SEC—MALLS技術中示差常數校正方法的研究

茍瓊心 王秦龍

摘要：目的：探索激光檢測器和示差檢測器聯用技術中示差常數的測定方法。方法：通過SEC-MALLS技術測定示差檢測器的示差常數，再通過標準物質對示差常數進行確認。結果：用該方法校正得到的示差常數帶入軟件系統，得到了分子量結果與分子量分布準確、可靠。結論：用該方法校正得到的示差常數適用于SEC-MALLS法測定羥乙基淀粉130/0.4的重均分子量和分子量分布。

關鍵詞：激光常數 示差常數 分子量 高效液相色譜儀

羥乙基淀粉130/0.4（Hydroxyethyl starch 130/0.4，HES）是一類膠體性血容量擴充劑，主要用以擴充血容量，改善微循環[1，2]。羥乙基淀粉在體內的擴容強度主要取決于重均分子量及分子量分布[3]，而示差常數是準確測定重均分子量和分子量分布的關鍵常數。SEC-MALLS法中當激光光散射儀與分子排阻色譜聯用時，分子排阻色譜實現不同分子量高聚物分子的分離，分子按大小順序依次進入十八角度激光光散射儀確定分子量[4]，繪制出分子量分布圖，直接測定出絕對重均分子量及分子量分布，能快速、準確地測定物質的重均分子量及分子量分布[5]。不過要得到準確可靠的檢測結果，首先要保證示差檢測器示差常數的準確可靠。

本文主要對SEC-MALLS法示差常數的校正進行研究，并用校正好的常數測定羥乙基淀粉130/0.4標準樣品的重均分子量及分子量分布，從而證明該方法測得的示差常數能夠準確可靠的測定分子量，適用于羥乙基淀粉的重均分子量及分子量分布檢測。

1 示差折光常數

1.1 儀器。Wyatt DAWN HELEOS-Ⅱ十八角度激光光散射儀（懷雅特）；Agilent 1200型高效液相色譜儀（安捷倫）；XS205電子天平（d=0.01mg，梅特勒-托利多）。

1.2 器具和試劑。注射器（塑料）、過濾頭、氯化鈉（分析純）、純化水、烘箱、稱量瓶。

1.3 氯化鈉標準溶液。取經105℃干燥5小時基準氯化鈉適量，精密稱定，加水溶解并稀釋至刻度，依次配得0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml濃度的氯化鈉標準溶液。

1.4 示差常數的采集。用純化水沖洗示差檢測器的參比池與檢測池，至基線穩定，依次將純化水、氯化鈉標準溶液（濃度從小到大）、純化水注入示差檢測器。

1.5 結果的查看。通過軟件操作，在concentration欄中輸入相應的標準溶液濃度，最后在known dn/dc（mg/g）中輸入氯化鈉水溶液的dn/dc值（0.174）后在Report（summary）中查看結果。具體圖譜如圖1、圖2。

1.6 重復以上測量試驗三次，查看線性關系（R2應大于等于0.999），求平均值，確定示差常數。結果見表1。

2 標準品核對

2.1 色譜條件：色譜柱：TSKgel G4000pwxl（30cm*

7.8mm）；儀器：高效液相色譜儀和激光檢測器；流動相：以醋酸鹽緩沖液（18.7g醋酸鈉和34.5ml冰醋酸，加水使溶解并稀釋至5L）為流動相，流速：0.5ml/min-1；柱溫：30℃；進樣體積：20μl。

2.2 供試品溶液：用流動相配制3mg/ml羥乙基淀粉130/0.4的標準物質，濾過。進樣20μl，記錄色譜圖。（圖3）

2.3 重復進樣3次，記錄所得數據，結果見表2。

3 結論

通過測定羥乙基淀粉標準樣品的重均分子量及分子量分布，發現測得的結果與理論參考結果一致。證明用該方法測得的示差常數適用于SEC-MALLS技術測定羥乙基淀粉、蛋白類等高分子物質的分子量及分子量分布。

參考文獻：

[1]宋彥會，杜中海，于鵬，等.SEC-MALLS法測定羥乙基淀粉130/0.4重均分子量及分子量分布[J].齊魯藥事，2012，31（3）：155-157.

[2]孫桂斌，杭太俊.羥乙基淀粉130/0.4氯化鈉注射液相對分子質量及分布的測定[J].藥物分析雜志，2009，29（10）：1643-1645.

[3]羅逸，劉菊蓉，郭興蓬，等.合成產物羥乙基淀粉主要質控指標研究[J].藥物分析雜志，2004，24（3）：296-298.

[4]邵明立，馬曉偉，于文明，等.《中華人民共和國藥典》二部[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄37-38.

[5]左榘主編.激光散射原理及在高分子科學中的應用[M].鄭州：河南科學出版社，1994：48-229.