桑黃菌絲多糖的提取及多糖成分分析

許謙

摘要：以桑黃（Phellinus igniarius）菌絲體為材料，探索熱水提取法提取桑黃菌絲體多糖的工藝，并分析桑黃多糖的主要組成成分。試驗在100 ℃的恒溫下，以多糖提取率為考察目標，分別對提取料液比（m/V，g：mL）和提取時間進行考察，利用硅膠薄層分析的方法，對桑黃多糖的成分做初步測定。熱水提取的最優工藝為在水提溫度為100 ℃條件下，料液比1∶45、浸提時間3.5 h，此時桑黃粗多糖提取率為3.99%；桑黃菌絲體多糖的單糖組成初步確定有D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖。

關鍵詞：桑黃（Phellinus igniarius）；熱水提取法；多糖；正交試驗

中圖分類號：S646.9；TQ464.1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）18-4405-03

桑黃（Phellinus igniarius）是一種珍貴的藥用真菌，主要寄生在桑樹、楊樹等樹干上。目前，關于桑黃的文獻報道主要集中在多糖提取、抗癌機理及分子結構研究等?，F代醫學研究表明，一些桑黃子實體的提取物具有明顯的抗癌作用，對小鼠肉瘤S180的抑制率為96.7%，對小鼠艾氏癌的抑制率為87%[1]。藥理學研究表明，三萜、多糖和黃酮類物質是其活性成分，其中以多糖為主[2，3]，在實際多糖產出中，菌絲體粗多糖含量是子實體的22.48倍[4]。有體外細胞試驗表明，蛋白多糖與粗多糖對腫瘤細胞EC109和SiHa的抑制率沒有明顯差異[5]。

目前，常用的桑黃多糖的提取方法有熱水提取法[6]和超聲波輔助提取法[7]，這兩種方法時間長，但操作簡單。歐陽小麗等[8]研究了微波法提取茶薪菇菌絲體多糖的最佳工藝，無論在節能、高效還是在試驗操作方面，微波法都是最適的工藝，但是微波法有其局限性，即不適于大批量的工業生產。本試驗采用常用的熱水提取法提取桑黃菌絲多糖，優化最佳提取工藝，從而提高桑黃菌絲多糖得率，以期對工業發酵生產起到一定的指導作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

材料：桑黃菌絲體；D-葡萄糖，D-木糖，D-半乳糖，L-阿拉伯糖，L-鼠李糖，D-乳糖；硅膠G薄層板。

Sevage試劑：三氯甲烷∶正丁醇=4∶1。

展開劑：正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水=12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5。

葡萄糖標準溶液：精密稱取105 ℃下干燥恒重的分析純葡萄糖0.058 2 g，置于小燒杯中，加去離子水溶解并轉移至1 000 mL 容量瓶中，搖勻，配制成濃度為0.058 2 mg/mL葡萄糖標準溶液。

蒽酮-硫酸試劑：精密稱取蒽酮200 mg于100 mL容量瓶中，用80%濃硫酸緩慢定容至刻度，邊加邊攪拌，搖勻，直至蒽酮完全溶解，此時溶液呈黃色透明狀。將得到的蒽酮-硫酸試劑放于棕色瓶中置于陰涼處密封保存（當日配制使用）。

顯色劑：二苯胺1 g，苯胺1 mL，85%磷酸5 mL混合溶解于50 mL丙酮溶液中。

儀器：恒溫水浴鍋；離心機；真空干燥箱；層析缸。

1.2 試驗方法

1.2.1 桑黃菌絲體干粉的制備 取適量（6 g）桑黃菌絲體，用去離子水洗凈，置50 ℃烘箱中干燥12 h，取出后充分研磨成粉，然后用100目篩過濾，備用。

1.2.2 試驗設計 以多糖提取率為考察目標，在100 ℃的恒溫下，分別對提取料液比（m/V，g：mL，下同）和時間進行考察，每個條件下取桑黃菌絲體干粉0.2 g，按照2個因素3個水平共有9種設計方案進行桑黃菌絲體多糖的提取，按相應的提取料液比加入去離子水，于相應溫度下提取相應的時間；提取液經3 500 r/min離心15 min，取上清液進行粗多糖的制備。

