MUC2蛋白在胃癌組織中的表達研究

楊建偉 呂俊生

中國醫(yī)科大學北京順義醫(yī)院普外科，北京 101300

粘液對胃腸道粘膜起保護潤滑作用，其中的主要成份是粘蛋白。目前已有14 種粘蛋白被確定，MUC2 蛋白是被研究較多的一種，其是由MUC2 基因編碼的分泌型粘蛋白，主要存在于正常結直腸組織中，目前的一些研究發(fā)現(xiàn)：MUC2 蛋白還表達于胃癌結直腸癌及胰腺癌等組織中。該研究2007年1月—2008年12月間采用免疫組織化學S-P 法檢測胃癌組織，正常胃粘膜及腸化生組織中MUC2 蛋白的表達,探討其在胃癌在發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，與胃癌生物學行為及預后的關系。報道如下。

1 資料與方法

1.1 標本來源

選取北京順義區(qū)醫(yī)院普外科行手術治療的55 例胃癌標本，其中男37 例，女18 例，年齡36~78 歲，平均60.1 歲。按腫瘤生長部位分類：胃底癌9 例，胃體癌19 例及胃竇部癌27 例。腫瘤未侵透粘膜深肌層10 例，未侵透漿膜下者23 例，侵透漿膜及以遠者22 例。按大體類型分為限局型25 例,浸潤型30 例。組織學按WHO 分型，高分化腺癌22 例，低分化腺癌22 例，粘液腺癌11例。淋巴結轉移者34 例，未轉移者21 例。取同時期25 例胃粘膜腸化生標本，15 例胃癌切緣正常粘膜（距癌灶>5 cm）并經(jīng)HE 鏡檢確定無癌組織及癌前病變做對照。55 例患者均于2014年1月進行隨訪，其中尚生存的為35 例，已死亡20 例,總的5年生存率為63.6%。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學 采用免疫組織化學SP 法，MUC2 粘蛋白的一抗稀釋溶度為1:100。主要試劑:鼠抗人MUC2 粘蛋白單克隆抗體濃縮液，購自北京中杉金橋生物技術公司，兔抗鼠快捷型酶標抗體、檸檬酸抗原修復液((pH 6.0)及DAB 顯色試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。所有標木均經(jīng)過10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，2 μm 厚連續(xù)切片，免疫組織化學染色。免疫組織化學染色步驟：常規(guī)脫蠟脫水，清水沖洗，過氧化氫孵育10 min 清除內(nèi)源性過氧化物酶，抗原熱修復，滴加一抗，37 ℃孵育1 h，滴加二抗，常溫下孵育10 min，DAB 顯色3~5 min，蘇木素復染，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.2.2 結果判斷 細胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒的細胞數(shù)>10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計方法

所有數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS17.0 軟件包進行分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗及四格表精確概率法進行組間差異比較。

2 結果

2.1 MUC2 蛋白在正常胃粘膜，腸化生粘膜及胃癌中的表達

15 例正常粘膜中無MUC2 表達，腸化生粘膜中表達率為36.0%，胃癌組織中的表達率為61.8%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。陽性顆粒定位于細胞漿。見表1。

表1 MUC2 在正常粘膜與胃癌組織中的表達

2.2 MUC2 蛋白在胃癌中的表達與臨床病理特點及預后的關系

MUC2 蛋白在胃癌中的表達與患者年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、大體類型、腫瘤浸潤深度、有無淋巴結轉移無關。與病理組織學類型及淋巴結轉移有關，在高分化腺癌、低分化腺癌、粘液腺癌中的陽性表達率分別為50.0%、54.5%、100%，淋巴結轉移及無淋巴結轉移組MUC2 陽性率分別為73.5%,42.9%, 差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。MUC2 蛋白陽性表達患者的五生存率為52.9%，陰性表達患者生存率為80.9%,兩者比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2、3。

表2 胃癌組織中MUC2 的表達與臨床病理特點之間關系

表3 胃癌組織中MUC2 的表達與預后的關系

3 討論

MUC2 基因是1989年由美國學者Gum[1-2]等從小腸CDNA 表達文庫中克隆到的一種粘蛋白核心肽基因，其所編碼的MUC2 蛋白是一種富含糖鏈的分泌型糖蛋白，是粘液凝膠的主要成份，由上皮細胞合成和分泌，主要存在于正常結直腸組織中，在正常胃粘膜中幾乎沒有表達。目前的研究發(fā)現(xiàn)MUC2 蛋白在腸化生粘膜及胃癌粘膜中均有不同程度的表達[3]。該研究發(fā)現(xiàn)15 例正常粘膜中無MUC2 蛋白表達，腸化生粘膜中表達率為36.0%，在胃癌組織中表達率為61.8%，腸化生及胃癌組織中的表達高于正常粘膜，且胃癌組織與腸化生粘膜表達的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。進一步證明腫瘤發(fā)展是正常粘膜－癌前病變－胃癌的分階段的過程,并提示蛋白的表達與成瘤過程正相關。汪榮泉[4]等通過用原位雜交法對癌前病變及胃癌組織中的MUC2mRNA 進行檢測發(fā)現(xiàn)：MUC2 基因在成瘤過程中是明顯上調的。從基因水平證實了筆者的假設。該研究還發(fā)現(xiàn)，MUC2 蛋白在粘液腺癌中的表達率為100%，與高分化腺癌組及低分化腺癌組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），可以作為研究粘液腺癌的較好指標。Baldus[5]等運用免疫組化法研究128 例胃癌組織中MUC2 的表達發(fā)現(xiàn)其在腸型胃癌中的表達遠高于彌漫型胃癌，并由此認為MUC2 的表達與腸型胃癌的良好預后有關。而該研究在對患者的生存資料進行分析中卻發(fā)現(xiàn)MUC2 陽性患者5年生存率（52.9%）低于MUC2 陰性患者(80.9%)，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而且MUC2 在預后較差的粘液腺癌中表達較廣泛，還是說明MUC2 陽性表達與預后不佳有一定聯(lián)系，有待擴大病例數(shù)進一步研究。另外有文獻報道[6]：MUC2 與人vWF 的結構相似因此有可能參與腫瘤的轉移擴散。Sonodah[7]用RT-PCR 法檢測28 例PT1 期胃癌患者的286 枚陰性淋巴結中MUC2 及CEA 的表達，發(fā)現(xiàn)MUC2 的表達率遠高于后者，并由此發(fā)現(xiàn)MUC2 表達陽性淋巴結中的微轉移，且無假陽性，由此認為MUC2 是淋巴結微轉移的敏感指標。該研究中有淋巴結轉移的病例中MUC2 表達率為73.5%，遠高于無淋巴結轉移病例中的表達率42.9%，和Machado JC[8]報道一致，差異有統(tǒng)計學意義（P=0.102），因此考慮MUC2 在腫瘤轉移中還是有一定作用的，其表達增多時可能通過干預整合素和鈣粘素的作用而影響細胞的粘附和轉移,增強腫瘤細胞對正常細胞的粘附，從而有利于腫瘤的侵襲和轉移。此外，MUC2 可在腫瘤細胞表面通過位阻現(xiàn)象影響主要組織相容性抗原對于腫瘤細胞特異性抗原的呈遞過程,并可掩蓋細胞表面的有關受體,從而抑制殺傷性T 淋巴細胞對腫瘤細胞的識別,最終導致腫瘤細胞逃避免疫監(jiān)視。MUC2 在淋巴結轉移過程中的作用還需深入研究。綜上，MUC2 蛋白表達與粘液腺癌及淋巴結轉移關系密切均提示預后不佳。

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