血培養分離出龜分枝桿菌的分析

柳青，邱廣斌，翟如波△（中國人民解放軍第二○二醫院檢驗科，沈陽 0003）

龜分枝桿菌是一種常見的環境腐生物寄生菌，廣泛分布于自然界，是分枝桿菌醫源性感染最常見的菌種之一，可引起膿腫、肺部以及傷口感染，主要通過污染的水或手術器械傳播［1］。近年來，由非典型分枝桿菌引起的感染日益增多，國內由于對此病的認識不夠，檢查和鑒定方法都較局限，依靠常規治療結核病的藥物效果一般都不好，使得治療比較困難［2］。因此，及時、正確的鑒定該菌對臨床治療、控制醫院內的感染流行具有重要意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料患者，男，61歲，2013年5月因無明顯誘因周身紅斑、浮腫加重，伴發熱，體溫最高37.8℃，自行靜脈應用頭孢哌酮、地塞米松（劑量不詳）7d，但發熱癥狀無緩解，繼而出現四肢皮膚紅腫加重，恥骨聯合處、左小腿出現水皰，水皰破潰后形成潰瘍，來該院就診。入院時一般狀態差，雙肺聽診呼吸音弱，右下肺可聞及散在帛裂音，全身皮膚多處硬結、紅腫及潰瘍，其中硬結以上腹部較明顯，約6cm×6cm，紅腫處皮溫高，無破潰，無壓痛，以雙前臂、雙腋和兩側腹部較嚴重，潰瘍以恥骨聯合處和左側小腿內側處較重（左小腿內側可見一大小約16cm×9cm 創面，表面結少量灰黑色痂皮，有少量滲出，周圍皮膚略有紅腫，恥骨聯合處可見一大小約12cm×7cm 創面，下連至會陰部，部分皮膚軟組織缺失，滲出較多，周圍皮膚無明顯紅腫，骶尾部可見1cm×1cm 潰瘍）。左側腋下、左側腹部靠近髂部紅腫處可見內有膿樣液化，觸之內有波動感。胸部CT 顯示：雙肺紋理增粗、紊亂，呈網狀及毛玻璃狀改變。B 超檢查提示：有局限性膿腫。病理檢查提示：有結核樣肉芽腫。微生物學檢查：多次送檢血培養呈陽性，涂片進行革蘭染色為革蘭陽性桿菌，抗酸染色為陽性。

1.2 儀器與試劑血瓊脂、麥康凱、營養瓊脂、M－H 瓊脂、噻吩－2－羧酸肼（TCH）培養基、對硝基苯甲酸（PNB）培養基、7H12B培養基、5μg／mLα－硝基－α－乙酰氨基－β－羥基苯丙酮（NAP）、硝酸鹽等微量生化管。

1.3 方法血液經增菌培養后接種于血瓊脂、麥康凱、營養瓊脂，菌落偶有粗糙型，營養要求不高，普通血瓊脂、麥康凱培養基均可生長。在普通血瓊脂培養基上35℃培養2～5d可見明顯菌落。菌落為無色、圓形、光滑、濕潤、凸起。菌落涂片革蘭染色為陽性，抗酸染色陽性。再傳代培養于噻吩－2－羧酸肼（TCH）培養基和對硝基苯甲酸（PNB）培養基上生長良好；傳代于7H12B培養基內，24h可見絮狀生長；傳代于變色液體培養基內，24h培養基即可變紫色或紅色，且有紫色菌體沉淀；能耐受5μg／mLα－硝基－α－乙酰氨基－β－羥基苯丙酮（NAP），由此可確定為快速生長分枝桿菌（RGM）。確定后進行芳香硫酸酯酶（3、14d）試驗、硝酸鹽還原試驗、鐵吸收試驗、麥康凱瓊脂生長試驗和30℃、37℃、45℃試驗。除了龜分枝桿菌（類龜分枝桿菌除外）外，其他快速生長分枝桿菌硝酸鹽還原試驗和鐵吸收試驗均為陰性［3］；除了恥垢分枝桿菌和偶發分枝桿菌Ⅰ型外，其他快速生長分枝桿菌45℃均不能生長；除了恥垢分枝桿菌芳香硫酸酯酶（3d）陰性外，其他快速生長分枝桿菌均為陽性；除了部分龜分枝桿菌龜亞種外，其他均能在麥康凱瓊脂培養基上生長，由此鑒定為龜分枝桿菌。

