他克莫司對(duì)特應(yīng)性皮炎兒童T 淋巴細(xì)胞和炎性細(xì)胞因子的影響

洪世仁（葛洲壩中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北宜昌 443002）

特應(yīng)性皮炎是一種慢性免疫性疾病，主要與變應(yīng)原導(dǎo)致免疫紊亂緊密相關(guān)，包括T 淋巴細(xì)胞及炎性細(xì)胞因子等參與疾病的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸［1－2］。他克莫司為鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，可抑制T 淋巴細(xì)胞的活化，廣泛應(yīng)用于特應(yīng)性皮炎的治療［3－4］。目前對(duì)他克莫司治療特應(yīng)性皮炎的作用機(jī)制尚未完全明確，推測(cè)其可能通過(guò)抑制機(jī)體免疫功能發(fā)揮治療作用。本研究比較他克莫司治療特應(yīng)性皮炎兒童與健康兒童T 淋巴細(xì)胞和炎性細(xì)胞因子的差異，研究他克莫司治療特應(yīng)性皮炎的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2010年1月至2012年12月本科診治的特應(yīng)性皮炎患兒50例為研究對(duì)象（ATD組），其中男30例，女20例；年齡（5.8±2.5）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）（21.6±2.3）kg／m2。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均臨床表現(xiàn)、癥狀體征和體檢確診為特應(yīng)性皮炎，符合Williams的特應(yīng)性皮炎診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；（2）初次診治患者，既往未行特應(yīng)性皮炎相關(guān)治療；（3）治療前血常規(guī)、尿常規(guī)和肝腎功能電解質(zhì)在正常范圍值內(nèi)；（4）排除合并其他免疫性疾病，3個(gè)月內(nèi)接受抗菌藥物、抗真菌藥物和免疫抑制劑及糖皮質(zhì)激素治療。另以門(mén)診健康體檢的兒童50例為對(duì)照（CON組），其中男29例，女21例，年齡（5.9±2.7）歲，BMI（21.5±2.4）kg／m2。兩組研究對(duì)象在性別、年齡和BMI方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治療方法 ATD組患兒在避免接觸外來(lái)刺激、避免接觸變應(yīng)原等常規(guī)治療上給予0.03%他克莫司軟膏治療，用量用法為外用2次／日，每次間隔12h，療程3周；患兒治愈后外用2次／周，維持治療2個(gè)月。

1.3 觀察指標(biāo)兩組研究對(duì)象治療前、治療后3、6、12個(gè)月均檢測(cè)如下指標(biāo)：（1）淋巴細(xì)胞（Lym）和T 淋巴細(xì)胞亞群，包括CD3＋、CD4＋和CD8＋T 淋巴細(xì)胞，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)；（2）炎性細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素（IL）－4、IL－10、IL－12、IL－31、γ干擾素（IFN－γ）和腫瘤壞死因子α（TNF－α）。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 T 兩組研究對(duì)象治療前后T 淋巴細(xì)胞對(duì)比 CON組兒童治療前、治療后3、6、12個(gè)月的Lym、CD3＋、CD4＋和CD8＋均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；ATD組患兒治療后3、6、12個(gè)月的Lym、CD3＋、CD4＋和CD8＋均明顯低于治療前（P＜0.05），治療后3、6、12個(gè)月的Lym、CD3＋、CD4＋和CD8＋差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；ATD 患兒治療前的Lym、CD3＋、CD4＋和CD8＋均明顯高于CON組（P＜0.05），而治療后3、6、12個(gè)月差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)表1。低，IL－10和IL－12依次升高。ATD組患者治療前、治療后3、6、12個(gè)月的IL－4、IL－31、INF－γ和TNF－α均明顯高于CON組（均P＜0.05），而IL－10和IL－12均明顯低于CON組（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表1 兩組研究對(duì)象治療前后T 淋巴細(xì)胞對(duì)比（，n＝50）