1.2.3 醇沉法得粗多糖[9] 采用乙醇等有機試劑作沉淀劑，通過降低多糖溶液的介電常數和溶解度，使多糖從溶液中沉淀出來。精確量取一定體積的多糖溶液，與3倍體積的95%的乙醇混勻，4 ℃下沉淀過夜，3 500 r/min離心15 min，收集沉淀，干燥得桑黃粗多糖。

1.2.4 sevage法脫蛋白 取桑黃粗多糖溶于熱水（10 mL）中，按多糖溶液體積加入0.2倍sevage試劑 ，混合后劇烈震蕩30 min，靜置1 h，3 500 r/min離心20 min，取上清液后再加入0.2倍sevage試劑，重復此操作2次，至有機層無沉淀為止。收集上清液，從上清液中取1 mL用于多糖含量測定，剩余上清液用4倍體積無水乙醇4 ℃沉淀多糖，次日3 500 r/min離心15 min，收集沉淀，并依次用丙酮、無水乙醇、乙醚洗滌，常規干燥得脫蛋白多糖，用于多糖成分的分析。

1.2.5 蒽酮-硫酸法測定多糖含量[10]

1）多糖得率測定。多糖得率=多糖質量/桑黃菌絲體干粉質量×100%

2）標準曲線的制作及粗多糖吸光度的測定。準確移取濃度為0.058 2 mg/mL 葡萄糖標準溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9 mL置于具塞試管中，以去離子補足至1 mL，加入蒽酮-硫酸試劑4 mL，加塞，立即搖勻。迅速浸于冰水浴中冷卻，各管加完后置于100 ℃水浴中顯色10 min，管口加塞，以防水分蒸發。取出，冰浴速冷至室溫，以去離子水為空白，于620 nm波長處測吸光度。以標準葡萄糖含量（mg/mL）為縱坐標，以吸光度（A）為橫坐標，繪制標準曲線。

取“1.2.4”中上清液1 mL稀釋8倍，再從中精確量取1 mL于試管中，加入蒽酮試劑4 mL，立即搖勻。迅速冷卻后于100 ℃水浴中顯色10 min。取出，冰浴速冷至室溫，于620 nm波長處測定其吸光度。代入回歸方程求出多糖溶液中多糖含量。

1.2.6 桑黃菌絲體多糖成分分析 運用薄層色譜法分析多糖組成成分[11]。

1）精確稱取脫蛋白多糖10 mg，10 mg樣品中加入5 mL 1 mol/L硫酸，密封試管100 ℃下水解4 h，水解液冷卻后加入足量碳酸鋇中和，4 500 r/min下離心10 min后收集上清液，沉淀以5 mL 50%乙醇洗滌后再離心，合并上清液。上清液于40 ℃下真空干燥，殘渣溶于1 mL去離子水中備用。

同樣，精確稱定D-葡萄糖3 mg、D-木糖3 mg、 D-半乳糖3 mg、L-阿拉伯糖3 mg、L-鼠李糖3 mg、D-乳糖3 mg各溶于2 mL去離子水中制成對照糖溶液。

2）薄層色譜層析。①硅膠G薄層板。試驗前取一塊硅膠G板于110 ℃烘箱中活化1 h，取出后即可使用，亦可貯于干燥器中備用。薄層表面要求平整，厚薄均勻。②點樣。選取制備好的薄板一塊，在距1.5 cm底邊的直線上選7個點，各點間距2 cm，用調至1 μL的移液槍于各點處分別點上不同的糖樣品，樣點直徑盡量不超過2 mm，前次樣點干后才能再次復點，重復3次。③展開。以體積比12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水為展開劑倒入直徑為15 cm的培養皿，將培養皿放入層析缸，待薄層板上樣品點自然干燥后，將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中的培養皿中，自下向上展層，當展層溶劑到達離薄板頂端約3 cm 處時取出薄板，前沿作一記號，用吹風機將其吹干。④顯色。待薄板吹干后，均勻地噴上一層苯胺-二苯胺溶液顯色劑，于85 ℃下顯色至斑點清晰，則各糖分別顯出各自的顏色。

