出血大鼠腦組織含水量、腫瘤壞死因子-α含量、血清基質蛋白酶-9水平和超氧化物歧化酶的影響[J].臨床神經病學雜志，2012，25（5）：362-364.

[9] 劉西，李建明，林新國.依達拉奉治療急性重型顱腦損傷的療效觀察[J].白求恩軍醫學院學報，2011，9（1）：9-11.

[10] 謝行才，李靜，鄭振雨.依達拉奉聯合白蛋白治療腦出血遲發性水腫29例療效觀察[J].中國實用神經疾病雜志，2013，3（5）：82-84.

（收稿日期：2014-02-11）