某地區淋球菌對抗菌藥物敏感性及質粒耐藥流行狀況研究＊

劉小鳳，沈守星，魏秋姣，徐剛，周儉中，吳興中（.廣東省珠海市慢性病防治中心 59000；.廣東省皮膚性病防治中心，廣東廣州 50500）

淋病是性傳播疾病之一，也是一種公共衛生疾病，能夠促進艾滋病的感染和傳播，多年來由于抗菌藥物的濫用和不規范使用，使淋球菌對外環境產生了適應性變異，致使其對多種抗菌藥物的敏感性不斷下降。為了解珠海地區淋球菌流行株對抗菌藥物的敏感性及產β－內酰胺酶的淋球菌（PPNG）和質粒介導的四環素高度耐藥淋球菌（TRNG）的流行狀況，現對2011～2013年度珠海地區臨床分離的192株淋球菌流行株檢測其對6種抗菌藥物的最小抑菌濃度（MIC）、PPNG 和TRNG，報道如下。

1 資料現方法

1.1 一般資料來自2011年1月至2013年6月珠海市22家性病監測點實驗室從STD 門診患者和高危人群體檢者的泌尿生殖道分泌物中，分離得到的192株淋球菌株。所有菌株經革蘭染色、氧化酶試驗和糖發酵試驗證實后，在選擇性培養基（TM）上傳代1次，經18h培養后，將純菌株洗脫于小牛血清中，保存于－70℃低溫冰箱凍存備用。

1.2 藥物與菌株6種抗菌藥物（青霉素、四環素、環丙沙星、壯觀霉素、頭孢曲松和頭孢克肟）由廣東省皮膚性病防治中心提供。GC基礎培養基（Oxoid公司生產）加入10%脫纖維新鮮羊血。6株淋球菌標準菌株D、G、J、L 由廣東省皮膚性病防治中心提供，其中D、G、L 株為產β－內酰胺酶陰性菌株，J株為PPNG 菌株。

1.3 方法

1.3.1 最小抑菌濃度（MIC）測定采用世界衛生組織（WHO）西太區淋球菌耐藥監測規劃推薦的瓊脂稀釋法測定MIC［1］。先將各抗菌藥物用適當的緩沖液按要求配制成原液，再倍比稀釋成多個濃度，各抗菌藥物在培養皿上的最終濃度，青霉素、四環素、環丙沙星和壯觀霉素均為0.03～32μg／mL，頭孢克肟、頭孢曲松0.002～1μg／mL。試驗菌株和標準菌株首先在無選擇性培養基（GC）上傳代兩次，選用16～18h的新鮮培養物制成107～108cfu／mL菌懸液，用多頭接種器蘸取菌液接種于含各種不同濃度抗菌藥物的瓊脂平板上，置35℃、5%CO2環境下培養，24h后觀察結果，記錄無菌落生長的最低藥物濃度為該藥的MIC。每批試驗均由標準菌株質控，按WHO 西太平洋地區淋球菌耐藥監測項目推薦的標準判斷藥物敏感性［1］。頭孢克肟敏感性試驗和判斷標準按美國臨床和實驗室標準化研究所（CLSI）標準判斷［2］。并統計出MIC50及MIC90。

1.3.2 產β－內酰胺酶淋球菌（PPNG）的檢驗采用紙片酸度法［3］，即先將濾紙吸足青霉素溶液（以溴甲酚紫為指示劑），取待檢菌涂于濾紙上，置37℃溫育30min，濾紙上菌落顏色由紫色變為黃色為β－內酰胺酶陽性，顏色無變化為陰性。每批試驗以標準菌株J株作陽性對照，標準菌株L株作陰性對照。