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制

以吸光度為橫坐標，葡萄糖含量為縱坐標，繪制標準曲線，結果見圖1。由圖1可以看出，在葡萄糖含量為0.000～0.100 mg/mL 的范圍內，葡萄糖含量與吸光度線性關系良好。經線性回歸標準曲線方程為Y=0.106 0A+0.000 2，R2=0.999。

2.2 各種方案試驗結果

2因素3水平共有9中試驗方案，9種試驗方案結果見表2。從表2可以看出，在水提溫度為100 ℃的條件下，料液比1∶45，提取時間3.5 h，此時多糖提取率為3.99%，而在料液比為1∶55，提取時間為4.0 h的提取率最小為0.61%。

2.3 薄層色譜結果

選擇展開劑體積比為12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水薄層圖譜見圖2。由圖2可以得出，點樣線到溶劑前沿的距離為11.5 cm，且已知公式Rf=點樣線到斑點中心的距離/點樣線到溶劑前沿的距離，則各糖對應的Rf值如下表3。綜合考慮可得出桑黃粗多糖的單糖組成接近為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖。因薄層色譜影響因素較多，如展開劑、顯色劑的選擇，顯色時，顯色劑量的控制等，所以單糖種類確定、精確的單糖組成和含量需進一步運用其他技術進行分析，如氣相色譜等。

3 小結與討論

藥用真菌近年來越來越被人們所重視，如桑黃具有極高的藥用價值，其中以多糖為主。由于其具有多種功效，因此對多糖的研究已成為醫藥食品界的熱門領域。

由于蒽酮-硫酸法幾乎可以測定溶液中所有碳水化合物的含量，所以用該法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物的總量[11-13]。因此，蒽酮-硫酸法測定結果略高于苯酚-硫酸法，所測結果更為合理準確。

本試驗考察了料液比、提取時間2個因素分別對多糖提取率的影響，結合其他考察因素得出最佳的提取條件為：在水提溫度為100 ℃的前提下，料液比1∶45，提取時間3.5 h，多糖提取率最高可達3.99%。這個桑黃多糖提取率高于游慶紅等[6]的桑黃多糖提取率1.133%、尹秀蓮等[13]的桑黃多糖提取率1.46%及秦俊哲等[11]的桑黃子實體多糖提取率3.43%。這個試驗用一種比較簡單的方法獲得了較高的多糖提取率，對于桑黃多糖的工業化提取具有重要的指導意義。

運用薄層色譜法初步確定桑黃菌絲體多糖的單糖組成為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖，這與秦俊哲等[11]測定的桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖，日本桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖具有較大差別，產生不同的原因有品種的原因，也可能因為菌絲體與子實體原材料不同所造成。

參考文獻：

[1] IKEKAWA T， NAKANISHI M， VEHARA N， et al. Antitumor action of some basidiomycetes， especially Phellinus linteus[J]. Gann， 1986，59（9）：155-157.

[2] 呂英華，王建芳，李玉平，等.藥用真菌桑黃的研究進展[J].蠶業科學，2009，35（1）：204-210.

[3] SASAKI T，FULII K，SUGURA M，et al. Antitumor polysaccharides from some polyporaceae. Ganderma applanatum（Pers.） Pat and Phellinus linteus Teng[J]. Chem Pharm Bull， 1971， 19（10）：821-826.

[4] 王英輝，許泓瑜，敖宗華，等.桑黃發酵菌粉與桑黃子實體成分分析比較[J].食品與發酵工業，2008，34（2）：126-129.

