性激素受體和人類表皮生長(zhǎng)因子受體2在乳腺癌原發(fā)灶與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)研究

秦 麗，王俊杰，樊慧杰，劉法文，孫獻(xiàn)甫，王承正（.鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺科，河南鄭州450008；.河南省新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 45000；.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南鄭州 450008）

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。據(jù)Siegel等［1］報(bào)道，2012年美國(guó)女性新增乳腺癌患者數(shù)量高居各種女性腫瘤之首，而乳腺癌死亡人數(shù)也僅次于肺癌［1］。目前，國(guó)內(nèi)乳腺癌發(fā)病率逐年升高，在某些大中城市中已位居女性惡性腫瘤發(fā)病率之首。作為一種激素依賴性腫瘤，乳腺癌患者的激素受體表達(dá)情況是影響患者預(yù)后的重要因素。有研究表明乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展與多種生物標(biāo)記物，尤其是雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）和人類表皮生長(zhǎng)因子受體-2（HER-2）等蛋白的異常表達(dá)有關(guān)，檢測(cè)這些蛋白的表達(dá)情況可為臨床評(píng)價(jià)乳腺癌治療提供重要參考。因此，本研究采用免疫組織化學(xué)法對(duì)鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的72例患者ER、PR和HER-2在原發(fā)灶及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料選擇2010年1月至2012年12月鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院行手術(shù)治療的女性乳腺癌患者72例，年齡25～67歲，中位年齡43歲。入組標(biāo)準(zhǔn)：初治單側(cè)乳腺癌同期腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移手術(shù)治療患者；術(shù)前未接受化療、放療或性激素類藥物等治療。術(shù)后經(jīng)病理學(xué)檢查確診為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌49例，小葉癌18例，髓樣癌3例，硬癌2例；腫瘤分期Ⅱ期39例，Ⅲ期33例；均伴同側(cè)腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。取術(shù)中切除的乳腺癌組織及腋窩淋巴結(jié)標(biāo)本用10%甲醛溶液固定，進(jìn)行連續(xù)4μm石蠟切片，然后進(jìn)行HE及免疫組織化學(xué)染色，保存待測(cè)。

1.2 免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果判斷抗ER、PR和HER-2單克隆抗體，免疫組織化學(xué)試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。ER、PR和HER-2蛋白采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)。標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4μm切片，脫臘，3%雙氧水阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，抗原微波修復(fù)，非免疫羊血清封閉，加一抗，濕盒中4℃過夜，再加二抗，加辣根過氧化物酶，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，復(fù)染，脫水，封片。用已知ER、PR和HER-2蛋白陽性標(biāo)本切片作陽性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液（PBS）作陰性對(duì)照。判斷標(biāo)準(zhǔn)：ER和PR蛋白以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒判斷為陽性，HER-2蛋白以細(xì)胞核內(nèi)或胞核與胞質(zhì)同時(shí)出現(xiàn)棕黃色顆粒判斷為陽性。每例切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，計(jì)算陽性細(xì)胞所占比例。每張切片由兩名醫(yī)生雙盲觀察，計(jì)算視野陽性細(xì)胞占全部細(xì)胞的比例，0%為陰性（-），0%～25%為弱陽性（+），＞25%～50%為陽性（++），大于50%為強(qiáng)陽性（+++）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ER、PR和HER-2在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)72例乳腺癌組織中原發(fā)灶ER陽性者51例（70.8%），腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶陽性46例（63.9%），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳腺癌原發(fā)灶中PR陽性者40例（55.6%），腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶PR陽性38例（52.8%），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳腺癌原發(fā)灶中HER-2陽性者51例（70.8%），腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中HER-2陽性者53例（73.6%），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見圖1。

圖1 乳腺癌原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中ER、PR、HER-2的表達(dá)（×400）

2.2 ER、PR和HER-2表達(dá)情況與腫瘤分期的關(guān)系原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中ER、PR在不同分期腫瘤之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而HER-2在Ⅲ期乳腺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)明顯高于Ⅱ期乳腺癌原發(fā)灶，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），具體見表1。

2.3 ER、PR、HER-2表達(dá)與病理類型的關(guān)系在本研究中，導(dǎo)管癌患者共49例，小葉癌患者18例，髓樣癌患者3例，硬癌患者2例。對(duì)導(dǎo)管癌和小葉癌進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，ER、PR、HER-2在不同病理類型中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

