紅細胞冷凝集對血細胞分析檢驗的影響及處理方法

孫建偉

遼寧省撫順礦務局總醫院檢驗科，遼寧撫順 113008

血細胞分析儀是臨床實驗室檢查常用的檢驗儀器之一，血細胞分析結果的質量直接關系到對病人的診斷和分析，但在血常規的日常檢測中經常會遇到很多影響因素，例如：血小板假性減少癥，紅細胞凝集(冷凝集)，脂血/溶血，有核紅細胞，白細胞增多，瘧疾，采樣、抗凝不當等。因此，在血常規的檢測過程中做好質量控制是至關重要的。在血細胞分析中我們發現有些患者的紅細胞極容易發生凝集，使RBC、 HCT 假性降低，MCV、MCH、MCHC 假性升高。造成血常規的檢驗結果不正常，對臨床做出錯誤的引導。為了及時發現和準確排除紅細胞冷凝集對血細胞分析儀的影響，該實驗選擇了從2013年1月—2014年5月共20例紅細胞冷凝集的標本在3 種不同條件下檢測: ①普通室溫（20℃）；②37 ℃水浴30 min 后立即檢測；③25 ℃條件下37 ℃水浴30 min 后立即檢測，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 儀器與試劑日本Sysmex 公司生產的XE-5000 全自動血液分析儀及配套原裝試劑、日本奧林巴斯光學株式會社生產的雙筒顯微鏡。原廠配套正常濃度和高濃度質控品。

1.1.2 標本 從2013年1月—2014年5月撫順礦務局醫院住院患者血常規標本中，通過鏡檢篩選出20例紅細胞冷凝集標本。所有標本均按常規全血細胞檢測，血細胞分析儀每半年校準一次。每日測定正常濃度和高濃度2 個濃度的質控品，結果均在控。標本通過靜脈采血2 mL，加入EDTA-K2 抗凝的真空管內，輕輕地顛倒混勻。于采集后4 h 內，在XE-5000 全自動血液分析儀檢測完畢。其中男性12 人，女性8 人。其中包括肺炎支原體10例，傳染性單核細胞增多癥3例，多發性骨髓瘤2例，肺癌1例，白血病2例，惡性淋巴瘤2例。

1.2 方法

將20例紅細胞冷凝集的標本采用不同的方法處理后，在日本Sysmex 公司生產的XE-5000 全自動血液分析儀檢測。血液分析儀所使用的試劑為原廠配套。顯微鏡為日本奧林巴斯光學株式會社生產。瑞士吉姆薩染液由貝索生物技術公司提供。①普通室溫(20 ℃)； ②37 ℃水浴30 min; ③25 ℃條件下，37 ℃水浴30 min。記錄3 種不同條件下紅細胞﹑紅細胞壓積、血紅蛋白﹑紅細胞各項參數﹑白細胞﹑血小板的值。該儀器以半導體激光器流式細胞技術結合熒光染色技術檢測白細胞，電阻抗法測定紅細胞和血小板，比色法測定血紅蛋白。以上3 種方法檢測的同時觀察管壁紅細胞聚集的情況，檢測各推兩張血涂片，瑞士吉姆薩染色，雙筒顯微鏡鏡檢。

1.3 統計方法

使用SPSS17.0 軟件對數據進行處理分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，采用t 檢驗。

2 結果

紅細胞冷凝集的標本在3 種不同的環境下檢測時可發現：普通室溫時，紅細胞、白細胞、血小板均有異常報警（Agglut 和Turb/Hb）。紅細胞直方圖可見異常的大紅細胞峰。管壁上有細砂粒樣凝集顆粒；血涂片發現血膜上有許多細小顆粒，顯微鏡下可見紅細胞大量聚集在一起。

37 ℃水浴30 min 后，15例標本未發現抗凝管管壁有凝集顆粒，試管壁上的小片狀凝塊消失，紅細胞分布圖形正常，無報警信息。鏡檢血涂片，可見紅細胞均勻分布。其余5例標本仍然提示紅細胞、白細胞、血小板有異常報警（Agglut 和Turb/Hb）,紅細胞直方圖異常。

表1 普通室溫（20 ℃）和37 ℃水浴30 min 后及25 ℃條件下，37 ℃水浴30 min 20例測定結果（±s）

表1 普通室溫（20 ℃）和37 ℃水浴30 min 后及25 ℃條件下，37 ℃水浴30 min 20例測定結果（±s）

普通室溫37 ℃水浴后37 ℃水浴25 ℃室溫測定組別7.05±0.25 7.12±0.30 7.10±0.29 WBC(×109/L)1.25±0.10 3.85±0.13 3.98±0.15 RBC(×1012/L)124±2.0 122±1.0 123±1.0 HGB(g/L)18.2±0.05 35.2±0.03 37.2±0.06 HCT(%)145.6±2.40 91.4±3.10 93.4±2.50 MCV(fL)99.2±1.60 31.7±1.20 30.9±3.0 MCH(pg)681±15 346±12 330±14 125±10 130±8 128±14 MCHC(g/L) PLT(×109/L)

