兒童系統性紅斑狼瘡血清抗C1q抗體的檢測及意義

尹芳蕊 龐春艷 白 力 王 馨 王永福

(包頭醫學院第一附屬醫院中心實驗室，內蒙古包頭014010)

系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是全身結締組織的自身免疫性疾病，遺傳、體內激素水平的變化、環境等因素導致異常的免疫應答［1］，產生多種致病性自身抗體而引起組織和臟器損傷。兒童系統性紅斑狼瘡的發病率低，兒童占所有SLE患者的15% ～20%［2］，臨床表現多種多樣，有些患兒發病過程兇險，累及臟器的發生率更高，易誤診、漏診，延誤治療。

隨著免疫學的迅猛發展和先進實驗手段的應用，風濕病學的實驗室檢查更加精準。標志性抗體的檢測，為臨床醫生早期診斷疾病提供了有力證據。SLE患者血清中具有多種自身抗體，抗dsDNA抗體是SLE的標志性自身抗體之一。Clq是補體經典途徑第一補體成分C1的一個亞基，是補體經典途徑激活的始動因素，抗C1q抗體是針對C1q分子膠原樣區的IgG型自身抗體，其與抗原結合，刺激機體免疫系統產生更多抗體，SLE活動時抗C1q抗體產生增多，最終由于形成免疫復合物，進而對人體重要臟器造成免疫性損傷。本研究探討抗C1q抗體與兒童系統性紅斑狼瘡(SLE)的相關性及臨床意義，為兒童SLE的早期診斷提供經驗，觀察其對兒童SLE的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1)SLE組(40例):均為包頭醫學院第一附屬醫院風濕免疫科2009年6月至2013年12月住院患兒，男6例，女34例，男女比例為1∶5.6;發病年齡3～18歲，平均年齡(14.77±2.80)歲。所有患者均符合1997年美國風濕病學會(American College of Rheumatology，ACR)修訂的SLE診斷分類標準。2)健康對照組(20例):均來自同期醫院體檢的健康兒童，男10名，女10名，平均年齡(13.47±3.43)歲，兩組性別、年齡比較，差異無統計學意義。

1.2 試劑與檢測方法

抗dsDNA采用酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)定量測定(上海科新生物技術股份有限公司)。測定步驟如下:用樣本稀釋緩沖液按1∶101的比例稀釋。向已包被dsDNA的微孔板中加入稀釋血清、質控血清、標準品，每孔加入100 μL，室溫孵育30 min;沖洗3次后加入100 μL酶標記抗人IgG抗體，室溫孵育30 min，再沖洗4次后加入100 μL底物顯色劑，室溫、避光孵育15 min;每孔加入50 μL終止液，在20 min內完成吸光度測定;測定主波長為450 nm，參考波長630 nm，并做標準曲線，求待測血清中抗dsDNA抗體濃度，參考試劑說明書:≥100 IU/mL為陽性。

抗C1q抗體檢測采用酶聯免疫吸附法來進行檢測(Orgentec diagnostika GMBH公司，德國)，將樣品稀釋液進行1∶100的配比，稀釋血清，在C1q酶標板上加進稀釋血清、質控血清、標準品，每孔加入100 μL，在溫室中孵育30 min，洗滌3次;加入酶標二抗，溫室孵育15 min，洗滌3次，加入底物在溫室黑暗處孵育15 min，加入終止液，測定波長為450 nm，參考試劑說明書:≥10 U/mL為抗C1q抗體陽性。

補體采用比濁法，抗核抗體(antinuclear antibody，ANA)、可提取性核抗原(extractable nuclear antigen，ENA)，包括 nRNP、Sm、Jo-1、抗 SSA 抗體、抗 SSB 抗體、scl-70檢測試劑盒均購自德國歐蒙公司。

1.3 統計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統計分析。定性資料用例數和百分數表示，組間比較采用χ2檢驗，定量資料用均數±標準差(±s)表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗。采用敏感度、特異度、陽性預測值和陰性預測值等診斷指標評價使用自身抗體診斷SLE的價值。采用Pearson線性相關系數描述自身抗體、SLE疾病活動指數、免疫學指標的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SLE兒童血清抗C1q抗體檢測的結果及其與抗dsDNA抗體和抗SM抗體敏感度、特異度的對比

