血清酶檢測K 因子的探討分析

惲志華（江蘇省常州市武進人民醫院檢驗科 213162）

國際標準化組織（ISO）文件ISO17511和ISO18153對臨床檢驗工作中的量值溯源進行了說明，認為量值溯源的關鍵是采用參考系統，即通過采用參考測量程序或參考物質的方法，對臨床檢驗結果的準確性進行驗證。參考系統除包括參考測量程序和參考物質外，還包括從事參考測量的實驗室［1］。在開展臨床檢驗工作的醫學實驗室中，約15%的實驗室存在因標準品誤差而導致檢測準確度不合格的現象［2］。在這種情況下，本組利用貝克曼原裝配套酶復合校準品定標6種酶類［丙氨酸氨基轉移酶（ALT）、肌酸激酶（CK）、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、乳酸脫氫酶（LD）、堿性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰轉移酶（γ－GT）］，所得實際K 因子和理論參數K 因子值對同一定值質控血清中6種酶測定結果進行比較，為定值質控血清和酶校準品在室內質控中的應用及溯源性的影響因素研究提供試驗數據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑日本Olympus AU－5421全自動生化分析儀；由貝克曼公司提供原裝試劑ALT（OSR6107）、AST（OSR6109）、ALP（OSR6104）、GGT（OSR6120）、CK（OSR6179）LD（OSR6128）。定值質控血清由伯樂（Bio－Rad）公司提供（Liquid Assayed Multiqual）血清，批號分別為45663（下稱質控高值）和45662（下稱質控中值），血清酶校準品為貝克曼公司提供的原裝酶復合校準品（Beckman Coulter System Calibrator L66300－0115－ML01），批號為66300。

1.2 方法

1.2.1 理論K 因子法測定按儀器、試劑的操作要求輸入理論K 因子值，進行定值質控血清高值和中值的測定，重復3次取平均值。理論K 因子的換算方法：

1.2.2 酶校準品實際校準后測定用酶校準品進行校準后根據實際K 因子檢測定值質控血清高值和中值，重復3次取平均值。

2 結果

2.1 用貝克曼原裝酶復合校準品進行校準得到實際K 因子，同時通過計算得到理論K 因子。見表1。

表1 各指標實際校準K 因子與理論計算K 因子

2.2 分別檢測6種酶中值和高值結果，并與伯樂公司提供的結果進行比較，見表2。

表2 各指標中值和高值標本檢測結果

2.3 從表1、2中可以看出利用貝克曼原裝復合校準品進行校準測得的ALT、AST、ALP、CK、LDH 實際校準K 因子與理論計算K 因子之間的相對偏倚達20.0%～30.0%，只有GGT 之間相對偏倚為3.0%。以實際校準校準所得K 因子檢測美國伯樂公司提供的中值和高值定值質控品，得知ALT、AST、ALP、GGT、CK、LDH 檢測值均接近于伯樂公司提供的標示預期結果，而使用理論K 因子的檢測結果明顯與伯樂公司提供結果相差巨大，其相對偏倚達20.0%～30.0%，其中ALT、AST、CK、LD 相差尤為明顯。

3 討論

目前，外周血中酶成分的測定通常是通過測量其催化反應的速度而進行定量檢測，以酶催化濃度表示。與利用免疫反應原理，將酶視為蛋白質進行檢測相比，酶促反應檢測的優點在于快速、敏感度高、特異性強等。然而，酶催化濃度是一種相對結果，結果的準確性依賴于檢測原理、單位的定義和檢測條件，具體而言，其影響因素包括（1）酶促反應的底物、輔因子、變構劑、活化劑的種類和濃度；（2）在采用偶聯酶促反應檢測原理時，涉及的輔助酶和指示酶的種類和濃度；（3）反應體系的pH、離子強度和緩沖劑種類；（4）其他因素，如抑制劑、雜酶等。上述因素中的任何一項發生變化，均有可能導致測定結果的改變。由于影響酶促反應的因素較多，導致臨床檢驗工作中，酶成分檢測的質量控制效果較其他生化項目相對較差［3］。