[5] 梁大勇，黃 芳，趙 晨，等.桑黃粗多糖除蛋白及抗腫瘤活性[J].生物加工過程，2012，10（3）：56-60.

[6] 游慶紅，尹秀蓮.響應面法優化桑黃多糖提取工藝研究[J].中國釀造，2010（5）：67-69.

[7] 逯家輝，董 媛，張益波，等.響應面法優化桑黃菌絲體多糖超聲波提取工藝的研究[J].林產化學與工業，2009，29（2）：63-68.

[8] 歐陽小麗，張曉昱，王宏勛，等.茶薪菇菌絲體多糖提取方法的研究[J].中國食用菌，2004，23（5）：35-37.

[9] KIM G Y，PARK H S，NAM B H.Purification and characterization of acidic proteo-heteroglycan from the fruiting body of Phellinus linteus （Berk. & M.A. Curtis） Teng[J].Bioresource Technology， 2003，89（1）：81-86.

[10] 劉曉涵，陳永剛，林 勵，等.蒽酮-硫酸法與苯酚-硫酸法測定枸杞中多糖含量的比較[J].食品科技，2009，34（4）：270-272.

[11] 秦俊哲，劉 華.桑黃子實體多糖工藝及單糖組成研究[J].中國食用菌，2008，27（6）：43-45.

[12] 莊楚強，何春雄.應用數理統計基礎[M].第三版.廣州：華南理工大學出版社，2009.

[13] 尹秀蓮，游慶紅.超聲輔助復合酶法提取桑黃多糖[J].食品與機械，2011（4）：58-60.

1.2.6 桑黃菌絲體多糖成分分析 運用薄層色譜法分析多糖組成成分[11]。

1）精確稱取脫蛋白多糖10 mg，10 mg樣品中加入5 mL 1 mol/L硫酸，密封試管100 ℃下水解4 h，水解液冷卻后加入足量碳酸鋇中和，4 500 r/min下離心10 min后收集上清液，沉淀以5 mL 50%乙醇洗滌后再離心，合并上清液。上清液于40 ℃下真空干燥，殘渣溶于1 mL去離子水中備用。

同樣，精確稱定D-葡萄糖3 mg、D-木糖3 mg、 D-半乳糖3 mg、L-阿拉伯糖3 mg、L-鼠李糖3 mg、D-乳糖3 mg各溶于2 mL去離子水中制成對照糖溶液。

2）薄層色譜層析。①硅膠G薄層板。試驗前取一塊硅膠G板于110 ℃烘箱中活化1 h，取出后即可使用，亦可貯于干燥器中備用。薄層表面要求平整，厚薄均勻。②點樣。選取制備好的薄板一塊，在距1.5 cm底邊的直線上選7個點，各點間距2 cm，用調至1 μL的移液槍于各點處分別點上不同的糖樣品，樣點直徑盡量不超過2 mm，前次樣點干后才能再次復點，重復3次。③展開。以體積比12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水為展開劑倒入直徑為15 cm的培養皿，將培養皿放入層析缸，待薄層板上樣品點自然干燥后，將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中的培養皿中，自下向上展層，當展層溶劑到達離薄板頂端約3 cm 處時取出薄板，前沿作一記號，用吹風機將其吹干。④顯色。待薄板吹干后，均勻地噴上一層苯胺-二苯胺溶液顯色劑，于85 ℃下顯色至斑點清晰，則各糖分別顯出各自的顏色。

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制

以吸光度為橫坐標，葡萄糖含量為縱坐標，繪制標準曲線，結果見圖1。由圖1可以看出，在葡萄糖含量為0.000～0.100 mg/mL 的范圍內，葡萄糖含量與吸光度線性關系良好。經線性回歸標準曲線方程為Y=0.106 0A+0.000 2，R2=0.999。

