內生真菌次生代謝產物量與培養時間的關系

陳珣+楊鎮+肖軍等

摘要：從遼寧省西北地區根系土壤中分離得到No015號和No016號兩株內生真菌，對其進行液體培養，從第5天開始，連續13 d進行次生代謝產物干物質重的測量。結果表明，液體培養10 d為兩株內生真菌次生代謝產物產生的高峰期。

關鍵詞：內生真菌；次生代謝產物；培養時間；高峰期

中圖分類號：Q948.12 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）18-4286-02

植物內生菌（Endophyte）是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內部的真菌或細菌，其與宿主植物在長期的共進化過程中形成了一種穩定的互利共生關系[1]。植物內生菌能產生豐富多樣的次級代謝產物，而且具有多種生理活性，如抗菌、抗病毒、殺蟲、抗氧化等活性。因此，植物內生菌作為一種新的微生物資源引起了廣泛的關注，從植物內生菌次級代謝產物中尋找和發現新的活性化合物已成為植物內生菌研究的一個熱點[2]。但內生真菌次生代謝產物存在含量較低的問題，本試驗通過兩株內生真菌No015和No016的次級代謝產物量與培養時間的關系研究，旨在找到No015和No016兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期，以期獲得更多的次級代謝產物，為兩株內生真菌的進一步研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

內生真菌No015和No016由遼寧省農業科學院微生物工程中心從遼寧西北地區采集的根系土壤中分離并保存。

PA培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 內生真菌的分離純化 參照文獻[3]方法進行內生真菌的分離純化。

1.2.2 內生真菌代謝產物的制備與干物質測量 將活化的內生真菌菌種No015和No016接種于裝有100 mL PA培養基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的搖床培養，5 d后，連續13 d取樣，抽提菌絲體代謝物，將菌絲體代謝物中加入等體積的20%乙醇，浸提24 h，過濾，濾液保存。將各濾液吸取1 mL，風干后測量干物質量。

2 結果與分析

2.1 No015內生真菌代謝產物的干物質測量

由圖1可知，內生真菌No015液體培養10 d時產生的次生代謝產物量最高，5～10 d產生的次級代謝產物呈逐漸上升趨勢，10～17 d產生的次生代謝產物呈逐漸下降趨勢。這說明內生真菌No015液體培養10 d時是產生次級代謝產物的高峰時期。

2.2 No016內生真菌代謝產物的干物質測量

由圖2可知，內生真菌No016也是液體培養10 d時產生的次生代謝產物量最高，同時，5～10 d產生的次級代謝產物也呈逐漸上升趨勢，10～17 d產生的次生代謝產物也呈逐漸下降趨勢。這說明內生真菌No016液體培養10 d時也是次級代謝產物產生的高峰時期。

3 小結與討論

內生真菌生活在健康植物組織中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的環境（如高鹽、干旱）中；因此，現在內生真菌已被視為一種開發天然產物的有效資源，而且已發現了多種對人類生活和健康有益的化合物。

內生真菌次生代謝產物十分豐富，在人類的生產生活中具有廣闊的應用范圍[3]。Schulz等[4]的研究表明，內生真菌和那些受其代謝產物和環境影響的生物兩者互相影響，會產生更多的次級代謝產物。但由于內生真菌次生代謝產物含量較低，并且有些內生真菌次生代謝產物存在生物活性，這就對次生代謝產物的提取提出了新的要求[5]。

本試驗通過研究兩株內生真菌No015和No016的次級代謝產物量與培養時間的關系，從而找到No015和No016兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期，獲得更多的次級代謝產物，為后期次級代謝產物的研究提供更多的數量保證。兩株內生真菌次級代謝產物提取過程中，雖然5～10 d和10～17 d次級代謝產物增加和減少的程度不同，但都呈現先逐級增長后逐級減少的趨勢。兩株內生真菌均表現為在液體培養10 d時產生的次級代謝產物最多，這說明兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期均為10 d。兩株內生真菌的次級代謝產物量和培養時間的關系摸索后，今后可以在液體培養10 d后進行兩株內生真菌的次級代謝產物的提取工作。

參考文獻：

[1] 鄒文欣，譚仁祥.植物內生菌研究新進展[J].植物學報，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮麗軍，尚新艷，戈 梅，等.植物內生真菌HCCB00189代謝產物研究[J].植物新藥雜志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，呂長利，孫守慧，等.林木次生代謝產物提取方法的研究進展[J].中國森林病蟲，2008，27（1）：31-34.

