初治肺結(jié)核患者T淋巴細(xì)胞亞群和Th細(xì)胞的變化及與預(yù)后的關(guān)系

許建民

[摘要] 目的 探討初治肺結(jié)核患者T淋巴細(xì)胞亞群和Th細(xì)胞的變化及與預(yù)后的關(guān)系。 方法 選取2011年1月～2013年6月在本院結(jié)核科門診治療的肺結(jié)核患者60例為肺結(jié)核組，按初治療效進(jìn)一步將肺結(jié)核組分為好轉(zhuǎn)組與未好轉(zhuǎn)組，選取健康未患肺結(jié)核30例為對照組。測定外周血T細(xì)胞亞群、Th細(xì)胞及IFN-γ、IL-4。 結(jié)果 治療前，未好轉(zhuǎn)組CD4+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1表達(dá)較對照組與好轉(zhuǎn)組顯著降低，Th2表達(dá)較對照組與好轉(zhuǎn)組顯著升高（P<0.05）；治療前，好轉(zhuǎn)組CD4+、Th1/Th2、Th1表達(dá)較對照組低，Th2表達(dá)較對照組高（P<0.05）；治療后，好轉(zhuǎn)組CD4+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1顯著高于未好轉(zhuǎn)組及治療前，Th2顯著低于未好轉(zhuǎn)組及治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與治療前比較，未好轉(zhuǎn)組治療后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1、Th2差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論 初治肺結(jié)核患者CD4+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1較正常人降低，Th2較正常人升高；肺結(jié)核治療初期，CD4+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1偏高，Th2偏低的患者預(yù)后較好；治療有效后CD4+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1升高，Th2下降。

[關(guān)鍵詞] 初治；肺結(jié)核；T細(xì)胞亞群；Th細(xì)胞

[中圖分類號] R521 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）10（a）-0040-04

有研究發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者中Th1和Th2比例平衡失調(diào)直接影響結(jié)核病的進(jìn)展，與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)[1]。本課題通過研究初治肺結(jié)核患者和健康體檢者外周血T淋巴細(xì)胞亞群和Th細(xì)胞的差異，探討初治肺結(jié)核患者細(xì)胞免疫的特點；通過觀察并比較初治肺結(jié)核患者抗結(jié)核治療前和按照初治肺結(jié)核標(biāo)準(zhǔn)化療方案治療結(jié)束時（即治療6個月）后好轉(zhuǎn)和未好轉(zhuǎn)組的T淋巴細(xì)胞亞群和Th細(xì)胞的消長變化情況，初步探討T淋巴細(xì)胞亞群和Th細(xì)胞分化對初治肺結(jié)核患者預(yù)后的判斷價值，從而為臨床工作正確評價初治肺結(jié)核患者的治療效果提供新的補充依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2013年6月在本院結(jié)核科門診治療的肺結(jié)核患者60例為肺結(jié)核組，其中男性40例，女性20例，平均年齡（51.2±27.9）歲，進(jìn)一步將其分為好轉(zhuǎn)組與未好轉(zhuǎn)組，好轉(zhuǎn)組：癥狀消失，影像學(xué)提示病灶吸收，痰涂片3次陰性的患者，其中男性36例，女性16例，平均年齡（52.12±12.37）歲；未好轉(zhuǎn)組：經(jīng)過2ERHZ/4RH方案治療6個月，癥狀未改善、胸部X線、肺部CT仍顯示有活動性病灶或痰培養(yǎng)仍未轉(zhuǎn)陰的患者，其中男性5例，女性3例，平均年齡（50.12±11.54）歲。選取同期健康體檢未患肺結(jié)核的30例為對照組，其中男性24例，女性6例，平均年齡（53.71±13.92）歲。肺結(jié)核組與對照組的性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)

入選標(biāo)準(zhǔn)：①所有收集病例既往均未診斷為肺結(jié)核或服用過抗結(jié)核藥物；②就診時生命體征平穩(wěn)，能配合醫(yī)生及護(hù)理人員工作者。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①在6個月2ERHZ/4RH方案治療過程中因藥物副作用如肝功能及腎功能異常、尿酸升高、視神經(jīng)炎、藥物熱、皮疹等原因不能耐受更換藥物或停止治療者；②有各種急性、慢性感染，嚴(yán)重肝、腎功能不全，惡性腫瘤，自身免疫性疾病者。

