全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)在血流感染診斷中的價值及影響因素＊

馬楠，李國智，馬俊（四川省江油市九〇三醫(yī)院：.檢驗科；.重癥醫(yī)學科；.婦產(chǎn)科 6700）

血流感染為最嚴重的臨床感染之一，致病的微生物包括病毒、細菌及寄生蟲等，病死率較高［1］。據(jù)報道，全球每年約發(fā)生2×106例血流感染，病死率為20%～50%［2］。第6代全自動血培養(yǎng)BacT／Alert3D240系統(tǒng)的引進和推廣使用，為敗血癥及嚴重感染的診斷和治療提供了十分有利的條件。為了進一步了解抗菌藥物治療濃度、送檢時間、溫度、不同細菌濃度、采血量及采集套數(shù)對血培養(yǎng)結果的影響，現(xiàn)選擇該院2009年1月至2013年3月374例住院患者，回顧分析了BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)的檢測結果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2009年1月至2013年3月該院門、急診及住院發(fā)熱或全身性感染患者374例。血培養(yǎng)系統(tǒng)采用BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)（法國梅里埃公司）。血培養(yǎng)瓶使用BacT／Alert的專用配套血培養(yǎng)瓶，包括成人需氧血培養(yǎng)瓶、成人厭氧血培養(yǎng)瓶、兒童專用瓶、樹脂瓶（法國梅里埃公司）。

1.2 方法

1.2.1 采取患者血液標本按BacT／Alert操作規(guī)程加入相應的血培養(yǎng)瓶。

1.2.2 陽性培養(yǎng)瓶的處理陽性標本采用常規(guī)步驟斜瓶，及時轉種血瓊脂平板、巧克力瓊脂和中國藍平皿，置35℃培養(yǎng)18～24h。每一陽性培養(yǎng)瓶必須做涂片行革蘭染色并做直接藥敏試驗，以確定細菌類型，將初步結果通知臨床作為血培養(yǎng)的一級報告，為臨床醫(yī)師初步診斷提供依據(jù)，同時將分離出的菌落做藥敏試驗和生化鑒定，經(jīng)17～22h培養(yǎng)后，作為最終血液培養(yǎng)報告。

1.2.3 陰性培養(yǎng)瓶的處理培養(yǎng)監(jiān)測7d系統(tǒng)報告的陰性瓶，可發(fā)出無菌生長報告。同時用無菌注射器或系統(tǒng)附帶采樣針取材轉種血瓊脂和巧克力平皿，35℃培養(yǎng)18～24h后，仍無細菌生長，則確定為陰性。

1.2.4 假陽性和假陰性的判斷如果系統(tǒng)報警提示有菌落生長，但分離不到細菌且革蘭染色涂片未檢測到微生物即為假陽性；5d未顯示報警而轉種涂片后發(fā)現(xiàn)細菌即為假陰性。

1.2.5 細菌鑒定按Microscan儀操作程序進行，個別細菌輔以常規(guī)方法。

1.2.6 細菌濃度對檢出時間的影響分別用ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌，分別制成1×102、1×104、1×106cfu／mL 菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1mL菌液，置于血培養(yǎng)瓶內，立即放入BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.7 不同溫度放置對檢測結果的影響將ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌制成1×102cfu／mL 的菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1 mL菌液置于血培養(yǎng)瓶內，放置4、10、25℃12h后移入BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.8 不同時間放置后對檢測結果的影響將ATCC25922大腸埃希菌、ATCC49619肺炎鏈球菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌、ATCC12228表皮葡萄球菌、ATCC27853銅綠假單胞菌制成1×102cfu／mL的菌液，按血培養(yǎng)操作規(guī)程分別注入1 mL菌液置于血培養(yǎng)瓶內，放置2、4、8、12、24h后移入BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)35℃孵育。

