奧林巴斯AU5400檢測血清抗鏈球菌溶血素O的測量范圍評價

張淑瓊，王 凡（.云南省昆明市第三人民醫院檢驗科 65004；.云南省第一人民醫院檢驗科，昆明 65003）

抗鏈球菌溶血素O（ASO）是化膿性鏈球菌細胞外產物的特異性抗體。ASO主要用于鏈球菌感染引起的扁桃體炎、急性腎小球腎炎、活動性風濕熱、風濕性心肌炎、皮膚及軟組織等的感染診斷和監控［1］。評價分析測量范圍有助于發現方法學原理、儀器、校準品、試劑、操作程序、質量控制計劃等很多方面的誤差來源，是一個很重要的儀器性能指標［2］。作者參照美國臨床和實驗室標準化協會（CLSI）的EP6-A文件指南，用奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀對血清ASO檢測系統的測量范圍進行評價。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀；試劑：德賽診斷系統（上海）試劑盒，批號為17648校準品批號為16693；質控品為美國BIO-RAD，批號為54551、54553。

1.2 樣本根據EP6-A指南推薦選擇高值和低值樣本各一份。

1.3 方法收集高值（H）和低值（L）的患者樣本血清，要求高值樣本超過廠家提供的線性范圍。按1L+0H、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、0L+1H配制方法，制成6個不同濃度的系列評價標本，在奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀上測定ASO，每個樣本按隨機方式重復測定3次，在1d內完成。將ASO濃度為841IU／mL的血清分別作2～160倍稀釋，檢測結果與稀釋后的預期值比較，計算回收率，確定最大稀釋度。

2 結 果

2.1 ASO測量值與預期值結果將配制好的不同濃度系列樣本進行檢測，結果見表1。

表1 ASO測量值與預期值結果（IU／mL）

將預期值為X，測量均值為Y，作散點圖，目測呈一條直線關系，在Microsoft Excel 2000作直線回歸，預期值與測量均值的散點圖見圖1。

圖1 ASO預期值與測量均值散點圖

從上述直線回歸結果得知，r2=0.998 7，說明組成回歸線的所有數據點緊密貼近回歸線，預期值與測量值之間相關性極好；斜率b1=0.984，在0.97～1.03，從經驗上判斷，斜率與1之間無差異；截距b0=7.45，與分析測量范圍的上限1 200IU／mL相比值很小，作截距與0差異的t檢驗，差異有統計學意義（P＜0.05），說明截距是由統計引入的，實際的標準曲線能通過原點。從上述結果說明，該方法在實驗所涉及的濃度范圍7～1 094IU／mL呈線性。

表2 ASO稀釋回收率測定結果（IU／mL）

2.2 ASO臨床可報告范圍驗證將ASO濃度為841IU／mL的樣本分別進行2、10、20、40、80、160倍稀釋，每個稀釋樣本重復測定2次，計算稀釋回收率。按儀器說明書要求，回收率在90.0%～110.0%結果時為可接受。稀釋回收率=（測定值／預期值）×100%。見表2。從表2結果可看出，隨著標本稀釋倍數的增加，回收率逐漸增高，當稀釋倍數大于或等于1∶80時，標本回收率大于110.0%，超過可接受范圍。因此，當患者樣本超過線性范圍時，必須稀釋重做，但最大稀釋度不宜超過40倍，標本稀釋后的測定值必須大于21IU／mL，否則結果不可靠。即AMR（分析測量范圍）上限乘以最大稀釋度即為CRR（臨床可報告范圍）上限（1 094.1IU／mL×40=43 764IU／mL），結合試劑說明書靈敏度為7IU／mL，故本檢測系統測定ASO的臨床可報告范圍為7～43 764IU／mL。

3 討 論

分析測量范圍即定量檢測項目的線性檢測范圍，是反映分析方法性能的重要指標，也是保證臨床檢測結果準確性的重要砝碼。分析測量范圍的建立有助于獲得準確可靠的檢測結果，在日常檢測過程中，標本真實濃度只有在分析測量范圍內才能保證其檢測結果的可靠性，否則可能會造成檢測結果的假性偏高或偏低［3］。對于CRR大于AMR的檢驗項目，需進行最大稀釋度驗證實驗，并結合臨床決定水平和功能靈敏度來共同確定該項目的CRR。

分析用于驗證的材料必須具有該方法的基質效應［4］。本研究首先通過一系列濃度的血清驗證ASO測量的線性范圍，避免基質效應的影響，然后通過倍比稀釋實驗確定ASO的臨床可報告范圍。從表1結果可看出，ASO的測量均值與預期值成很好的線性關系：Y=0.984 2 X+7.458 1，r2=0.998 7，驗證后說明奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀測定ASO在7～1 094IU／mL線性良好，超出了試劑說明書規定的（7～800 IU／mL）范圍。在實際工作中，仍應按照試劑說明書規定的線性為準，對于超出試劑說明書規定的線性范圍的患者樣本，作者建議稀釋后重測。表2結果顯示，對于倍比稀釋血清，隨著稀釋倍數的增加，回收率逐漸增高，當稀釋至1∶80倍時，回收率為122.9%，已經高于110.0%，結果不可靠。這可能是基質效應的影響，當稀釋倍數不斷增加，反應環境已發生較大變化。當患者標本ASO測定值超過最大線性范圍時，必須稀釋重做，但最大稀釋度不宜超過40倍，即奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀檢測ASO的臨床可報告范圍為7～43 764IU／mL。

綜上所述，對于超過線性范圍的患者樣本，稀釋程序非常關鍵，為確保檢測結果的準確性，建議臨床實驗室在編寫標準化操作規程時，有必要規范樣本稀釋操作程序，為實驗室提供進一步的質量保證，更好地為臨床提供更準確的檢測結果。

［1］陳文彬，潘祥林，康熙熊，等.診斷學［M］.6版.北京：人民衛生出版社，2004：482.

［2］楊有業，張秀明.臨床檢驗方法學評價［M］.北京：人民衛生出版社，2008：168-195.

［3］潘錫龍.血清肌酸激酶活性檢測的分析測量范圍建立與評價［J］.檢驗醫學與臨床，2013，10（2）：167-168.

［4］潘超，王文龍，張國偉.定量檢測中分析測量范圍的驗證［J］.檢驗醫學，2010，25（4）：303.