摘要：從遼寧省西北地區根系土壤中分離得到No015號和No016號兩株內生真菌，對其進行液體培養，從第5天開始，連續13 d進行次生代謝產物干物質重的測量。結果表明，液體培養10 d為兩株內生真菌次生代謝產物產生的高峰期。

關鍵詞：內生真菌；次生代謝產物；培養時間；高峰期

中圖分類號：Q948.12 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）18-4286-02

植物內生菌（Endophyte）是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內部的真菌或細菌，其與宿主植物在長期的共進化過程中形成了一種穩定的互利共生關系[1]。植物內生菌能產生豐富多樣的次級代謝產物，而且具有多種生理活性，如抗菌、抗病毒、殺蟲、抗氧化等活性。因此，植物內生菌作為一種新的微生物資源引起了廣泛的關注，從植物內生菌次級代謝產物中尋找和發現新的活性化合物已成為植物內生菌研究的一個熱點[2]。但內生真菌次生代謝產物存在含量較低的問題，本試驗通過兩株內生真菌No015和No016的次級代謝產物量與培養時間的關系研究，旨在找到No015和No016兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期，以期獲得更多的次級代謝產物，為兩株內生真菌的進一步研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

內生真菌No015和No016由遼寧省農業科學院微生物工程中心從遼寧西北地區采集的根系土壤中分離并保存。

PA培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 內生真菌的分離純化 參照文獻[3]方法進行內生真菌的分離純化。

1.2.2 內生真菌代謝產物的制備與干物質測量 將活化的內生真菌菌種No015和No016接種于裝有100 mL PA培養基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的搖床培養，5 d后，連續13 d取樣，抽提菌絲體代謝物，將菌絲體代謝物中加入等體積的20%乙醇，浸提24 h，過濾，濾液保存。將各濾液吸取1 mL，風干后測量干物質量。

2 結果與分析

2.1 No015內生真菌代謝產物的干物質測量

由圖1可知，內生真菌No015液體培養10 d時產生的次生代謝產物量最高，5～10 d產生的次級代謝產物呈逐漸上升趨勢，10～17 d產生的次生代謝產物呈逐漸下降趨勢。這說明內生真菌No015液體培養10 d時是產生次級代謝產物的高峰時期。

2.2 No016內生真菌代謝產物的干物質測量

由圖2可知，內生真菌No016也是液體培養10 d時產生的次生代謝產物量最高，同時，5～10 d產生的次級代謝產物也呈逐漸上升趨勢，10～17 d產生的次生代謝產物也呈逐漸下降趨勢。這說明內生真菌No016液體培養10 d時也是次級代謝產物產生的高峰時期。

3 小結與討論

內生真菌生活在健康植物組織中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的環境（如高鹽、干旱）中；因此，現在內生真菌已被視為一種開發天然產物的有效資源，而且已發現了多種對人類生活和健康有益的化合物。

內生真菌次生代謝產物十分豐富，在人類的生產生活中具有廣闊的應用范圍[3]。Schulz等[4]的研究表明，內生真菌和那些受其代謝產物和環境影響的生物兩者互相影響，會產生更多的次級代謝產物。但由于內生真菌次生代謝產物含量較低，并且有些內生真菌次生代謝產物存在生物活性，這就對次生代謝產物的提取提出了新的要求[5]。

本試驗通過研究兩株內生真菌No015和No016的次級代謝產物量與培養時間的關系，從而找到No015和No016兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期，獲得更多的次級代謝產物，為后期次級代謝產物的研究提供更多的數量保證。兩株內生真菌次級代謝產物提取過程中，雖然5～10 d和10～17 d次級代謝產物增加和減少的程度不同，但都呈現先逐級增長后逐級減少的趨勢。兩株內生真菌均表現為在液體培養10 d時產生的次級代謝產物最多，這說明兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期均為10 d。兩株內生真菌的次級代謝產物量和培養時間的關系摸索后，今后可以在液體培養10 d后進行兩株內生真菌的次級代謝產物的提取工作。

參考文獻：

[1] 鄒文欣，譚仁祥.植物內生菌研究新進展[J].植物學報，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮麗軍，尚新艷，戈 梅，等.植物內生真菌HCCB00189代謝產物研究[J].植物新藥雜志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，呂長利，孫守慧，等.林木次生代謝產物提取方法的研究進展[J].中國森林病蟲，2008，27（1）：31-34.