1.2.9 抗菌藥物對培養(yǎng)結果的影響培養(yǎng)瓶接種完菌液后加入抗菌藥物，同時將菌液加入不含抗菌藥物的培養(yǎng)瓶作為對照。

1.2.10 采樣量及采樣套數(shù)對檢測結果的影響對成人采集2～5mL、5～10mL血液，對兒童采集1～2mL、2～5mL，分別采用1、2、3套，比較其對檢測結果的影響。

1.3 統(tǒng)計學處理應用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學處理。組間比較采用配對t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 菌株的種類與檢出時間的關系374份血標本中共檢出63株病原菌，陽性率為16.8%，其中65.1%的細菌在24h內檢出，28.5%的細菌在24～48h內檢出，6.3%的細菌在48h后檢出。見表1。

2.2 假陽性與假陰性的檢出率在374份標本中假陽性4株，假陽性率為1.1%；假陰性為1株，假陰性率為0.2%。

2.3 不同細菌濃度的檢出時間不同細菌濃度與檢測時間的關系，見表2。

2.4 不同溫度對檢測結果影響血培養(yǎng)瓶放置4、10、25℃3種溫度與檢測時間的關系，見表3。

2.5 送檢時間對檢測結果的影響放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時間之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），放置2h的血培養(yǎng)檢測結果與放置12、24h比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表4。

2.6 抗菌藥物對檢測結果的影響選擇常用的幾種抗菌藥物分別加入接種菌液的培養(yǎng)瓶中，同時將菌液加入不含抗菌藥物的培養(yǎng)瓶作為對照。見表5。

2.7 采樣量及采樣套數(shù)對檢測結果的影響成人采血量為2～5mL時檢出率為55.13%，5～10mL 檢出率為90.21%；兒童采血量為1～2mL時檢出率為46.75%，2～5mL 時檢出率為87.68%；采集數(shù)為3套時檢出率最高（96.87%）。見表6。

表1 菌株的種類與檢出時間的關系（n）

表2 3種不同細菌濃度與檢出時間的關系（%）

表3 放置3種不同溫度細菌與檢出時間的關系（%）

表4 送檢時間對檢測結果的影響（%）

表5 抗菌藥物對檢測結果的影響（%）

續(xù)表5 抗菌藥物對檢測結果的影響（%）

表6 采樣量及采樣套數(shù)對檢測結果的影響（%）

3 討論

BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)儀是第6代全新的血培養(yǎng)系統(tǒng)，通過自動連續(xù)不斷地監(jiān)測細菌在生長過程中消耗氧，產(chǎn)生氫氣、二氧化碳和氮氣，通過pH 及顏色變化及培養(yǎng)瓶內壓力改變，可報警提示培養(yǎng)液中細菌數(shù)量。有研究顯示，BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)儀具有操作簡便、靈敏度高、準確性好、特異性強、誤診率及污染率低的特點［3－4］。本組374份標本中假陽性4株，假陽性率為1.1%，假陰性1株，假陰性率為0.2%。據(jù)有關報道，血標本體積超過12 mL，有可能導致假陽性，同時，細菌自溶、溫度不穩(wěn)定或其他原因也可能導致假陽性的出現(xiàn)［5－6］。1例假陰性標本，盲轉培養(yǎng)為表皮葡萄球菌，患者此前血培養(yǎng)結果也為表皮葡萄球菌，推測該次假陰性結果可能與患者接受抗菌藥物治療，外周血細菌濃度太低導致血培養(yǎng)儀無法檢出有關。假陰性比假陽性對患者的危害更大，因為其會忽略病情，錯過關鍵治療時間，造成嚴重后果，因此，血液培養(yǎng)檢測質量顯得至關重要［7］。

3.1 檢出時間與細菌種類和濃度的關系本研究檢出的細菌種類多，分布范圍廣。其中大腸埃希菌最多，占分離病原菌總數(shù)的14.3%，其次依次為金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、銅綠假單胞菌及醋酸鈣不動桿菌，前6位分離出的菌株數(shù)占總數(shù)的61.9%，與張冀霞等［8］報道的相符合。本研究表明，細菌濃度與檢出時間有相關性，即細菌濃度越高，檢出時間越短。

