鼻咽癌中VEGF-C的表達及其與頸淋巴結轉移的關系

吳艷霞 吳冬梅 鄧小青

廣東醫學院附屬醫院病理科，廣東湛江 524001

鼻咽癌是我國常見的惡性程度較高的腫瘤之一，由于該病早期臨床癥狀不明顯，往往被確診時已至中晚期，因此治愈率低，患者的預后較差[1]。有研究顯示，血管內皮生長因子C(VEGFC)是淋巴管、血管內皮細胞調節因子的一種，也是血管內皮生長因子/血小板源生長因子(VEGF/PDGF)家族的新成員，當VEGF-C與VEGFR-3 結合后，對淋巴管的生成會產生強大的作用，與腫瘤的淋巴結轉移及擴散有著密切的關系[2]。該研究通過對該院2008年1月—2012年12月收治的46 例鼻咽癌患者與42 例鼻咽癌頸淋巴結轉移患者組織進行VEGF-C 檢測，探討分析VEGF-C 表達與鼻咽癌頸淋巴結轉移的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇該院收治的鼻咽癌患者46 例為研究對象，作為鼻咽癌組，其中男26 例，女20 例，年齡25~67 歲，平均年齡（53.1±11.8）歲，WHO 分類：未分化型非角化性癌22 例，分化型非角化性癌18 例，角化性鱗狀細胞癌6 例；TNM 分期：I~Ⅱ期26 例，Ⅲ~Ⅳ期20 例；同期選擇該院收治的鼻咽癌并發頸淋巴結轉移患者42 例為頸淋巴結轉移組，其中男性32 例，女10 例，年齡29~62 歲，平均年齡（37.8±20.0）歲，WHO 分類：未分化型非角化性癌20 例，分化型非角化性癌17 例，角化性鱗狀細胞癌6 例；TNM 分期：I~Ⅱ期23 例，Ⅲ~Ⅳ期19 例。所有患者活檢前均未接受放化療及其他治療,同時，所有患者軍簽署知情同意書，并該研究獲得該院倫理委員會批準。

1.2 方法

所有患者均抽取空腹靜脈血4 mL，采用免疫組化染色法SP法進行檢測，具體操作如下：將制作好的石蠟切片，置于恒溫箱內60 ℃烘烤30 min，并浸入二甲苯溶液內脫蠟并水化；加入過氧化物酶阻斷劑，室溫孵育20 min，以抑制內源性過氧化物酶活，并采用檸檬酸緩沖液微波加熱進行修復抗原；選用非免疫性動物血清封閉10 min，PBS 洗滌； 加入經抗體稀釋液稀釋至1∶100 的VEGF-C 兔抗人多克隆抗體，4 ℃孵育12 h，PBS 重復洗滌3 次；加入生物素標記的二抗，室溫孵育20 min，PBS 重復洗滌3 次；滴加鏈親和素-過氧化物酶溶液，室溫孵育20 min；再經DAB 顯色 （濃縮型DAB 試劑盒購自北京中杉生物技術有限公司），蘇木素復染，封片操作后，與熒光顯微鏡下觀察并拍照。

1.3 判定標準

采用染色陽性大腸癌組織切片為陽性對照片，陰性對照片以非免疫血清代替一抗。陽性表達為細胞膜或細胞質均呈棕褐色或棕黃色顆粒。將每一切片選擇3 個視野，顯微鏡×400，每個視野計數100 個腫瘤細胞，共選擇3 個視野的平均百分數進行結果判定[3]：①依據棕陽性黃色的面積及強弱判定：陰性：陽性細胞<10%；陽性：10%~50%；強陽：>50%。按陽性細胞百分率進行結果判定：0 分：<10%；1 分：10%~50%；2 分：>50%；②計分根據染色強弱：0 分：淡黃色；1 分：黃色；2 分：棕黃色。陰性：以上兩項合計0~1 分；陽性：合計2~3 分；強陽性：合計4 分。

1.4 統計方法

運用SPSS17.0 統計學軟件分析處理所得數據，計數資料采用百分率表示，組間對比采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 兩組患者VEGF-C 的表達比較

頸淋巴結轉移組患者VEGF-C 表達陽性者34 例，陽性率達到80.95%，而鼻咽癌組患者中VEGF-C 表達陽性者20 例，陽性率僅為43.48%，組間對比發現，頸淋巴結轉移組的陽性率顯著高于鼻咽癌組，組間差異有統計學意義(χ2=13.004，P<0.05)，見表1。

表1 兩組患者VEGF-C 表達比較[n（%）]

2.2 鼻咽癌組無淋巴結轉移、伴有淋巴轉移患者VEGF-C 表達

對于鼻咽癌組患者，按照有無淋巴結轉移分組，各組間的VEGF，伴有淋巴結轉移患者的VEGF-C 表達呈陽性者15 例，陽性率為57.69%，顯著高于無淋巴結轉移組10%（2 例），組間對比差異有統計學意義(χ2= 11.036，P<0.05)。見表2。

表2 鼻咽癌組無淋巴結轉移與伴有淋巴結轉移VEGF-C 表達比較[n（%）]