表1 兩組研究對(duì)象治療前后T 淋巴細(xì)胞對(duì)比（，n＝50）

續(xù)表1 兩組研究對(duì)象治療前后T 淋巴細(xì)胞對(duì)比（，n＝50）

續(xù)表1 兩組研究對(duì)象治療前后T 淋巴細(xì)胞對(duì)比（，n＝50）

注：與ATD組比較，＊P＜0.05。

表2 兩組研究對(duì)象治療前后炎性細(xì)胞因子對(duì)比（，n＝50）

表2 兩組研究對(duì)象治療前后炎性細(xì)胞因子對(duì)比（，n＝50）

注：與ATD組比較，＊P＜0.05。

3 討論

特應(yīng)性皮炎的發(fā)病與機(jī)體免疫功能紊亂密切相關(guān)，環(huán)境因素或自身遺傳背景導(dǎo)致患兒皮膚屏障功能異常或變應(yīng)原引起機(jī)體免疫功能紊亂，產(chǎn)生特異性和非特異性免疫炎性反應(yīng)損傷［6］。目前發(fā)現(xiàn)與特應(yīng)性皮炎相關(guān)的免疫細(xì)胞包括樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）、T 淋巴細(xì)胞和肥大細(xì)胞，其中相關(guān)的T 淋巴細(xì)胞包括輔助性T 細(xì)胞（Th）1、Th2和調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞，已證實(shí)Th1／Th2細(xì)胞功能失衡是特應(yīng)性皮炎的始動(dòng)因素，而調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)并維持機(jī)體免疫耐受，變應(yīng)原導(dǎo)致機(jī)體免疫耐受破壞而誘發(fā)自身免疫性疾病和變態(tài)反應(yīng)性疾病［7－8］。研究發(fā)現(xiàn)，特應(yīng)性皮炎患者外周血中T 淋巴細(xì)胞亞群高于健康人。本研究中，特應(yīng)性皮炎患者兒外周血Lym 和T 淋巴細(xì)胞亞群（CD3＋、CD4＋和CD8＋）均明顯高于健康兒童，證實(shí)T 淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)在特應(yīng)性皮炎發(fā)病機(jī)制中的作用。

參與特應(yīng)性皮炎發(fā)病中除了細(xì)胞免疫外，炎癥免疫因子如IL－4、IL－10、IL－12、IL－31、INF－γ和TNF－α等已證實(shí)在特應(yīng)性皮炎發(fā)病、進(jìn)展和轉(zhuǎn)歸中扮演重要角色。IL－4為T(mén)h2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，具有刺激T 細(xì)胞增殖和促進(jìn)CD4＋T 細(xì)胞分化成Th細(xì)胞功能，研究發(fā)現(xiàn)其在特應(yīng)性皮炎小鼠模型中病變組織IL－4明顯高于正常組織［9］，而上調(diào)IL－4的表達(dá)可增強(qiáng)T 細(xì)胞產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子而加重特應(yīng)性皮炎皮損［10］；IL－10是Th2細(xì)胞因子，可抑制炎癥因子產(chǎn)生，其水平降低時(shí)導(dǎo)致抑制炎癥作用下降，在特應(yīng)性皮炎患者皮損中明顯降低［11］；IL－12主要由Th1細(xì)胞分泌，可促進(jìn)T 細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK）增殖，研究發(fā)現(xiàn)特應(yīng)性皮炎患兒血清IL－12水平明顯降低［12］；IL－31由活化的T 細(xì)胞分泌，特應(yīng)性皮炎小鼠模型中搔抓行為與IL－31基因mRNA 表達(dá)正相關(guān)，可能是一種引起瘙癢的介質(zhì)［13］；INF－γ可促進(jìn)T 細(xì)胞和NK 細(xì)胞增殖活化，其水平與特應(yīng)性皮炎病情密切相關(guān)；TNF－α可刺激免疫細(xì)胞分泌IL，促進(jìn)局部炎性反應(yīng)，降低TNF－α可減輕特應(yīng)性皮炎小鼠的搔抓行為［14］。本研究中，ATD組患兒治療前的IL－4、IL－31、INF－γ和TNF－α均明顯高于CON組（P＜0.05），而IL－10和IL－12均明顯高于CON組（P＜0.05），證實(shí)炎性細(xì)胞因子的失衡是特應(yīng)性皮炎發(fā)病的重要機(jī)制。

他克莫司為鈣調(diào)磷酸酶抑制劑，廣泛應(yīng)用于特應(yīng)性皮炎的治療，但目前對(duì)其治療特應(yīng)性皮炎的作用機(jī)制尚未完全明確，基于他克莫司抑制T 淋巴細(xì)胞這一事實(shí)推測(cè)其可能通過(guò)抑制機(jī)體免疫功能發(fā)揮治療作用。本研究中，采用他克莫司治療特應(yīng)性皮炎兒童后，Lym、CD3＋、CD4＋、CD8＋、IL－4、IL－31、INFγ和TNF－α均明顯降低，IL－10和IL－12明顯升高，表明他克莫司具有降低特應(yīng)性皮炎兒童T 淋巴細(xì)胞、IL－4、IL－31、INF－γ和TNF－α作用，其中治療3個(gè)月后IL－4、IL－10、IL－12、IL－31、INF－γ和TNF－α降低最明顯，表明他克莫司治療特應(yīng)性皮炎具有起效快的優(yōu)點(diǎn)；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，治療后6、12個(gè)月的Lym、CD3＋、CD4＋、CD8＋、IL－4、IL－10、IL－12、IL－31、INF－γ和TNF－α的差異不大，但仍高于健康兒童，表明他克莫司治療特應(yīng)性皮炎有效期短，該結(jié)果與臨床上特應(yīng)性皮炎治療后易反復(fù)現(xiàn)象一致。綜合以上研究結(jié)果，作者推測(cè)他克莫司通過(guò)改善T淋巴細(xì)胞和炎性細(xì)胞因子發(fā)揮對(duì)特應(yīng)性皮炎的治療作用。

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