為了提高酶成分檢測結果的準確性和精密度，確保檢測結果在不同方法學之間和不同實驗室之間具有可比性，消除酶成分參考范圍不一致的問題，提高酶成分檢測的標準化程度勢在必行。目前，國內外主要采用兩種方法實現酶成分檢測的標準化，即使用推薦方法或者使用經參考方法定值的酶參考物以校正常規檢測方法［4］。

國際臨床化學聯合會（IFCC）最早于1979年頒布了血清（血漿）酶催化濃度檢測方法總則，并于1985年制定了AST 和ALT 檢測的推薦方法［5－7］。隨后，某些國家或地區相繼頒布了GGT、ALP、CK、LDH 檢測的推薦方法，但與IFCC 的推薦方法相比，均存在一定程度的差異。通過使用推薦方法，酶測定的規范化、一致化程度有所提高，不同實驗室間的檢測結果也具有了可比性，檢測結果的準確性和精密度也有了明顯提高。然而，即使如此，針對同一種酶成分，目前尚無法實現推廣采用推薦的單一方法的目標。

本次研究擬通過具有溯源的定值質控血清及血清酶校準品在實際工作中的應用，探討酶校準物實際檢測K 因子與理論計算K 因子的差異。比較使用血清酶校準品定標后測定定值血清6種酶（ALT、AST、ALP、GGT、CK、LDH）結果有無明顯差異，分析發現只有GGT 的偏離程度小于3.5%，其種5種酶（ALT、AST、CK、ALP、LD）的相對偏倚均達20.0%～30.0%，其結果有明顯差異。使用校準品所得K 因子檢測6種血清酶均值與伯樂定值質控血清標示值間的相對偏倚均小于3.5%，表明這6種酶與國際公認質控品有較好的相關性，另外通過近幾年參加省級室間質量控制考評均取得了優異的成績。

目前，大多數臨床實驗室在測定血清酶活性時不用校準品，而是根據儀器系統特性，用理論給定的K 因子值計算酶的活性。而有的酶（如腺苷脫氨酶、肌酸激酶同工酶等）沒有酶校準品，有的酶甚至連質控品都沒有。這樣可能與真實值有4.5%～67.6%的誤差。雖然IFCC 推出了血清酶活性的方法，可因每天儀器比色杯吸光度的變化、酶試劑穩定性的原因及其吸光度發生變化，測定結果的相對偏倚、離散程度也較大，需要進行校正后消除干擾因素，測定結果才能接近真實值。為此，ISO 于1999年起草了5個相關標準，ISO／DIS 18153“酶催化濃度校準物質和質控物質定值的計量學溯源性”為其中標準之一。因此，首先建議用酶校準品進行定標，以消除測量值與真實值之間的偏差。但由于酶為生物催化劑，穩定性差，而其標準物質的研制工作極為困難，進展緩慢［8－9］。近幾年IFCC組織多家國際實驗室合作。對過去的IFCC 酶催化濃度測量過程進行了修改和優化，包括ALT、AST、AMY、CK 等，并對原參考物質重新定值。因而具有溯源性的酶校準品價格也較昂貴，經常使用會大大增加檢驗成本。盡管國際著名生產質控品的伯樂公司曾直截了當地宣布：“伯樂公司所有的控制品定值均不具有計量上的可追溯性，這完全符合ISO17511的要求”［10］。但作為國內廣大的實驗室還大多數以此為標準，否則更加缺乏可比性。本組選擇了國內較常用的全自動生化分析儀、原裝配套試劑、定值質控血清和原裝復合酶校準品，同時發現伯樂定值質控血清有許多優點：它是用與校準物相同的介質制備的，具有較好的穩定性和重復性，其作用主要是控制儀器的穩定性，以保證儀器、試劑、工作環境具有高度的穩定性；在缺乏酶校準品的情況下可以替代酶校準品。而校準物是根據權威或官方所制定的參考物為標準、具有較好準確性的標示物，用以校正儀器或方法準確性，使測定結果盡可能接近真實值，通過參加室間質量評價也獲得了滿意的結果。同時，相關部門應該明文禁止使用理論K 因子的方法進行血清酶檢測，只有這樣才能為臨床提供可靠的結果。

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