3.2 放置溫度和時間對培養(yǎng)結果的影響將含有細菌的培養(yǎng)瓶放置不同溫度對檢出時間影響不大；送檢時間的延遲不影響病原菌檢測，但檢出的時間有所減少。放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時間之間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），放置2、4、8h的血培養(yǎng)檢出時間與放置12、24h比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

3.3 抗菌藥物對檢出結果的影響部分患者在接受抗菌藥物治療后采集血培養(yǎng)標本，病原菌的生長會受到血液中藥物濃度的抑制，對陽性檢出率無影響，僅檢出時間稍為延長。雖然添加了一些吸附抗菌藥物的物質，如活性炭或樹脂在商品培養(yǎng)基中，但這類物質不是對所有抗菌藥物都能起到作用。在當前抗菌藥物濫用的情況下，各廠家應該考慮進一步改進培養(yǎng)瓶在成分和離子強度上具有對抗菌藥物濃度一定的稀釋作用，但抗菌藥物的長期使用可能會影響檢測速度甚至造成假陰性［9－10］。

3.4 采血量及采集套數(shù)對檢出結果的影響血液采樣量不足時會導致檢測敏感度下降，成人采血量為5～10mL 時檢出率為90.21%，兒童采血量為2～5mL時檢出率為87.68%；采集數(shù)為3套時檢出率最高（96.87%）。成人推薦的采血量為5～10mL，兒童為2～5mL；每次應采集2～3套標本。

綜上所述，細菌濃度及種類、抗菌藥物、溫度及送檢時間、采血量及采集套數(shù)均會使BacT／Alert3D240全自動血液培養(yǎng)儀對病原菌的檢出時間產(chǎn)生影響，不能有效地反映患者準確的檢測指標。

［1］徐小仁，朱紅軍，林祥偉，等.血液培養(yǎng)的病原菌分布及耐藥性分析［J］.臨床和實驗醫(yī)學雜志，2012，11（16）：1269－1270.

［2］黃春紅，王云英.BacT／Alert3D型全自動血培養(yǎng)儀性能評價［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2012，33（19）：2421－2422.

［3］陳昕，趙雷，楊亞麗，等.BacT／Alert檢測系統(tǒng)在快速檢測結核分枝桿菌中的應用［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2013，17（6）：1062－1063.

［4］王穎，史利寧，范明，等.Bactec FX 和Bact／Alert 3D 兩種血培養(yǎng)系統(tǒng)對菌血癥的檢出性能分析［J］.臨床檢驗雜志，2012，30（1）：13－15.

［5］李治國，張浩，麗榮.468例患者血培養(yǎng)陽性報警時間與臨床指標的相關性［J］.微生物學雜志，2012，32（3）：101－104.

［6］劉海波，朱光發(fā)，王愛萍，等.醫(yī)院獲得性血流感染的臨床與病原學分析［J］.中國感染與化療雜志，2013，13（3）：176－180.

［7］鄒自英，朱冰，袁成良，等.血液培養(yǎng)陽性儀器報警時間及三級報告一致性分析［J］.西南國防醫(yī)藥，2013，3（23）：305－306.

［8］張冀霞，陳宏斌，王輝，等.2007年和2009年醫(yī)院內獲得性血流感染病原菌分布及其耐藥性分析［J］.中華臨床醫(yī)師雜志，2012，6（19）：5935－5940.

［9］鮑群麗，鄒義春，羅卓越，等.全自動血培養(yǎng)儀分離菌株的分布及其耐藥性［J］.中國醫(yī)藥指南，2010，5（11）：829－830.

［10］湯瑾，王建鏹，陳瑜，等.BD BACTEC 9240全自動血液培養(yǎng)系統(tǒng)在檢測血流感染病原菌的影響因素評價［J］.石河子醫(yī)學院學報，2013，7（28）：606－608.