表1 ER、PR、HER-2的表達(dá)與腫瘤分期的關(guān)系［n（%）］

表2 ER、PR、HER-2的表達(dá)與病理類型的關(guān)系［n（%）］

3 討 論

乳腺癌是一種激素依賴性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展受體內(nèi)激素水平的影響。研究表明ER、PR在乳腺癌腫瘤組織的形成、發(fā)展過程中起著極為關(guān)鍵的作用，乳腺癌的分子亞型與預(yù)后密切相關(guān)，不同分子亞型的預(yù)后存在明顯差異。ER和PR受體對(duì)指導(dǎo)乳腺癌治療具有極高的價(jià)值，ER陽性的乳腺癌，特別是ER和PR均陽性者，內(nèi)分泌治療效果好。調(diào)控作用通過雌、孕激素與細(xì)胞上相應(yīng)受體ER和PR結(jié)合而發(fā)揮作用，但研究表明乳腺癌細(xì)胞ER、PR陽性率一般在50%～70%。HER-2是預(yù)測(cè)乳腺癌預(yù)后的重要分子，其表達(dá)水平與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有密切的關(guān)系［2］。研究發(fā)現(xiàn)HER-2基因在20%～30%的乳腺癌中過表達(dá)，這提示患者復(fù)發(fā)率高、轉(zhuǎn)移發(fā)生早且生存期短、病情重、預(yù)后差［3］。腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移是乳腺癌死亡的主要原因，雖然經(jīng)過治療但仍有25%～30%的乳腺癌患者可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移［4］。乳腺癌ER和PR表達(dá)陰性者的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移概率高，其中骨轉(zhuǎn)移和腦轉(zhuǎn)移發(fā)生率高，預(yù)后差。原發(fā)腫瘤激素受體陽性預(yù)后較好，3陰性乳腺癌患者的預(yù)后最差［5］。

近年來研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌原發(fā)灶同轉(zhuǎn)移灶間ER、PR和HER-2受體的表達(dá)并非都一致，因此對(duì)原發(fā)及轉(zhuǎn)移灶的腫瘤組織進(jìn)行激素受體的檢測(cè)對(duì)于治療極為重要。本研究對(duì)鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院收治的部分乳腺癌患者原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶中的ER、PR和HER-2的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)，并探討其與腫瘤分期、腫瘤病理分型之間的關(guān)系。研究結(jié)果顯示，ER、PR和HER-2在乳腺癌原發(fā)灶中的陽性表達(dá)率分別為70.8%、55.6%、70.8%，而轉(zhuǎn)移灶中3者陽性表達(dá)率為63.9%、52.8%、73.6%。而且原發(fā)灶為陽性的患者，轉(zhuǎn)移灶多為陽性，但二者陽性表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與相關(guān)研究結(jié)果一致［6］。本研究中HER-2陽性表達(dá)率較高，與秦洪真等［7］報(bào)告一致。在Ⅱ期乳腺癌原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶與Ⅲ期乳腺癌原發(fā)灶、轉(zhuǎn)移灶相比，ER、PR陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與Lower等［8］的研究相符。Ⅲ期乳腺癌HER-2陽性率要明顯高于Ⅱ期，表明HER-2的陽性表達(dá)可能與臨床分期相關(guān)。而在導(dǎo)管癌與小葉癌中，ER、PR和HER-2的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明其與臨床病理分型無明顯關(guān)系。本研究也未發(fā)現(xiàn)乳腺癌ER、PR蛋白表達(dá)與HER-2蛋白表達(dá)之間存在明顯的相關(guān)關(guān)系，表明乳腺癌ER、PR蛋白與HER-2蛋白表達(dá)異常是各自獨(dú)立的分子事件。

乳腺癌患者的激素受體表達(dá)狀況是影響患者預(yù)后的重要因素，也是內(nèi)分泌治療的重要指標(biāo)。乳腺癌原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶中的ER、PR和HER-2檢測(cè)對(duì)于指導(dǎo)臨床治療、預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)及預(yù)后具有十分重要的意義。對(duì)ER和（或）PR陽性的乳腺癌患者，不論年齡、腫瘤大小及區(qū)域淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移，術(shù)后都應(yīng)接受輔助內(nèi)分泌治療；但年齡小于35歲，腫瘤直徑小于1cm且分化好，腋窩淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移灶的患者除外［9］。本研究提示HER-2與腫瘤的分期相關(guān)，因此對(duì)于HER-2陽性患者，更應(yīng)及早進(jìn)行治療以改善患者預(yù)后。

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