2.2 各種方案試驗結果

2因素3水平共有9中試驗方案，9種試驗方案結果見表2。從表2可以看出，在水提溫度為100 ℃的條件下，料液比1∶45，提取時間3.5 h，此時多糖提取率為3.99%，而在料液比為1∶55，提取時間為4.0 h的提取率最小為0.61%。

2.3 薄層色譜結果

選擇展開劑體積比為12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水薄層圖譜見圖2。由圖2可以得出，點樣線到溶劑前沿的距離為11.5 cm，且已知公式Rf=點樣線到斑點中心的距離/點樣線到溶劑前沿的距離，則各糖對應的Rf值如下表3。綜合考慮可得出桑黃粗多糖的單糖組成接近為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖。因薄層色譜影響因素較多，如展開劑、顯色劑的選擇，顯色時，顯色劑量的控制等，所以單糖種類確定、精確的單糖組成和含量需進一步運用其他技術進行分析，如氣相色譜等。

3 小結與討論

藥用真菌近年來越來越被人們所重視，如桑黃具有極高的藥用價值，其中以多糖為主。由于其具有多種功效，因此對多糖的研究已成為醫藥食品界的熱門領域。

由于蒽酮-硫酸法幾乎可以測定溶液中所有碳水化合物的含量，所以用該法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物的總量[11-13]。因此，蒽酮-硫酸法測定結果略高于苯酚-硫酸法，所測結果更為合理準確。

本試驗考察了料液比、提取時間2個因素分別對多糖提取率的影響，結合其他考察因素得出最佳的提取條件為：在水提溫度為100 ℃的前提下，料液比1∶45，提取時間3.5 h，多糖提取率最高可達3.99%。這個桑黃多糖提取率高于游慶紅等[6]的桑黃多糖提取率1.133%、尹秀蓮等[13]的桑黃多糖提取率1.46%及秦俊哲等[11]的桑黃子實體多糖提取率3.43%。這個試驗用一種比較簡單的方法獲得了較高的多糖提取率，對于桑黃多糖的工業化提取具有重要的指導意義。

運用薄層色譜法初步確定桑黃菌絲體多糖的單糖組成為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖，這與秦俊哲等[11]測定的桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖，日本桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖具有較大差別，產生不同的原因有品種的原因，也可能因為菌絲體與子實體原材料不同所造成。

參考文獻：

[1] IKEKAWA T， NAKANISHI M， VEHARA N， et al. Antitumor action of some basidiomycetes， especially Phellinus linteus[J]. Gann， 1986，59（9）：155-157.

[2] 呂英華，王建芳，李玉平，等.藥用真菌桑黃的研究進展[J].蠶業科學，2009，35（1）：204-210.

[3] SASAKI T，FULII K，SUGURA M，et al. Antitumor polysaccharides from some polyporaceae. Ganderma applanatum（Pers.） Pat and Phellinus linteus Teng[J]. Chem Pharm Bull， 1971， 19（10）：821-826.

[4] 王英輝，許泓瑜，敖宗華，等.桑黃發酵菌粉與桑黃子實體成分分析比較[J].食品與發酵工業，2008，34（2）：126-129.

[5] 梁大勇，黃 芳，趙 晨，等.桑黃粗多糖除蛋白及抗腫瘤活性[J].生物加工過程，2012，10（3）：56-60.

[6] 游慶紅，尹秀蓮.響應面法優化桑黃多糖提取工藝研究[J].中國釀造，2010（5）：67-69.

[7] 逯家輝，董 媛，張益波，等.響應面法優化桑黃菌絲體多糖超聲波提取工藝的研究[J].林產化學與工業，2009，29（2）：63-68.

[8] 歐陽小麗，張曉昱，王宏勛，等.茶薪菇菌絲體多糖提取方法的研究[J].中國食用菌，2004，23（5）：35-37.

[9] KIM G Y，PARK H S，NAM B H.Purification and characterization of acidic proteo-heteroglycan from the fruiting body of Phellinus linteus （Berk. & M.A. Curtis） Teng[J].Bioresource Technology， 2003，89（1）：81-86.

