電離輻射誘導(dǎo)的Rac1蛋白在HL—60細(xì)胞中表達(dá)的變化及其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響

摘要：目的 采用不同劑量的X線照射急性白血病細(xì)胞系HL-60，探究電離輻射后Rac1蛋白在HL-60細(xì)胞中表達(dá)的變化及其對(duì)輻射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響。方法 藻紅B染色觀察細(xì)胞的凋亡，Western blot分析 Rac1蛋白的表達(dá)，免疫熒光檢測Rac1蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布。結(jié)果 2Gy、6Gy、8Gy的X射線照射HL-60細(xì)胞，24h后的細(xì)胞凋亡率分別為11.5%、18.0%、 30.1%。不同劑量的X線照射HL-60細(xì)胞24h后，總的Rac1蛋白表達(dá)未發(fā)生明顯變化，而在細(xì)胞內(nèi)的分布發(fā)生改變，激活的Rac1蛋白在細(xì)胞膜的表達(dá)增加，并且核內(nèi)也發(fā)現(xiàn)了少量的Rac1蛋白。結(jié)論 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜及細(xì)胞核內(nèi)激活的Rac1蛋白參與了輻射誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡的過程。

關(guān)鍵詞：電離輻射；Rac1；凋亡率

Rac1是Rho蛋白家族中的重要一員，也是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)分子，它在腫瘤的形成和發(fā)展中具有一定的作用[1]。Rac1蛋白在胃癌、腦膠質(zhì)瘤、胰腺癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá)[2]。并與腫瘤的分化、預(yù)后密切相關(guān)，它主要通過影響細(xì)胞的凋亡、增殖，細(xì)胞的遷移，細(xì)胞周期進(jìn)展，血管形成等多方面來對(duì)腫瘤起作用[2～4]。本實(shí)驗(yàn)主要研究X線照射后Rac1蛋白在HL-60細(xì)胞中的表達(dá)變化，為輻射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。

1資料與方法

1.1一般資料 急性白血病HL-60細(xì)胞株購自上海中科院細(xì)胞研究所，RPMI一1640培養(yǎng)基為HyClone產(chǎn)品，新生牛血清為Gibco產(chǎn)品，碘化丙啶（PI）購自美國Sigma公司，藻紅B染色購于上海四季青公司，兔抗Rac1（c-14）多克隆抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗、FITC標(biāo)記羊抗兔IgG二抗、兔源性抗人Actin抗體均購自美國Santa Cruz公司，直線加速器購于西門子公司（劑量率200cGy/min）。

1.2細(xì)胞凋亡分析 HL-60細(xì)胞用含有10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)，置于5% CO2 培養(yǎng)箱中?！?br>