2 結果

2.1 涂片結果血培養提示陽性，將集菌處理后的培養物涂片，進行革蘭染色，鏡下可見革蘭陽性桿菌。同時進行抗酸染色，鏡下可見抗酸陽性桿菌，見圖1、2。

圖1 血標本革蘭染色涂片

圖2 血標本抗酸染色涂片

2.2 培養結果用無菌注射器從陽性血培養瓶中，抽取適量血液，接種于血平皿、麥康凱培養基中，置于35℃溫箱內，培養3～5d。血平皿上菌落為無色、圓形、光滑、濕潤、凸起。見圖3。

2.3 藥敏結果選用紙片瓊脂擴散法。培養板在35℃中孵育3～5d，由于藥物不穩定性，孵育時間不能超過5d，結果顯示，阿米卡星抑菌環為30mm，環丙沙星抑菌環為20mm，四環素抑菌環為30mm，慶大霉素抑菌環為20mm，第3代頭孢抑菌環為6mm，克拉霉素抑菌環為15 mm，利福平抑菌環為18mm。推測阿米卡星、慶大霉素、克拉霉素、四環素敏感，環丙沙星、利福平中敏，頭孢菌素耐藥。從而判定此菌是一種對多種抗菌藥物耐藥的細菌，藥物敏感性差異較大。

圖3 血平皿上菌落形態

3 討論

龜分枝桿菌為非結核分枝桿菌（NTM）Runyon 分類法的第Ⅳ群——快速生長菌（又名快速生長分枝桿菌）。該細菌廣泛存在于土壤和灰塵中，為環境中最常見的分枝桿菌。菌體為微彎曲或直的桿菌，不同條件下，菌體呈多形態性，革蘭染色不明顯，多數情況下為陽性；無莢膜鞭毛不能運動，幼齡菌具有較強的抗酸性，隨著菌齡延長抗酸性減弱；最適生長溫度為25～37℃，能引起局部及全身感染。本菌營養要求不高，在血平皿、麥康凱、營養瓊脂上，35℃均可生長。此菌對一線抗結核藥物的耐藥性較高，所以臨床上大都采用聯合用藥。本例患者采取阿米卡星、克拉霉素、頭孢西丁、利福平聯合用藥，并對膿腫部位進行清創治療。治療一段時間后胸部CT 顯示雙肺紋理較以前清晰，B超檢查提示局限性膿腫縮小，微生物學檢查表明多次送檢血培養呈陰性。

隨著流行病學調查，快速生長分枝桿菌的分離率、臨床感染率和發病率總體上呈逐漸增多的趨勢，占分枝桿菌菌株總數的20%左右，與醫院感染密切相關［4－6］。此類細菌以龜分枝桿菌、膿腫分枝桿菌、偶發分枝桿菌為代表。本例患者確診感染龜分枝桿菌，此菌對人類的致病性不高，經常是在機體免疫功能低下，或作為繼發性、伴隨性疾病發生。感染具有條件性是此菌致病性的一個顯著特點，往往在慢性阻塞性肺病、免疫缺陷或免疫抑制劑、長期激素使用者、臟器移植、腫瘤、老年人中高發。本例患者就是因患有免疫系統疾病，長期使用免疫抑制劑，導致免疫缺陷，進而繼發龜分枝桿菌感染，導致敗血癥。

綜上所述，快速生長分枝桿菌感染及發病，由于耐藥率高以及廣泛，導致臨床可供選擇的藥物較少，因而給治療帶來很大的困難［7－10］。所以加強實驗檢測，及時、準確鑒定該病原菌，給臨床用藥提供理論支持，臨床根據藥敏試驗結果，組合有效的治療方案，才能更好地控制該疾病。

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