40例SLE兒童抗C1q抗體陽性率為37.5%，而正常兒童組抗C1q抗體均為陰性，兩組陽性率比較差異有統計學意義(χ2=8.1，P＜0.01)，抗C1q抗體對SLE兒童的診斷敏感度為37.5%，特異度為100%;抗dsDNA抗體對SLE兒童診斷的敏感度是62.5%，特異

度是95%;抗SM抗體對SLE兒童診斷的敏感度為22.5%，特異度是90%，詳見表1～4。

2.2 抗C1q抗體與實驗室免疫學指標的關系

抗C1q抗體陽性組的抗SM抗體、抗RNP抗體、抗SSA抗體、抗SSB抗體、補體C3、C4與抗C1q抗體陰性組比較，差異無統計學意義(P＞0.05);而抗ds-DNA抗體兩組相比差異有統計學意義(χ2=5.98，P=0.02)，詳見表5。

表1 抗C1q抗體在兒童SLE中的評價指標Tab.1 Diagnostic value of of C1q autoantibodies in children with SLE

表2 抗dsDNA抗體在兒童SLE中的敏感度和特異度Tab.2 Sensitivity and specificity of of dsDNA autoantibodies in children with SLE

表3 抗SM抗體在兒童SL中的的敏感度和特異度Tab.3 Sensitivity and specificity of of SM autoantibodies in children with SLE

表4 抗C1q抗體與抗dsDNA抗體和抗SM抗體在兒童SLE診斷中的評價指標比較Tab.4 Diagnostic value of anti-C1q antibodies in children with SLE compared with other autoantibodies

表5 抗C1q抗體與實驗室指標的關系Tab.5 Associations of anti-C1q antibody with laboratory data in patients with SLE n(%)

2.3 抗C1q抗體與抗dsDNA抗體的相關性

40例SLE兒童的抗dsDNA抗體與抗C1q抗體采用Pearson進行相關分析，結果表明抗dsDNA抗體與抗C1q抗體呈正相關(r=0.51，P＜0.01)，詳見圖1。

圖1 抗C1q抗體與抗dsDNA抗體的相關性Fig.1 Correlations of anti-C1q antibody with Anti-dsDNA antibody

3 討論

兒童SLE中女性患兒發病率占絕對優勢，但男性患兒比例明顯高于成年人，提示青春發育期體內雌激素濃度較高，可能與內分泌因素的作用相關。本研究選取病例中男性6例，女性34例，男女比例為1∶5.6，與國內外文獻報道［3-4］相符。目前抗核抗體(antinuclear antibody，ANA)、抗雙鏈 DNA 抗體(antidouble strand DNA antibody)和抗SM抗體(antiSM antibody)是兒童SLE診斷的血清學指標，但臨床上常可以見到抗dsDNA抗體和抗SM抗體陰性的SLE患兒。

C1q屬于補體C1第一組分的第一個反應亞基，C1q在補體激活途徑中發揮作用。1984年，Uwatoko等［5］在SLE患者的血清中發現抗C1q抗體，抗 C1q抗體發生抗原抗體反應的表位在 C1q分子的膠原區(college-like region，CLR)，CLR與抗 C1q抗體相結合，清除了免疫復合物障礙，使凋亡細胞的清除延緩，對機體的免疫系統進行刺激使其產生更多的抗體，是導致疾病活動的一項重要因素。目前國內外研究［5-11］表明，抗C1q抗體與成人的狼瘡腎炎和其疾病活動度相關。兒童SLE的發病率較成年人低，有關的臨床研究也相對較少。

本研究探討抗C1q抗體檢測在兒童SLE中的診斷價值。本研究發現SLE患兒的抗C1q抗體表達明顯高于健康對照組患兒，兩組陽性率比較，差異有統計學意義(χ2=8.1，P＜0.01)，抗C1q抗體對SLE患兒的診斷敏感度和特異度分別為37.5%、100%;抗C1q抗體特異度的結果與文獻報道［12-14］相似。與抗dsDNA抗體和抗SM抗體相比，抗C1q抗體陽性率不理想，但特異度接近100%，因此聯合檢測抗C1q抗體有助于提高抗dsDNA抗體和抗SM抗體陰性的兒童SLE的診斷。