1.3 外周血T細(xì)胞亞群、Th細(xì)胞及IFN-γ、IL-4測定方法

肺結(jié)核患者在抗結(jié)核治療前和治療6個月時抽取清晨空腹外周靜脈血2 ml，對照組于體檢時抽取清晨空腹外周靜脈血2 ml。標(biāo)本為肝素抗凝全血，將標(biāo)本置于-20°或-70°保存（最多可存放6個月），每3～5個月送檢1次，檢測時采用流式細(xì)胞術(shù)直接免疫熒光標(biāo)記技術(shù)測定T淋巴細(xì)胞亞群CD4+、CD8+的百分比數(shù)值，計算CD4+/CD8+比值。使用ELISA檢測IFN-γ和IL-4數(shù)值分別代表Th1和Th2細(xì)胞，并計算Th1/Th2比值。以上操作均按說明書進(jìn)行。

1.4 預(yù)后評估

對肺結(jié)核患者抗結(jié)核治療前和治療6個月時進(jìn)行相關(guān)檢查（包括痰涂片及胸部X線、胸部CT等檢查）。判斷好轉(zhuǎn)和未好轉(zhuǎn)（治療失敗）以《肺結(jié)核診斷和治療指南》為標(biāo)準(zhǔn)。好轉(zhuǎn)具備以下各項條件：①癥狀改善或消失；②影像學(xué)提示病灶較前吸收或好轉(zhuǎn)；③痰檢結(jié)核分枝桿菌陽性者轉(zhuǎn)陰。未好轉(zhuǎn)具備以下各項條件：①癥狀未得到改善；②影像學(xué)提示病灶未吸收、好轉(zhuǎn)，甚至擴(kuò)大；③痰檢結(jié)核分枝桿菌陽性者未轉(zhuǎn)陰。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計量資料以x±s表示，采用t檢驗或方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

治療前，未好轉(zhuǎn)組CD4+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1表達(dá)較對照組與好轉(zhuǎn)組顯著降低，Th2表達(dá)較對照組與好轉(zhuǎn)組顯著升高（P<0.05）；治療前，好轉(zhuǎn)組CD4+、Th1/Th2、Th1表達(dá)較對照組低，Th2表達(dá)較對照組高（P<0.05）；治療后，好轉(zhuǎn)組CD4+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1顯著高于未好轉(zhuǎn)組及治療前，Th2顯著低于未好轉(zhuǎn)組及治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與治療前比較，未好轉(zhuǎn)組治療后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Th1/Th2、Th1、Th2差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

3 討論

結(jié)核桿菌是一種能在單核-巨噬細(xì)胞內(nèi)生長繁殖的胞內(nèi)寄生菌，機(jī)體對侵入細(xì)菌產(chǎn)生的免疫是典型T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫，機(jī)體是否發(fā)病、病情發(fā)展嚴(yán)重程度、預(yù)后及藥物療效不僅與入侵細(xì)菌數(shù)量和毒力有關(guān)，而且與機(jī)體細(xì)胞免疫強(qiáng)弱有關(guān)，即與T細(xì)胞的數(shù)量和功能活性有關(guān)[2-4]。近年研究表明，結(jié)核桿菌感染的保護(hù)性免疫作用主要是由CD4+T淋巴細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子而放大的免疫反應(yīng)，根據(jù)其分泌不同效應(yīng)功能的細(xì)胞因子可劃分為兩種亞型（Th1和Th2），Th1主要分泌IFN-γ和IL-2，誘發(fā)細(xì)胞免疫應(yīng)答[5]。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4和IL-10，主要激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，同時抑制巨噬細(xì)胞的某些功能，并認(rèn)為在刺激狀態(tài)下IL-4表達(dá)增加與結(jié)核性空洞形成相關(guān)[6-8]。

本研究顯示，與肺結(jié)核組比較，對照組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Th1/Th2顯著增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，原因可能是在結(jié)核病的細(xì)胞免疫中，CD4+T淋巴細(xì)胞是最重要的免疫細(xì)胞，其次是CD8+T淋巴細(xì)胞，兩者通過激活巨噬細(xì)胞，發(fā)揮抗結(jié)核作用[9]。結(jié)核病患者細(xì)胞免疫功能下降，可以表現(xiàn)為T淋巴細(xì)胞各亞群的絕對數(shù)、百分?jǐn)?shù)及CD4/CD8比值異常。通過檢測結(jié)核病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群，可以了解機(jī)體細(xì)胞免疫狀況，為臨床治療提供理論依據(jù)[10]。有研究者對未治療的肺結(jié)核患者外周血淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行研究表明，CD4+絕對數(shù)下降，CD4+百分?jǐn)?shù)下降，CD4+/CD8+比值下降，隨著治療好轉(zhuǎn)后上升[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，肺結(jié)核患者外周血總淋巴細(xì)胞及CD4+T淋巴細(xì)胞下降，且病變越廣泛，下降越嚴(yán)重，尤其是播散型肺結(jié)核[12]。有學(xué)者采用單克隆抗體法對32例肺結(jié)核及結(jié)核性胸膜炎患者進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)CD4+T淋巴細(xì)胞與CD8+T淋巴細(xì)胞均向病灶內(nèi)聚集，提示T淋巴細(xì)胞亞群的變化與抗結(jié)核治療有關(guān)[13]。