[10] 劉曉涵，陳永剛，林 勵，等.蒽酮-硫酸法與苯酚-硫酸法測定枸杞中多糖含量的比較[J].食品科技，2009，34（4）：270-272.

[11] 秦俊哲，劉 華.桑黃子實體多糖工藝及單糖組成研究[J].中國食用菌，2008，27（6）：43-45.

[12] 莊楚強，何春雄.應用數理統計基礎[M].第三版.廣州：華南理工大學出版社，2009.

[13] 尹秀蓮，游慶紅.超聲輔助復合酶法提取桑黃多糖[J].食品與機械，2011（4）：58-60.

1.2.6 桑黃菌絲體多糖成分分析 運用薄層色譜法分析多糖組成成分[11]。

1）精確稱取脫蛋白多糖10 mg，10 mg樣品中加入5 mL 1 mol/L硫酸，密封試管100 ℃下水解4 h，水解液冷卻后加入足量碳酸鋇中和，4 500 r/min下離心10 min后收集上清液，沉淀以5 mL 50%乙醇洗滌后再離心，合并上清液。上清液于40 ℃下真空干燥，殘渣溶于1 mL去離子水中備用。

同樣，精確稱定D-葡萄糖3 mg、D-木糖3 mg、 D-半乳糖3 mg、L-阿拉伯糖3 mg、L-鼠李糖3 mg、D-乳糖3 mg各溶于2 mL去離子水中制成對照糖溶液。

2）薄層色譜層析。①硅膠G薄層板。試驗前取一塊硅膠G板于110 ℃烘箱中活化1 h，取出后即可使用，亦可貯于干燥器中備用。薄層表面要求平整，厚薄均勻。②點樣。選取制備好的薄板一塊，在距1.5 cm底邊的直線上選7個點，各點間距2 cm，用調至1 μL的移液槍于各點處分別點上不同的糖樣品，樣點直徑盡量不超過2 mm，前次樣點干后才能再次復點，重復3次。③展開。以體積比12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水為展開劑倒入直徑為15 cm的培養皿，將培養皿放入層析缸，待薄層板上樣品點自然干燥后，將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中的培養皿中，自下向上展層，當展層溶劑到達離薄板頂端約3 cm 處時取出薄板，前沿作一記號，用吹風機將其吹干。④顯色。待薄板吹干后，均勻地噴上一層苯胺-二苯胺溶液顯色劑，于85 ℃下顯色至斑點清晰，則各糖分別顯出各自的顏色。

2 結果與分析

2.1 標準曲線的繪制

以吸光度為橫坐標，葡萄糖含量為縱坐標，繪制標準曲線，結果見圖1。由圖1可以看出，在葡萄糖含量為0.000～0.100 mg/mL 的范圍內，葡萄糖含量與吸光度線性關系良好。經線性回歸標準曲線方程為Y=0.106 0A+0.000 2，R2=0.999。

2.2 各種方案試驗結果

2因素3水平共有9中試驗方案，9種試驗方案結果見表2。從表2可以看出，在水提溫度為100 ℃的條件下，料液比1∶45，提取時間3.5 h，此時多糖提取率為3.99%，而在料液比為1∶55，提取時間為4.0 h的提取率最小為0.61%。

2.3 薄層色譜結果

選擇展開劑體積比為12.5∶4.5∶5.0∶1.5∶1.5的正丁醇∶甲醇∶氯仿∶冰醋酸∶水薄層圖譜見圖2。由圖2可以得出，點樣線到溶劑前沿的距離為11.5 cm，且已知公式Rf=點樣線到斑點中心的距離/點樣線到溶劑前沿的距離，則各糖對應的Rf值如下表3。綜合考慮可得出桑黃粗多糖的單糖組成接近為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖。因薄層色譜影響因素較多，如展開劑、顯色劑的選擇，顯色時，顯色劑量的控制等，所以單糖種類確定、精確的單糖組成和含量需進一步運用其他技術進行分析，如氣相色譜等。

