2006～2012年院內感染金黃色葡萄球菌耐藥性監測及同源性分析＊

王 震，施 瑜，曹珍娣，印夏微（江蘇省鎮江市第二人民醫院：.檢驗科；.感染管理科 000）

近年來，金葡菌的耐藥情況日趨嚴峻，其中耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）引起的院內感染尤其嚴重，且呈多重耐藥性［1-2］。本研究對院內感染金黃色葡萄球菌的分布及耐藥性進行統計分析，并采用簡便、經濟、快速的隨機引物DNA擴增多態性（RAPD）技術［3］，對同一病區或同一時期從患者標本及院感監測標本中分離出的金黃色葡萄球菌進行同源性分析，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 菌株來源2006年1月至2012年12月，收集住院時間大于10d患者的血液、胸腹腔積液、痰、咽拭子、尿液、膽汁、分泌物、靜脈導管等標本中分離的金黃色葡萄球菌82株；與住院患者密切接觸的醫護人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫療器械等醫院感染采樣標本中分離的金黃色葡萄球菌39株。

1.2 方法按《全國臨床檢驗操作規程》進行細菌分離和培養。藥物敏感性試驗采用Kirby-Bauer瓊脂擴散法，結果解釋依照美國臨床和實驗室標準化協會（CLSI）2008年標準。

1.3 MRSA檢測頭孢西丁紙片擴散法：在MHA平皿上接種0.5麥氏濁度的細菌懸液，貼30μg頭孢西丁藥敏紙片，35℃培養24h，判斷結果。抑菌圈直徑小于或等于19mm為陽性。質控菌株采用金黃色葡萄球菌ATCC 25923。確認試驗：采用PCR擴增nuc基因和mecA基因，以279bp及310bp處有擴增條帶判為MRSA。具體方法見文獻［4］。

1.4 隨機引物DNA擴增多態性（RAPD）技術采用ERIC-2引物：5′-AAG TAA GTG ACT GGG GTG AGC G-3′［5］（日本TaKaRa生物技術有限公司合成）。擴增體系：在25μL體系中，10×緩沖液（含Mg2+）2.5μL、dNTP混合液各0.2mmol／L、引物各20pmol、TaqDNA聚合酶2U、模板DNA 3μL。擴增條件：94℃預變性5min；94℃1min，35℃1min，72℃2min，循環40次；72℃終延伸10min。15g／L瓊脂糖凝膠電泳分離，0.5μg／mL溴乙啶染色，紫外線觀察。

1.5 統計學處理用WHONET 5.3進行數據處理，用統計軟件SPSS 10.0進行統計分析。采用χ2檢驗進行統計學分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 分布情況檢出金黃色葡萄球菌121株，臨床科室分布以呼吸科、泌尿外科、普外科為主。臨床標本以呼吸道標本中分離率最高。MRSA檢出率65.29%（79／121）。院感監測陽性標本主要來自與患者密切接觸過的醫護人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫療器械等。見表1、2。

表1 MRSA在臨床標本中的分布［n（%）］

表2 MRSA在醫院感染采樣標本中的分布

2.2 耐藥性監測分離的121株金黃色葡萄球菌除對萬古霉素、替考拉寧100%敏感外，對其他14種常用抗菌藥物表現為不同程度耐藥，耐藥率由高到低依次為氨芐西林、紅霉素、阿奇霉素、諾氟沙星、環丙沙星、克林霉素、丁胺卡那、四環素、氯霉素、氧氟沙星、復方磺胺甲噁唑、米諾環素、利福平、莫匹羅星，且耐藥率呈逐年上升趨勢，見圖1。MRSA呈多重耐藥性，且MRSA耐藥率明顯大于甲氧西林敏感金黃色葡萄球菌（MSSA），差異有統計學差異（P＜0.05）。

圖1 2006～2012年院內感染121株金黃色葡萄球菌對14種抗菌藥物耐藥率曲線

2.3 RAPD同源性分析對同一病區或同一時期從患者標本及院感監測標本中分離出的21株金黃色葡萄球菌，采用RAPD技術進行基因同源性分析，擴增圖譜見圖2。共分為個型，其中同源性較高的有：Ⅰ型（菌株號為1、6）；Ⅱ型（菌株號為2、3、4、5）；Ⅲ型（菌株號為7、8）；Ⅳ型（菌株號為9、10）；Ⅴ型（菌株號為11、12、17、20）；Ⅵ型（菌株號為13、14、18）；Ⅶ型（菌株號為15、16）；Ⅷ型（菌株號為19、21）。與患者接觸后的醫護人員手、物體表面及醫療器械等是引起金黃色葡萄球菌醫院內傳播的主要原因。

圖2 21株院內感染金黃色葡萄球菌RAPD分型結果

3 討 論

本研究發現，金黃色葡萄球菌引起的院內感染以呼吸科、泌尿外科、普外科患者為主，以呼吸道標本中分離率最高；對萬古霉素、替考拉寧以外的其他14種抗菌藥物表現為不同程度耐藥，且耐藥率呈逐年上升趨勢；MRSA檢出率為65.29%（79／121），呈多重耐藥性。同源性分析發現，院感監測陽性標本主要來自與患者密切接觸過的醫護人員手以及患者使用過的床單、床頭柜、門把手和醫療器械等。患者-醫護人員-醫療器械間的交叉感染，是引起金黃色葡萄球菌醫院內傳播的主要原因。

由醫務人員手導致的院內感染不容忽視［6］。目前主要存在以下幾個方面的問題：（1）醫務人員手衛生依從性低，是制約手衛生規范化管理的關鍵問題所在［7］。因此，要提高手衛生的效果，必須采取有效措施，強化醫務人員手衛生意識。（2）醫院應加強手衛生規范的宣傳和培訓，不斷提高醫務人員對手衛生重要性的認知度。（3）醫院應不斷完善手衛生設施，使醫務人員做到洗手高效、方便易行。（4）積極推廣使用速干型手消毒劑，達到快速、高效的殺菌效果，有利于提高工作效率［8］。

同時，醫院應嚴格控制抗菌藥物的使用，執行消毒隔離措施，加強醫療器械的使用和消毒管理，方可有效控制醫院內感染發生。

［1］馬鳳玲.耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的醫院感染及耐藥性分析［J］.廣西醫科大學學報，2008，25（6）：930-931.

［2］劉惠容，林定忠.臨床標本耐甲氧西林金黃色葡萄球菌分布及藥敏分析［J］.中國當代醫藥，2011，18（10）：70-71.

［3］郭愛玲，謝躋，粟婉媛，等.隨機擴增多態性DNA技術在沙門氏菌同源性分析中的應用［J］.食品科學，2008，29（4）：355-357.

［4］吳曉紅，王震.多重PCR快速檢測耐甲氧西林金黃色葡萄球菌［J］.疑難病雜志，2010，9（11）：851-853.

［5］王震，周麗萍，莊建偉，等.大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌耐藥基因分析［J］.中國公共衛生，2008，24（7）：818-820.

［6］李瑜珍，謝懿，何緒屏.醫務人員手耐甲氧西林葡萄球菌攜帶調查及藥敏分析［J］.中國感染控制雜志，2008，7（6）：416-418.

［7］孔慶芳，程科萍，葉南圓.醫務人員手衛生知識及其依從性調查分析［J］.現代醫學，2009，37（3）：246-248.

［8］夏玉珍，王春梅.速干手消毒劑與六步洗手法在臨床應用中的探討［J］.臨床護理雜志，2010，9（4）：74-75.