室溫25 ℃時，標本37 ℃水浴30 min 后，20例標本均未出現報警信息。管壁無凝集顆粒，鏡檢血涂片，可見紅細胞均勻分布。

從表1 可以看出，①普通室溫(20 ℃)和37 ℃水浴30 min 的結果比較，WBC、HGB、PLT 差異無統計學意義（P＞0.05）。而紅細胞、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)的差異有統計學意義(P＜0.05）；②37℃水浴30 min 和25 ℃條件下37 ℃水浴30 min 的結果比較，WBC、HGB、PLT 差異無統計學意義 （P＞0.05）。而紅細胞、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)的差異有統計學意義(P＜0.05）。

3 討論

冷凝集素是冷反應型抗紅細胞抗體，在受冷后可使紅細胞出現聚集[1]。在0~4 ℃時最易和紅細胞膜抗原結合,是較強的使紅細胞凝集的一種自身免疫性抗體, 可存在于正常人的血清中,抗體多數是IgM 型。低效價的冷凝集素一般無臨床意義,通常16 ℃以下可使紅細胞發生凝集,30 ℃以上不發生凝集[2]。這種自身凝集反應是可逆的，當環境溫度升高后，凝集的紅細胞可自行解聚[3]。正常人血液中都有一定量的冷凝素抗體，但滴度較低，在1∶16 以下。正常情況下，不會導致不良反應。但當機體處于感染等病理情況時，機體的冷凝素的含量增加，可以引起凝集反應[4]。很多疾病如多發性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、淋巴系統增殖性疾病、自身免疫性疾病、某些病毒和支原體感染、癌癥、白血病、妊娠等都可以出現冷凝集反應[5]。

該實驗中，20例標本在普通室溫 （20 ℃）,37 ℃水浴30 min和25 ℃條件下37 ℃水浴30 min 3 種條件測定時,WBC﹑PLT﹑HGB 的計數結果差異無統計意義（P＞0.05）。在研究中發現，當標本出現冷凝集時，數個紅細胞凝集在一起，血細胞分析儀只對體積相當的紅細胞或小紅細胞進行了分析，而大紅細胞團塊完全被忽略，這就導致了不合邏輯的紅細胞計數降低和高MCV。而HGB 是紅細胞溶解后采用比色方法測定，故冷凝集對HGB 無影響。對于由RBC、HGB、HCT 計算的參數MCV、MCH、MCHC 則造成假性偏高。很多文獻[6-7]報道了標本發生冷凝集時的處理方法，如經37 ℃水浴不同時間后立即進行檢測，進行血漿置換，重新采血后立即測定。37 ℃水浴后在不同的儀器上檢測。對試劑和樣本進行雙重加溫，這些方法使冷凝集的標本得到了很好地處理。在本實驗中，37 ℃水浴30 min 糾正了15例冷凝集標本，但仍存在5例標本出現冷凝集現象。而在水浴的同時提高室內溫度到25 ℃，對于5例冷凝集素效價高﹑紅細胞聚集程度強的標本得到了很好地處理。從表中可以看出，20例標本在37 ℃水浴30 min和25 ℃條件下37 ℃水浴30 min 兩種條件檢測時，紅細胞、紅細胞壓積（HCT）、平均紅細胞體積（MCV）、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)的差異有統計學意義(P＜0.05）。這與石恩榮在冷凝集對血液分析儀檢測結果的影響的報道是一致的。在該實驗中WBC、HGB、PLT 差異無統計學意義（P＞0.05）。由于XE-5000 是以半導體激光器流式細胞技術結合熒光染色技術檢測白細胞，故對WBC 沒有影響。冷凝集對PLT的影響報道并不一致，該實驗顯示PLT 計數未受影響。在冷凝集的標本檢測中，重新采血不但增加了患者的壓力，而且病房標本立即檢測很難做到。進行血漿置換可造成血小板和白細胞的丟失，置換次數越多丟失現象越嚴重。這可能與吸棄血漿時WBC﹑PLT 被一起吸掉有關。在該實驗中，水浴的同時升高溫度避免了讓患者重新采血的壓力，避免了血漿置換WBC﹑PLT 的丟失，且操作簡單，對冷凝集的處理效果較好。一般的實驗室很容易做到。

綜上所述當遇到疑似冷凝集標本，如RBC，HGB 比例嚴重不符時（正常人HGB 和RBC 的比例為30∶1），首先觀察試管內標本狀態，仔細觀察紅細胞分布的直方圖和出現的報警信息，同時檢測冷凝素的效價。當標本確定為冷凝集后，37 ℃水浴30 min 后，可以利用空調提高室內的溫度到25 ℃以上，此方法可以消除冷凝集素的影響。在日常工作中，尤其是冬天溫度較低的時候，經常會遇到標本發生冷凝集情況。正確識別和處理冷凝集標本的異常檢測結果，對臨床準確評估患者的病情非常重要。可避免發出錯誤的檢驗報告,影響臨床檢驗治療

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