3 小結與討論

藥用真菌近年來越來越被人們所重視，如桑黃具有極高的藥用價值，其中以多糖為主。由于其具有多種功效，因此對多糖的研究已成為醫藥食品界的熱門領域。

由于蒽酮-硫酸法幾乎可以測定溶液中所有碳水化合物的含量，所以用該法測出的碳水化合物含量，實際上是溶液中全部可溶性碳水化合物的總量[11-13]。因此，蒽酮-硫酸法測定結果略高于苯酚-硫酸法，所測結果更為合理準確。

本試驗考察了料液比、提取時間2個因素分別對多糖提取率的影響，結合其他考察因素得出最佳的提取條件為：在水提溫度為100 ℃的前提下，料液比1∶45，提取時間3.5 h，多糖提取率最高可達3.99%。這個桑黃多糖提取率高于游慶紅等[6]的桑黃多糖提取率1.133%、尹秀蓮等[13]的桑黃多糖提取率1.46%及秦俊哲等[11]的桑黃子實體多糖提取率3.43%。這個試驗用一種比較簡單的方法獲得了較高的多糖提取率，對于桑黃多糖的工業化提取具有重要的指導意義。

運用薄層色譜法初步確定桑黃菌絲體多糖的單糖組成為D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯糖和D-乳糖，這與秦俊哲等[11]測定的桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖，日本桑黃子實體多糖的單糖組成為鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖具有較大差別，產生不同的原因有品種的原因，也可能因為菌絲體與子實體原材料不同所造成。

參考文獻：

[1] IKEKAWA T， NAKANISHI M， VEHARA N， et al. Antitumor action of some basidiomycetes， especially Phellinus linteus[J]. Gann， 1986，59（9）：155-157.

[2] 呂英華，王建芳，李玉平，等.藥用真菌桑黃的研究進展[J].蠶業科學，2009，35（1）：204-210.

[3] SASAKI T，FULII K，SUGURA M，et al. Antitumor polysaccharides from some polyporaceae. Ganderma applanatum（Pers.） Pat and Phellinus linteus Teng[J]. Chem Pharm Bull， 1971， 19（10）：821-826.

[4] 王英輝，許泓瑜，敖宗華，等.桑黃發酵菌粉與桑黃子實體成分分析比較[J].食品與發酵工業，2008，34（2）：126-129.

[5] 梁大勇，黃 芳，趙 晨，等.桑黃粗多糖除蛋白及抗腫瘤活性[J].生物加工過程，2012，10（3）：56-60.

[6] 游慶紅，尹秀蓮.響應面法優化桑黃多糖提取工藝研究[J].中國釀造，2010（5）：67-69.

[7] 逯家輝，董 媛，張益波，等.響應面法優化桑黃菌絲體多糖超聲波提取工藝的研究[J].林產化學與工業，2009，29（2）：63-68.

[8] 歐陽小麗，張曉昱，王宏勛，等.茶薪菇菌絲體多糖提取方法的研究[J].中國食用菌，2004，23（5）：35-37.

[9] KIM G Y，PARK H S，NAM B H.Purification and characterization of acidic proteo-heteroglycan from the fruiting body of Phellinus linteus （Berk. & M.A. Curtis） Teng[J].Bioresource Technology， 2003，89（1）：81-86.

[10] 劉曉涵，陳永剛，林 勵，等.蒽酮-硫酸法與苯酚-硫酸法測定枸杞中多糖含量的比較[J].食品科技，2009，34（4）：270-272.

[11] 秦俊哲，劉 華.桑黃子實體多糖工藝及單糖組成研究[J].中國食用菌，2008，27（6）：43-45.

[12] 莊楚強，何春雄.應用數理統計基礎[M].第三版.廣州：華南理工大學出版社，2009.

[13] 尹秀蓮，游慶紅.超聲輔助復合酶法提取桑黃多糖[J].食品與機械，2011（4）：58-60.