高效液相色譜法測(cè)定解郁安神顆粒中甘草苷的含量

鄭籃君 應(yīng)翔 王琤帥 舒展

解郁安神顆粒是由甘草、柴胡、遠(yuǎn)志、梔子、百合、茯苓、當(dāng)歸、半夏等16味中藥提取物制成的顆粒劑, 具有舒肝解郁、安神定志的功效。臨床用于情志不暢、肝郁氣滯所致的失眠、心煩、焦慮、健忘；神經(jīng)官能癥、更年期綜合征見上述證候者［1］。甘草苷為君藥甘草的主要有效成分［2］。中國(guó)藥典(2010年版一部)僅收載了梔子苷的含量測(cè)定, 為了更有效的控制該中成藥的質(zhì)量, 在該制劑中增加了甘草苷含量測(cè)定, 并對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行驗(yàn)證。

1 儀器與試藥

Agilengt 1100型高效液相色譜儀, 包括HP1100系列四元泵, DAD檢測(cè)器, Agilent 1200自動(dòng)進(jìn)樣器, HP1100化學(xué)工作站；Mettler AE240電子分析天平(梅特勒公司)；DSA100-GL2型超聲波清洗器(福州德森精工有限公司)。甘草苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所, 批號(hào)：11610-200604)；解郁安神顆粒(四平市吉特藥業(yè)有限公司, 批號(hào)：20120702、20120811、20121008)；陰性樣品 (自制 )；乙腈 (色譜級(jí), 美國(guó)Tedia公司)；水(超純水)；其他試劑為分析純。

圖1 對(duì)照品(A)、供試品(B)和陰性樣品(C)色譜圖；1.甘草苷

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Inertsil ODS-SP C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.2%冰醋酸(55:45)；流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：276 nm；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：10 μl；理論塔板數(shù)按甘草苷峰計(jì)算, 應(yīng)不低于5000。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取甘草苷對(duì)照品適量, 加50%乙醇制成每毫升含10 μg的溶液, 即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品研細(xì), 精密稱取細(xì)粉約0.5 g, 加入50%乙醇50 ml, 稱定重量, 超聲處理30 min, 放冷, 用50%乙醇補(bǔ)足減失的重量, 搖勻, 濾過(guò), 即得。

2.4 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例自制不含甘草苷提取物的顆粒, 作為空白制劑, 再按供試品溶液的配制方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.5 干擾實(shí)驗(yàn) 精密吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照品溶液各10 μl, 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件下測(cè)定。結(jié)果,供試品溶液中其他成分不干擾測(cè)定。結(jié)果見圖1。

2.6 線性關(guān)系考察 精密稱取甘草苷對(duì)照品適量, 加50%乙醇溶解并制成每毫升含1.05 mg的溶液, 作為儲(chǔ)備液。分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液適量制成濃度為10.5、21、52.5、84、105 μg/ml的對(duì)照品溶液。取10 μl注入高效液相色譜儀,按“2.1”項(xiàng)下進(jìn)樣, 以濃度為橫坐標(biāo)(X), 峰面積(Y)為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸, 其回歸方程為Y=17.452 X-3.9041, r=0.9999。結(jié)果表明甘草苷在進(jìn)樣量0.105～10.5 μg范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn) 取供試品溶液照“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次, 結(jié)果甘草苷峰面積的RSD為0.40%, 表明精密度良好。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào)：20120702)5份, 照“2.3”項(xiàng)下方法和“2.1”項(xiàng)下色譜條件制成供試品溶液并測(cè)定,計(jì)算甘草苷的含量, 其RSD值為0.52%, 表明重復(fù)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取精密度試驗(yàn)供試品溶液, 分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測(cè)定, 結(jié)果甘草苷峰面積的RSD為0.55%,表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗(yàn) 稱取已知含量的供試品(批號(hào)：20120702)約0.5 g, 精密稱定, 共取6份, 分別精密加入含甘草苷0.1385 mg/ml的對(duì)照品溶液各1 ml, 照“2.3”項(xiàng)下方法和“2.1”項(xiàng)下色譜條件制成供試品溶液并測(cè)定, 按外標(biāo)法計(jì)算甘草苷含量, 并計(jì)算回收率。結(jié)果甘草苷的平均回收率為98.1%(n=6), RSD為0.91%。

2.11 樣品含量測(cè)定 取3批供試品(批號(hào)：20120702、2012081、20121008), 按照“2.3”項(xiàng)下方法和“2.1”項(xiàng)下色譜條件制成供試品溶液并測(cè)定, 按外標(biāo)法計(jì)算甘草苷含量,結(jié)果分別為0.2771、0.2656、 0.2713 mg/g。

3 討論

3.1 提取方法的選擇 作者曾采用甲醇、流動(dòng)相、不同濃度乙醇提取本品, 結(jié)果表明甲醇、流動(dòng)相提取效率低于乙醇, 考察各種濃度乙醇提取本品, 結(jié)果表明50%乙醇提取甘草苷峰面積最大；因此采用50%乙醇為提取溶劑；同時(shí)考察不同超聲時(shí)間對(duì)樣品測(cè)定的影響, 結(jié)果表明超聲30 min后甘草苷峰面積不再增大；故選擇樣品處理方法為50%乙醇超聲30 min。3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 取甘草苷對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液采用紫外-可見分光光度計(jì)在 190～400 nm進(jìn)行UV掃描, 結(jié)果表明, 在276 nm和312 nm 波長(zhǎng)處陰性對(duì)照溶液無(wú)吸收而甘草苷具有較大的吸收值, 但在276 nm波長(zhǎng)處的靈敏度>312 nm, 因此在本方法中選用 276 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典.一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2010:1195.

［2］鄭虎古, 董澤宏, 佘靖, 等.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用.北京:學(xué)苑出版社, 1997:1256.