在實驗室檢查方面，發現抗C1q抗體陽性組與抗C1q抗體陰性組在補體 C3、C4、Anti-SSB、Anti-SSA、Anti-SM、Anti-nRNP等方面差異無統計學意義，但是與抗dsDNA抗體和疾病活動程度相關，提示抗C1q抗體可作為評價病情活動性指標之一，也提示SLE活動時抗C1q抗體產生增多，最終由于形成免疫復合物，進而人體重要臟器造成免疫性損傷，長期以來抗dsDNA抗體被認為是SLE最重要的抗體，但dsDNA并非是引起SLE的唯一免疫原。故診斷SLE時，抗C1q抗體的濃度水平是否也應作為參考指標，且其與病情活動的相關性值得關注［15-16］。C1q抗體水平與dsDNA抗體水平呈現正相關，聯合檢測抗C1q抗體和抗dsDNA抗體有助于醫生掌握SLE病情發展。兩組數據相互驗證，可以有效降低漏診率，對于SLE早期診斷、病情觀察和臨床治療具有重要的指導作用。

［1］ Feng J B，Ni J D，Yao X，et al.Gender and age influence on clinical and laboratory features in Chinese patients with systemic lupus erythematosus:1790 cases［J］.Rheumatol Int，2010，30(8):1017-1023.

［2］ Kamphuis S，Silverman E D.Prevalence and burden of pediatric-onset systemic lupus erythematosus［J］.Nat Rev Rheumatol，2010，6(9):538-546.

［3］ 于清，薛海燕，曹蘭芳.104例兒童系統性紅斑狼瘡臨床分析［J］.臨床兒科雜志，2011，29(10):942-947.

［4］ 郭雨凡，孫凌云，鄒耀紅，等.1958例系統性紅斑狼瘡住院患者首發表現和起病特點的回顧分析［J］.中華風濕病學雜志，2011，15(2):105-107.

［5］ Uwatoko S，Mannik M.Low molecular weight C1q-binding immunoglobulin G in patients with systemic lupus erythematosus consists of autoantibodies to the collagen-like region of Clq［J］.J Clin Invest，1988，82(3):816-824.

［6］ Trendelenburg M，Lopez-Trascasa M，Potlukova E，et al.High prevalence of anti-C1q antibodies in biopsy-proven active lupus nephritis［J］.Nephrol Dial Transplant，2006，21(11):3115-3121.

［7］ Sinico R A，Radice A，Ikehata M，et al.Anti-C1q auto antibodies in lupus nephritis:prevalence and clinical significance［J］.Ann N Y Acad Sci，2005，1050:193-200.

［8］ Katsumata Y，Miyake K，Kawaguchi Y，et al.Anti-C1q antibodies are associated with systemic lupus erythematosus global activity but not specifically with nephritis:a controlled study of 126 consecutive patients［J］.Arthritis Rheum，2011，63(8):2436-2444.

［9］ Akhter E，Burlingame R W，Seaman A L，et al.Anti-C1q antibodies have higher correlation with fl ares of lupus nephritis than other serum markers［J］.Lupus，2011，20(12):1267-1274.

［10］ Oelzner P，Deliyska B，Fünfstück R，et al.Anti-C1q antibodies and antiendothelial cell antibodies in systemic lupus erythematosus relationship with disease activity and renal involvement［J］.Clin Rheumatol，2003，22(4-5):271-278.

［11］ Marto N，Bertolaccini M L，Calabuig E，et al.Anti-C1q antibodies in nephritis:correlation between titres and renal disease activity and positive predictive value in systemic lupus erythematosus［J］.Ann Rheum Dis，2005，64(3):444-448.

［12］Jesus A A，Silva C A，Carneiro-Sampaio M，et al.Anti-C1q antibodies in juvenile-onset systemic lupus erythematosus［J］.Ann N Y Acad Sci，2009，1173:235-238.

［13］Wu F Q，Zhao Q，Cui X D，et al.C1q and anti-C1q antibody levels are correlated with disease severity in Chinese pediatric systemic lupus erythematosus［J］.Rheumatol Int，2011，31(4):501-505.

［14］ Jesus A A，Campos L M，Liphaus B L，et al.Anti-C1q，anti-chromatin/nucleosome，and anti-dsDNA antibodies in juvenile systemic lupus erythematosus patients［J］.Rev Bras Rheumatic，2012，52(6):971-981.

［15］程玉萍，李麗.檢測抗核抗體譜在系統性紅斑狼瘡診治中的意義［J］.解放軍醫藥雜志，2013，(1):63-66.

［16］文振華，左曉霞，周亞歐.兒童與成人系統性紅斑狼瘡的臨床和免疫學特征比較［J］.臨床誤診誤治，2012，25(10):64-66.