摘要：從遼寧省西北地區根系土壤中分離得到No015號和No016號兩株內生真菌，對其進行液體培養，從第5天開始，連續13 d進行次生代謝產物干物質重的測量。結果表明，液體培養10 d為兩株內生真菌次生代謝產物產生的高峰期。

關鍵詞：內生真菌；次生代謝產物；培養時間；高峰期

中圖分類號：Q948.12 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）18-4286-02

植物內生菌（Endophyte）是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內部的真菌或細菌，其與宿主植物在長期的共進化過程中形成了一種穩定的互利共生關系[1]。植物內生菌能產生豐富多樣的次級代謝產物，而且具有多種生理活性，如抗菌、抗病毒、殺蟲、抗氧化等活性。因此，植物內生菌作為一種新的微生物資源引起了廣泛的關注，從植物內生菌次級代謝產物中尋找和發現新的活性化合物已成為植物內生菌研究的一個熱點[2]。但內生真菌次生代謝產物存在含量較低的問題，本試驗通過兩株內生真菌No015和No016的次級代謝產物量與培養時間的關系研究，旨在找到No015和No016兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期，以期獲得更多的次級代謝產物，為兩株內生真菌的進一步研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

內生真菌No015和No016由遼寧省農業科學院微生物工程中心從遼寧西北地區采集的根系土壤中分離并保存。

PA培養基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 內生真菌的分離純化 參照文獻[3]方法進行內生真菌的分離純化。

1.2.2 內生真菌代謝產物的制備與干物質測量 將活化的內生真菌菌種No015和No016接種于裝有100 mL PA培養基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的搖床培養，5 d后，連續13 d取樣，抽提菌絲體代謝物，將菌絲體代謝物中加入等體積的20%乙醇，浸提24 h，過濾，濾液保存。將各濾液吸取1 mL，風干后測量干物質量。

2 結果與分析

2.1 No015內生真菌代謝產物的干物質測量

由圖1可知，內生真菌No015液體培養10 d時產生的次生代謝產物量最高，5～10 d產生的次級代謝產物呈逐漸上升趨勢，10～17 d產生的次生代謝產物呈逐漸下降趨勢。這說明內生真菌No015液體培養10 d時是產生次級代謝產物的高峰時期。

2.2 No016內生真菌代謝產物的干物質測量

由圖2可知，內生真菌No016也是液體培養10 d時產生的次生代謝產物量最高，同時，5～10 d產生的次級代謝產物也呈逐漸上升趨勢，10～17 d產生的次生代謝產物也呈逐漸下降趨勢。這說明內生真菌No016液體培養10 d時也是次級代謝產物產生的高峰時期。

3 小結與討論

內生真菌生活在健康植物組織中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的環境（如高鹽、干旱）中；因此，現在內生真菌已被視為一種開發天然產物的有效資源，而且已發現了多種對人類生活和健康有益的化合物。

內生真菌次生代謝產物十分豐富，在人類的生產生活中具有廣闊的應用范圍[3]。Schulz等[4]的研究表明，內生真菌和那些受其代謝產物和環境影響的生物兩者互相影響，會產生更多的次級代謝產物。但由于內生真菌次生代謝產物含量較低，并且有些內生真菌次生代謝產物存在生物活性，這就對次生代謝產物的提取提出了新的要求[5]。

本試驗通過研究兩株內生真菌No015和No016的次級代謝產物量與培養時間的關系，從而找到No015和No016兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期，獲得更多的次級代謝產物，為后期次級代謝產物的研究提供更多的數量保證。兩株內生真菌次級代謝產物提取過程中，雖然5～10 d和10～17 d次級代謝產物增加和減少的程度不同，但都呈現先逐級增長后逐級減少的趨勢。兩株內生真菌均表現為在液體培養10 d時產生的次級代謝產物最多，這說明兩株內生真菌次級代謝產物產生的高峰期均為10 d。兩株內生真菌的次級代謝產物量和培養時間的關系摸索后，今后可以在液體培養10 d后進行兩株內生真菌的次級代謝產物的提取工作。

參考文獻：

[1] 鄒文欣，譚仁祥.植物內生菌研究新進展[J].植物學報，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮麗軍，尚新艷，戈 梅，等.植物內生真菌HCCB00189代謝產物研究[J].植物新藥雜志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，呂長利，孫守慧，等.林木次生代謝產物提取方法的研究進展[J].中國森林病蟲，2008，27（1）：31-34.