CD4+細(xì)胞又可分為兩種亞型：Th1細(xì)胞及Th2細(xì)胞。Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ和IL-2兩種細(xì)胞因子，誘發(fā)細(xì)胞免疫應(yīng)答，其中IFN-γ能通過增強(qiáng)作為效應(yīng)細(xì)胞的巨噬細(xì)胞表面人類組織相關(guān)抗原Ⅱ分子的表達(dá)，促進(jìn)巨噬細(xì)胞對抗原的遞呈和自身活化，啟動機(jī)體的免疫應(yīng)答。IFN-γ也可通過誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞內(nèi)某些介導(dǎo)呼吸爆發(fā)的酶合成，使殺菌物質(zhì)合成增加，賦予巨噬細(xì)胞更強(qiáng)的殺菌能力。同時IFN-γ可進(jìn)一步促使Th0分化為Th1細(xì)胞亞群，增強(qiáng)Th1細(xì)胞免疫應(yīng)答，有助于殺傷病原微生物。Th2細(xì)胞主要分泌IL-4和IL-10兩種因子，有效激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗體，參與誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。IL-4能抑制巨噬細(xì)胞的活化，拮抗上述的IFN-γ活化巨噬細(xì)胞后效應(yīng)。Th2細(xì)胞合成的細(xì)胞因子能減緩由巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，對結(jié)核好轉(zhuǎn)不利[14]。有學(xué)者認(rèn)為在刺激狀態(tài)下IL-4表達(dá)增加與結(jié)核性空洞形成密切相關(guān)[15]，所以，當(dāng)這種平衡失調(diào)時，將直接影響結(jié)核病的進(jìn)展。Th1和Th2分泌的多種細(xì)胞因子相互調(diào)節(jié)、相互抑制，對結(jié)核病的治療和轉(zhuǎn)歸起重要作用。

目前在抗結(jié)核的免疫中許多細(xì)胞免疫機(jī)制還未完全清楚，因此深入研究細(xì)胞免疫在肺結(jié)核發(fā)生、發(fā)展過程中的特點及其對患者預(yù)后的影響，可為臨床工作評價初治肺結(jié)核患者的治療效果提供新的依據(jù)，也將為今后進(jìn)一步研究肺結(jié)核的免疫輔助治療提供理論依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Kaufmann SH.Proteetion against tubereulosis：cytokines，T cells，and macrophages[J].Ann Rheum Dis，2002，61（Suppl 2）：ii54-ii58.

[2] Weinstein MA，Eismont FJ.Infections of the spine in patients with human immunodeficiency virus[J].J Bone Joint Surg Am，2005，87（3）：604-609.

[3] S Rodrigues Ddo S，de C Cunha RM，Kallas EG，et al.Distribution of na■ve and memory/effector CD4+ T lymphocytes and expression of CD38 on CD8+ T 1ymphocytes in AIDS patients with tubereulosis[J].Braz J Infect Dis，2003，7（2）：161-165.

[4] Tsao TC，Chen CH，Hong JH，et al.Shifts of T4/T8 T lymphocytes from BAL fluid and peripheral blood by clinical grade in patients with pulmonary tubereulosis[J].Chest，2002，122（9）：1285-1291.

[5] Sunaders BM，F(xiàn)rank AA，Orme IM，et al.CD4 is required for the development of a protective granulomatous response to pulmonary tuberculosis[J].Cell Immunol，2002，216（12）：65-72.

[6] 謝惠安，陽國太，林善梓，等.現(xiàn)代結(jié)核病學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：136-235.

[7] van Crevel R，Karyadi E，Prcyers F，et al.Increased production of interleurin 4 by CD4+ and CD8+ T cells from patients with tuberculosis is related to the presence of pulmonary cavities[J].J Infect Dis，2000，181（3）：1194-1197.

[8] Swaminathan S，Nandini KS，Hanna LE，et al.T-lymphocytc subpopulations in tuberculosis[J].Indian Pediatr，2000，37（5）：489-495.