1.3.3 質粒介導的四環素高度耐藥淋球菌（TRNG）的檢驗采用監測規劃要求的瓊脂稀釋法，當四環素MIC≥16μg／mL時判為TRNG 株［3］。

2 結果

2.1 質粒介導的淋球菌耐藥性192株淋球菌中共檢出PPNG 66株（34.4%），檢出TRNG 94株（49.0%）。

2.2 MIC測定結果2011～2013年度監測的淋球菌對青霉素耐藥率為68.8%（132／192），環丙沙星耐藥率為100.0%（192／192），四環素耐藥率為99.0%（190／192），其中同時對青霉素、四環素和環丙沙星三重耐藥的有130株（67.7%）；青霉素、四環素和環丙沙星的MIC50和MIC90均已超過耐藥標準。壯觀霉素、頭孢曲松和頭孢克肟耐藥株，敏感性分別為100.0%、66.7%和95.8%，頭孢曲松中敏率為33.3%（64／192），頭孢克肟中敏率為4.2%（8／192）。見表1、2。

表1 192株淋球菌對6種抗菌藥物MIC的結果比較（n）

表2 192株淋球菌對6種抗菌藥物的敏感性［n（%）］

3 討論

淋球菌對抗菌藥物耐藥性的問題早已引起全球關注，1987年WHO 在全球范圍內開展淋球菌耐藥性監測，建議對青霉素、四環素、環丙沙星、頭孢曲松和壯觀霉素5種核心組抗菌藥物進行監測，以動態了解和掌握各國、各地流行的淋球菌株對抗菌藥物的敏感性。從國內外學者的研究報道中顯示，淋球菌的耐藥性及質粒介導耐藥菌株的流行狀況隨時間和地區的不同而存在差異［4－8］。本研究通過對6種抗菌藥物MIC 測定，結果顯示珠海地區淋球菌對青霉素、四環素和環丙沙星的耐藥率均很高，分別為68.8%、99.0%和100.0%，與2010年該地區的監測結果基本相近［4］。青霉素的耐藥率低于廣州、佛山、江門和肇慶4個城市的84.8%、深圳的85.7%和汕頭的84.8%，也低于上海的98.11%，可能與該地區較少使用青霉素有關［5－8］。四環素及環丙沙星該地區耐藥率為99.0%和100.0%，均高于國內其他地區的報道［5－8］。提示青霉素、四環素、環丙沙星對該地區流行的淋球菌株的敏感性差，不應作為治療淋病的首選藥物。

質粒介導的淋球菌PPNG 和TRNG 的檢出率為34.4%和49.0%，與2010年該地區的監測結果31.4%和48.6%基本相近，說明該地區PPNG 和TRNG 仍處于高流行率［4］。雖然青霉素和四環素很少作為治療淋病的首選藥物，但PPNG 和TRNG 流行率仍是淋球菌耐藥性流行病學監測的重要指標之一，PPNG 和TRNG 是由質粒介導的耐藥性，耐藥質粒可以在同種菌屬間傳遞造成耐藥質粒的廣泛傳播和高水平的耐藥性，通過對質粒介導的淋球菌耐藥株的監測，可以評估淋球菌耐藥發展趨勢，了解流行病學狀況。

頭孢菌素作為淋病治療的首選藥物，多年來一直為臨床醫師所關注，但近年來其敏感性受到挑戰，低敏株不斷上升，本組監測的192株臨床菌株，中敏率為33.3%（64／192），與吳興中等［5］報道的廣東省4個城市的34.0%中敏率基本一致，也與2010年該地區的監測結果37.10%基本相近，低于2008年中國淋球菌監測網監測頭孢曲松低敏率的47.42%［4－5，9］。雖然該地區尚未出現耐藥菌株，但2009年在日本東京已分離到頭孢曲松耐藥株，香港也有口服頭孢布烯治療淋病失敗的報道［10－11］。珠海是珠三角中心城市和旅游城市，比鄰港澳，接壤中山、江門，各地經濟及商務活動聯系密切，人口流動性大，容易造成各地耐藥菌株的攜入性傳播，因此，應引起臨床和有關部門的高度重視，治療時應注意劑量和療效的觀察，防止頭孢曲松耐藥菌株在該地區的出現。頭孢克肟為第3代口服頭孢菌素類的抗菌藥物，在珠海地區用于治療淋病的仍較少，從監測結果顯示，其敏感率為95.8%，低敏率為4.2%，提示頭孢克肟對該地區淋球菌流行株有較好的敏感性，也可以作為淋球菌治療的首選藥物。