3 討論

鼻咽癌是臨床較為常見的惡性腫瘤，尤其在我國南部地區發病率較高，目前對于鼻咽癌的治療仍多以放療為主，但據統計發現，經放療治療后患者的五年生存率僅為50%左右，多數患者因復發或者遠位轉移而導致治療失敗[4]。頸部淋巴結轉移是鼻咽癌轉移的首發癥狀，占到鼻咽癌轉移的60.30%~86.10%，且大多為雙側轉移[5]。此外，頸部淋巴結轉移往往發生在鼻咽癌早期，往往鼻咽部尚未發現病灶時，并可表現出頸部淋巴結轉移[6]。因此，早期進行淋巴結轉移的診斷和控制，對于鼻咽癌的預防和治療具有重要意義。

VEGF-C 是目前研究發現的新的VEGF 家族成員，具有特異的淋巴管生成作用，逐漸被廣泛關注。血管內皮生長因子VEGFC 被認為與腫瘤的新生淋巴管形成和淋巴結轉移有密切關系。VEGFR-2、VEGFR-3 都是VEGF-C 的受體，促進機體的血管生成的原因是VEGF-C 與VEGFR-2 結合，促進機體淋巴管的生成則是VEGF-C 與VEGFR-3 結合[7]。目前，大多數惡性腫瘤如：肺癌、結直腸癌、胃癌、前列腺癌、乳腺癌、纖維肉瘤及惡性黑色素瘤等組織中VEGF-C 檢測值均顯著高于正常組織，VEGF-C 高表達與腫瘤淋巴管形成、淋巴結轉移和患者的預后關系密切[8]。王文歡[9]等通過對32 例胃癌患者的VEGF-C 在胃癌組織中的表達及其與腫瘤淋巴結轉移的關系研究中發現，胃癌組織VEGF-C表達明顯高于正常胃組織，差異有統計學意義(P<0.01),且淋巴結轉移組的VEGF-C 的表達與未轉移組間差異有統計學意義(P<0.05)，表明胃癌細胞VEGF-C 高表達與淋巴結轉移密切相關,可作為評估胃癌患者預后的重要參考指標。祝英杰[10]等通過對卵巢癌患者血清VEGF-C 水平與卵巢癌腹膜后淋巴結轉移間的相關性研究發現，卵巢癌患者血清VEGF-C 水平明顯高于良性對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，以血清VEGF-C 濃度為2 400 pg/mL 作為分界值，血清VEGF-C>2 400 pg/mL 組的腹膜后淋巴結轉移率高達77.78%，較血清VEGF-C ≤2 400 pg/mL 組（27.78%）顯著降低，表明血清VEFG-C 水平能夠有效預測卵巢癌腹膜后淋巴結轉移。此外，李文光[11]等研究發現，鼻咽癌組織中VEGF-C 及其受體Flt-4 的陽性表達率顯著高于正常對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，且有淋巴結轉移組的VEGF-C 陽性率顯著高于未發現淋巴結轉移組，表明VEGF-C 的高表達可能參與促進鼻咽癌的淋巴結轉移。因此，檢測VEGF-C 在鼻咽癌組織中的表達可能會在預測鼻咽癌頸淋巴結轉移、 復發及評估預后等方面具有一定的意義,并可能為鼻咽癌提供新的治療措施。

該研究結果也顯示，鼻咽癌組中，伴有淋巴結轉移患者的VEGF-C 陽性率為57.69%（15 例），顯著高于無淋巴結轉移組10%（2 例），差異有統計學意義(P<0.05)。同時，頸淋巴結轉移組VEGF-C 陽性率為80.95%（34 例），顯著高于鼻咽癌組43.48%（20 例），差異有統計學意義(P<0.05)，提示，VEGF-C 陽性率在鼻咽癌頸淋巴結轉移患者組織表達值較高。田峰[12]等通過對鼻咽癌(NPC)患者外周血血清VEGF-C 表達水平的檢測發現，鼻咽癌患者血清中VEGF-C 表達水平較良性疾病對照組、 健康對照組顯著升高，差異有統計學意義（P<0.05），且淋巴結轉移組高于無轉移組，差異有統計學意義(P<0.05)，相關性分先發現兩者間成正相關，差異有統計學意義(r=0.756，P<0.05)，結論與該研究相一致。此外，肖蕓[13]等通過對26 例未化療鼻咽癌淋巴結轉移患者采用免疫組化發進行VEGF-C 檢測，并將檢測結果與未發生淋巴結轉移的患者進行比較，發現轉移組VEGF-C 陽性率顯著高于未轉移組。這些都表明鼻咽癌組織內VEGF-C 表達水平的升高，能夠有效促進其向頸淋巴結的轉移，但具體機制還需進一步的深入研究證實。

綜上所述，鼻咽癌頸部淋巴轉移患者的組織內VEGF-C 表達量顯著升高，同時對于伴有淋巴結轉移的鼻咽癌患者VEGF-C表達量也較未發生轉移者升高，表明鼻咽癌患者組織中VEGF-C的表達與頸淋巴結轉移具有一定的相關行，其檢測可用于臨床診斷鼻咽癌頸淋巴結轉移。

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