五加生化緩釋片治療功能性子宮出血的研究

王雪+李鐵男+張寧+李建民+徐艷明+王業秋+王發善

[摘要] 目的 研究五加生化緩釋片對功能性子宮出血的作用及機制。 方法 選取40只雌性KM小鼠，隨機分成空白組、產復康顆粒組以及五加生化緩釋片低、中、高劑量組，每組8只，采用斷尾法和毛細管凝血法測定小鼠的出血及凝血時間。另取早孕SD大鼠30只，隨機分成模型組（造模方法：灌服米非司酮和米索前列醇造成不完全流產模型）、產復康顆粒組以及五加生化緩釋片低、中、高劑量組，每組6只，采用毛細玻璃管法測定出血時間，采用剪尾法測定凝血時間，采用酶標儀對置入陰道棉球的血浸漬液進行子宮出血量測定，觀察五加生化緩釋片對該模型大鼠出、凝血時間及子宮出血量的影響。 結果 與空白組比較，五加生化緩釋片高、中、低劑量組能明顯縮短小鼠的出血及凝血時間（P<0.01、P<0.05）；而與產復康顆粒組比較，五加生化緩釋片高、中劑量組能明顯縮短小鼠的出血及凝血時間（P<0.01）；與空白組比較，五加生化緩釋片高、中、低劑量組能明顯減少大鼠的子宮出血量（P<0.01、P<0.05）；與產婦康顆粒組比較，五加生化緩釋片高劑量組能明顯減少大鼠的子宮出血量（P<0.01）。 結論 五加生化緩釋片能顯著減少大鼠的子宮出血量。

[關鍵詞] 五加生化緩釋片；出血時間；凝血時間；子宮出血量

[中圖分類號] R711.52 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）10（a）-0008-03

功能性子宮出血是指下丘腦-垂體-卵巢軸神經內分泌調節機制失常所致的子宮異常出血，此類疾病的主要癥狀表現為月經周期不規律、經量過多、不規則出血等[1-2]，嚴重影響患者生活和工作質量，本研究主要探討五加生化緩釋片對功能性子宮出血的作用及作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

昆明種小鼠，雌性，購自中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心；SD大鼠，雌鼠30只、雄鼠60只，由中國人民解放軍軍事醫學科學院實驗動物中心提供。

1.2 實驗藥物與試劑

五加生化緩釋片由佳木斯多多藥業有限公司生產；產婦康顆粒由深圳三順制藥有限公司生產，批號：110714；米非司酮由北京紫竹藥業有限公司生產，批號：110301；米索前列醇由北京紫竹藥業有限公司生產，批號110121；NaOH由國藥集團化學試劑有限公司生產，批號：20100114。

1.3 實驗儀器

玻片、秒表、毛細玻璃管，分析天平（上海精科），高速冷凍離心機（上海浦東天本離心機械有限公司），酶標儀（美國BioTek公司）。

1.4 實驗方法

1.4.1 五加生化緩釋片對小鼠出血及凝血時間的影響[3] 取40只健康KM小鼠，體重17～22 g，按體重隨機分成5組，分別為空白組、產復欣顆粒組（陽性對照組）以及五加生化緩釋片高、中、低劑量組。各劑量組每日灌胃給藥1次，空白組給予等體積的生理鹽水，連續給藥1周，最后一次給藥30 min后將小鼠固定，用量尺測量鼠尾長度并標記，用剪刀在小鼠尾部4 mm處剪斷，血液流出時開始計時，每隔半分鐘用濾紙吸取血滴1次，直至無血液流出計為小鼠尾部的出血時間。凝血時間的測定是末次給藥30 min后，將內徑10 mm、長10 cm的毛細玻管自眼內眥插入，血液注滿后取出，毛細管中血液凝固所用的時間即為小鼠的凝血時間。

1.4.2 造模[4] 篩選發情期的大鼠，按雌雄比例1∶2合籠，第2天早晨檢查陰道涂片，以發現陰道有精子者為妊娠第1天。每組均在第7天灌胃給予米非司酮溶液8.3 mg/kg（8：00）和米索前列醇溶液100 μg/kg（18：00），造成大鼠不完全流產的模型。

取上述模型大鼠30只，隨機分成5組（每組6只），分別為模型組、產復欣顆粒組（陽性對照組）以及五加生化緩釋片高、中、低劑量組。在每只大鼠陰道內置入消毒棉球1個（棉球重75～90 mg），分別于次日8：00和18：00將棉球取出，同時更換新的棉球，將取出的棉球放入袋中密閉冷藏保存，連續上述操作14 d，每組大鼠每天均灌胃給藥1次，連續7 d。

大鼠子宮出血量的計算方法[4]：取大鼠靜脈血0.02 ml，加入0.05 mg/ml NaOH溶液4 ml中混勻。將每只大鼠的出血棉球放入燒杯內，根據出血量加適量0.05 mg/ml NaOH浸泡擠壓搓洗棉球血漬，將浸提液倒入另一個燒杯內保存，重復上述操作直至棉球無血漬為止。將先后所有浸提液混勻，記錄所用0.05 mg/ml NaOH的總量，取已過濾的浸提液，空白大鼠靜脈血的NaOH溶液各4 ml，以0.05 mg/ml NaOH溶液為空白對照，在546 nm波長處測得吸光度（OD）值。大鼠子宮出血量（ml）=尾靜脈血量0.02 ml×（子宮浸提液OD值×V2）/（尾靜脈血OD值×V1），其中V1=稀釋尾靜脈血所用NaOH溶液的量（ml）、V2=浸提子宮血所用NaOH溶液量。