[9] García M，Vargas JA，Castejón R，et al.Flow-cytometric assessment of lymphocyte cytokine production in tuberculosis[J].Tuberculosis，2002，82（1）：37-41.

[10] 談介凡，沈燕雅，范惠娟.結(jié)核病患者細(xì)胞因子檢測及其保護(hù)性免疫機(jī)制研究[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，29（7）：612-614.

[11] Bean AG，Roach DR，Briscoe H，et al.Structural deficiencies in granuloma formation in TNF gene-targeted mice underlie the heightened susceptibility to aerosol Mycobacterium tuberculosis infection，which is not compensated for by lymphotoxin[J].J Immunol，1999，162（6）：3504-3511.

[12] Song CH，Lee JS，Nam HH，et al.IL-18 production in human pulmonary and pleural tuberculosis[J].Scand J Immunol，2002，56（6）：611-618.

[13] Millington KA，Innes JA，Hackforth S，et al.Dynamic relationshipbetween IFN-gamma and IL-2 profile of Mycobacterium tuberculosis specific T cells and antigen load[J].J Immunol，2007，178（8）：5217-5226.

[14] Mansouri D，Adimi P，Mirsaeidi M，et al.Inherited disorders of the IL-12-IFN-gamma axis in patients with disseminated BCG infection[J].Eur J Pediatr，2005，164（12）：753-757.

[15] Flynn JL，Chan J，Triebold K，et al.An essential role for interferon in resistance to Mycobacterium tuberculosis infection[J].J Exp Med，1993，178（6）：2249-2254.

（收稿日期：2014-08-14 本文編輯：李亞聰）

[10] 談介凡，沈燕雅，范惠娟.結(jié)核病患者細(xì)胞因子檢測及其保護(hù)性免疫機(jī)制研究[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，29（7）：612-614.

[11] Bean AG，Roach DR，Briscoe H，et al.Structural deficiencies in granuloma formation in TNF gene-targeted mice underlie the heightened susceptibility to aerosol Mycobacterium tuberculosis infection，which is not compensated for by lymphotoxin[J].J Immunol，1999，162（6）：3504-3511.

[12] Song CH，Lee JS，Nam HH，et al.IL-18 production in human pulmonary and pleural tuberculosis[J].Scand J Immunol，2002，56（6）：611-618.

[13] Millington KA，Innes JA，Hackforth S，et al.Dynamic relationshipbetween IFN-gamma and IL-2 profile of Mycobacterium tuberculosis specific T cells and antigen load[J].J Immunol，2007，178（8）：5217-5226.

[14] Mansouri D，Adimi P，Mirsaeidi M，et al.Inherited disorders of the IL-12-IFN-gamma axis in patients with disseminated BCG infection[J].Eur J Pediatr，2005，164（12）：753-757.

[15] Flynn JL，Chan J，Triebold K，et al.An essential role for interferon in resistance to Mycobacterium tuberculosis infection[J].J Exp Med，1993，178（6）：2249-2254.

（收稿日期：2014-08-14 本文編輯：李亞聰）

[10] 談介凡，沈燕雅，范惠娟.結(jié)核病患者細(xì)胞因子檢測及其保護(hù)性免疫機(jī)制研究[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2006，29（7）：612-614.

[11] Bean AG，Roach DR，Briscoe H，et al.Structural deficiencies in granuloma formation in TNF gene-targeted mice underlie the heightened susceptibility to aerosol Mycobacterium tuberculosis infection，which is not compensated for by lymphotoxin[J].J Immunol，1999，162（6）：3504-3511.

[12] Song CH，Lee JS，Nam HH，et al.IL-18 production in human pulmonary and pleural tuberculosis[J].Scand J Immunol，2002，56（6）：611-618.

[13] Millington KA，Innes JA，Hackforth S，et al.Dynamic relationshipbetween IFN-gamma and IL-2 profile of Mycobacterium tuberculosis specific T cells and antigen load[J].J Immunol，2007，178（8）：5217-5226.

[14] Mansouri D，Adimi P，Mirsaeidi M，et al.Inherited disorders of the IL-12-IFN-gamma axis in patients with disseminated BCG infection[J].Eur J Pediatr，2005，164（12）：753-757.

[15] Flynn JL，Chan J，Triebold K，et al.An essential role for interferon in resistance to Mycobacterium tuberculosis infection[J].J Exp Med，1993，178（6）：2249-2254.

（收稿日期：2014-08-14 本文編輯：李亞聰）