壯觀霉素的抗菌活性仍較強，MIC50和MIC90均為16μg／mL，仍處在敏感范圍，該地區流行的淋球菌株對壯觀霉素的敏感性為100%，與各地報道的一致，提示該種藥物仍是該地區治療淋病的有效藥物［4－9］。但蘇曉紅等［12］報道壯觀霉素治療淋球菌失敗的3例中，有2例為壯觀霉素耐藥株，因此臨床在選用壯觀霉素治療淋病時，應足量規范用藥。

本研究分析了珠海地區淋球菌對6種抗菌藥物的敏感性和PPNG、TRNG 的流行狀況，提示頭孢曲松、頭孢克肟和壯觀霉素可作為該地區治療淋病的首選藥物，但隨著其廣泛的應用，耐藥性也逐漸上升，當1種抗菌藥物在某一地區對某種細菌的耐藥性達到5%以上時，就不應成為臨床上治療該細菌感染所致疾病的第一線藥物，因此，加強該地區淋球菌耐藥性及耐藥株的流行狀況的持續監測很有必要。

［1］World Health Organization.Sensitivity testing of Neisseria gonorrhoeae：methodologies for use by participants in the WHO Western Pacific Regional Surveillance Programme［S］／／WHO／WPR Regional Antimicrobial Surevillance Working Group Meeting Proceeding，1992：33.

［2］Clinical and Laboratory Standards Institute.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing；fifteenth informational supplement，M100－S15［S］.Wayne PA.Clinical and Laboratory Standards Institute，2010and activator of transcription 3signaling pathway：Clinical－implcations［J］.Clin Cancer Res，2007，13（5）：1362－1366.

［3］葉順章.性傳播疾病的實驗室診斷［M］.北京：科學出版社，2001：3.

［4］劉小鳳，伍昆山，吳興中，等.珠海地區淋球菌對抗生素的耐藥性分析［J］.皮膚性病診療學雜志，2011，18（3）：163－165.

［5］吳興中，鄭和平，李燕娃，等.淋球菌對頭孢克肟等6種抗生素敏感性及耐藥質粒分型研究［J］.皮膚性病診療學雜志，2012，19（6）：352－355.

［6］斐俊明，章淑燕，黃進波，等.廣東省汕頭市92株淋球菌藥物敏感性檢測［J］.皮膚性病診療學雜志，2009，17（4）：268－270.

［7］張麗君，何亮，王峰，等.深圳地區淋球菌株耐藥性流行趨勢分析［J］.中國熱帶醫學雜志，2010，10（5）：561－562.

［8］楊陽，吳磊，章楚光，等.上海地區淋球菌藥物敏感性試驗和耐藥分子機制研究［J］.中華檢驗醫學雜志，2009，32（10）：1173－1175.

［9］韓燕，尹躍平，戴秀芹，等.2008年中國淋球菌臨床分離株耐藥性的流行病學研究［J］.中華皮膚科雜志，2011，44（7）：472－475.

［10］Ohnishi M，Golparian D，Shimuta K，et al.Is Neisseria gonorrhoeae initiating a future of untreatable gonorrhea？Detaild characterization of the fist strain with high－level resistance to ceftriaxone［J］.Antimicrob Agents chemother，2011，55（7）：3538－3545.

［11］Janice YC，Loho KM，Anna OC，et al.Ceftibuten resistance and treatment failure of neisseria gonorrhoeae infection［J］.Antimicrobial Agents and Chemotherapy，2008，52（10）：3564－3567.

［12］蘇曉紅，張傳福，張津萍，等.大觀霉素治療淋病失敗三例原因分析［J］.中華皮膚科雜志，2003，36（5）：285－286.