1.5 統計學處理

所得數據均采用SPSS 17.0統計軟件進行處理，計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 五加生化緩釋片對小鼠出血及凝血時間的影響

實驗結果顯示，五加生化緩釋片高、中、低劑量組和產婦康顆粒組均能縮短小鼠的出血及凝血時間，與空白組比較差異有統計學意義，且五加生化緩釋片高、中劑量組的小鼠出血時間明顯縮短（P<0.01）（表1）。

2.2 五加生化緩釋片對大鼠藥物流產模型子宮出血量的影響

五加生化緩釋片低、中、高劑量組及產復康顆粒組均能使大鼠子宮出血量減少，與空白組比較，五加生化緩釋片高、中、低劑量組均能明顯減少大鼠的子宮出血量（P<0.01、P<0.05）；與產婦康顆粒組比較，五加生化緩釋片高劑量組能明顯減少大鼠的子宮出血量（P<0.01）（表2）。

3 討論

五加生化膠囊是目前常用的劑型，主要由刺五加、當歸、川芎、桃仁、甘草、炮姜等藥物組成，用于人工流產和藥物流產后不良刺激造成的機體失調狀態的改善，可以促進機體康復[5-8]，但其作用機制不明確。本研究通過改變藥物劑型來探討五加生化緩釋片對功能性子宮出血的影響。

五加生化緩釋片是利用現代緩釋制劑技術開發的緩釋制劑，其優點是減少用藥劑量及給藥次數、減少藥物的不良反應、提高生物利用度、適應慢性病患者長期用藥。其主要成分有阿魏酸、綠原酸和異嗪皮啶[9-12]。本研究結果表明，五加生化緩釋片能顯著縮短小鼠的出血及凝血時間，并且呈現劑量依賴性。五加生化緩釋片能顯著減少功能性子宮出血型大鼠的子宮出血量，其機制可能與五加生化緩釋片的止血作用有關，但具體機制還有待進一步研究。

[參考文獻]

[1] 張國境，路欣，許晴，等.功能性子宮出血子宮內膜血管變化的研究[J].首都醫科大學學報，2005，26（2）：163-166.

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[8] 藥典委員會.臨床用藥須知[M].北京：人民衛生出版社，2005：553.

[9] 耿放，朱魁元，王發善，等.HPLC同時測定五加生化膠囊中3種有效成分的含量[J].中國實驗方劑學雜志，2012， 18（9）：109-111.

[10] 耿放，王發善，鄒韜博，等.五加生化膠囊UPLC-MS指紋圖譜研究[J].藥物分析雜志，2012，32（7）：1171-1175.

[11] 耿放，王發善，朱魁元，等.五加生化膠囊的GC-MS指紋圖譜研[J].中國實驗方劑學雜志，2012，18（16）：89-92.

[12] 耿放，朱魁元，王發善，等.五加生化膠囊的高效液相色譜指紋圖譜研究[J].分析科學學報，2012，28（3）：408-410.

（收稿日期：2014-07-28 本文編輯：林利利）

3 討論

五加生化膠囊是目前常用的劑型，主要由刺五加、當歸、川芎、桃仁、甘草、炮姜等藥物組成，用于人工流產和藥物流產后不良刺激造成的機體失調狀態的改善，可以促進機體康復[5-8]，但其作用機制不明確。本研究通過改變藥物劑型來探討五加生化緩釋片對功能性子宮出血的影響。

五加生化緩釋片是利用現代緩釋制劑技術開發的緩釋制劑，其優點是減少用藥劑量及給藥次數、減少藥物的不良反應、提高生物利用度、適應慢性病患者長期用藥。其主要成分有阿魏酸、綠原酸和異嗪皮啶[9-12]。本研究結果表明，五加生化緩釋片能顯著縮短小鼠的出血及凝血時間，并且呈現劑量依賴性。五加生化緩釋片能顯著減少功能性子宮出血型大鼠的子宮出血量，其機制可能與五加生化緩釋片的止血作用有關，但具體機制還有待進一步研究。

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[12] 耿放，朱魁元，王發善，等.五加生化膠囊的高效液相色譜指紋圖譜研究[J].分析科學學報，2012，28（3）：408-410.

（收稿日期：2014-07-28 本文編輯：林利利）

3 討論

五加生化膠囊是目前常用的劑型，主要由刺五加、當歸、川芎、桃仁、甘草、炮姜等藥物組成，用于人工流產和藥物流產后不良刺激造成的機體失調狀態的改善，可以促進機體康復[5-8]，但其作用機制不明確。本研究通過改變藥物劑型來探討五加生化緩釋片對功能性子宮出血的影響。

五加生化緩釋片是利用現代緩釋制劑技術開發的緩釋制劑，其優點是減少用藥劑量及給藥次數、減少藥物的不良反應、提高生物利用度、適應慢性病患者長期用藥。其主要成分有阿魏酸、綠原酸和異嗪皮啶[9-12]。本研究結果表明，五加生化緩釋片能顯著縮短小鼠的出血及凝血時間，并且呈現劑量依賴性。五加生化緩釋片能顯著減少功能性子宮出血型大鼠的子宮出血量，其機制可能與五加生化緩釋片的止血作用有關，但具體機制還有待進一步研究。

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[5] 翟婷婷，孟昱瓊，丁麗仙.補腎活血方對大鼠藥物流產后陰道流血影響及動情周期恢復的實驗研究[J].山西醫藥雜志，2008，37（3）：240-242.

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[12] 耿放，朱魁元，王發善，等.五加生化膠囊的高效液相色譜指紋圖譜研究[J].分析科學學報，2012，28（3）：408-410.

（收稿日期：2014-07-28 本文編輯：林利利）