貝伐單抗治療穿透性角膜移植術后新生血管對全身的影響

摘要：目的 觀察貝伐單抗用于治療穿透性角膜移植術后新生血管，全身血液中VEGF和免疫功能含量變化。方法 對12例（12眼）穿透性角膜移植術后新生血管增生患眼，球結膜下分別注射貝伐單抗和設立空白對照組，1次/月，共2次。于注藥前1d，后1d，1月分別檢測血液中VEGF和免疫功能的含量。結果 注射貝伐單抗組角膜新生血管面積明顯減小。全身血液中VEGF和免疫功能的含量均無變化。結論 穿透性角膜移植術后球結膜下注射貝伐單抗對全身VEGF含量和免疫功能無影響。

關鍵詞：貝伐單抗；穿透性角膜移植；VEGF；免疫功能

角膜的免疫赦免使角膜移植成功率高居各器官移植成功率之首，但是角膜移植仍會發生排斥反應，而排斥反應最多見的就是角膜新生血管增生（CNV）。穿透性角膜移植術后角膜新生血管破壞角膜的正常微環境，使眼前房相關免疫偏離（ACAID）消失，免疫反應不被赦免，眼發生遲發型超敏反應。所以，角膜移植術后的角膜排斥反應危險性隨角膜新生血管化程度而增加，減少CNV增生從調節ACAID對植片的存活意義重大。研究表明，VEGF是已知促新生血管形成最主要的生長因子之一[1]。尤其在角膜瘢痕組織表達增多[2]。然而目前缺乏一種藥物針對VEGF有效控制。通過研究，逐漸認識體液免疫同樣很重要的[3]。而體液免疫抗體水平的變化是角膜移植術后排斥反應監測的重要內容，可作為術后早期治療及保護植片的監測指標。本實驗在穿透性角膜移植術后新生血管患者球結膜下注射貝伐單抗用于觀察是否能抑制CNV的生長的同時檢測血清中VEGF含量及體液免疫功能中IgG、IgA、IgM、C3和C4含量的變化，可了解該藥物用于穿透性角膜移植后新生血管的同時是否能對全身VEGF和體液免疫功能有所改變。

1 資料和方法

1.1一般資料 選擇我院自2006～2009年患有角膜白斑，經藥物治療后仍影響患者視力，經行穿透性角膜移植術后3個月，發生角膜排斥反應且新生血管增生達Ⅲ度以上患眼對12例（12眼），其中男7例，女5例，年齡20～68歲，平均38歲。患者均有球結膜混合充血，角膜水腫，患眼異物感，畏光，流淚等癥狀，部分患者同時合并有植片的排斥反應出現。

1.2方法

1.2.1所有患者治療前均排除患有全身性疾病，肝腎功能不全等情況，了解藥物治療風險，充分知情的情況下簽有治療同意書，隨機分為兩組，每組6例，于每月球結膜下注射藥物1次，共2次。A組（對照組）：拒絕藥物治療者設為對照組；B組：貝伐單抗（Bevacizumab）2.5mg（0.1ml）球結膜下注射。注藥步驟為同一名醫師按眼科常規手術要求消毒后，愛爾卡因滴眼液表面麻醉術眼，1ml空針28號針頭抽取藥物或注射用水，分別于鼻上，鼻下，顳上，顳下四方位等量均分藥物注射。

1.2.2 ELASA法測定血清中VEGF的含量 采用ELASA法測定血清中VEGF的含量。分別于注藥前1d天，注藥后1、7、14、30、60d采集患者靜脈血液3ml，經離心后提取血清500μl，于-80℃于貯存，采用上海依科賽生物制品有限公司人VEGF ELASA 試劑盒測定血清VEGF含量。

2.2.3檢測血液中免疫功能的含量改變 分別于注藥前1d，注藥后1d，1個月采集患者靜脈血液3ml，分別送檢測定血液中IGA，IGg，IGM，C3，C4含量。

3 結果

3.1癥狀 B組治療后患者眼部充血，畏光，流淚癥狀均有減輕，局部角膜新生血管減少，未見角膜炎癥反應及分泌物增多等炎癥表現。

3.2 ELASA法測定血清中VEGF的含量檢測，A組與B組之間檢查結果經配對t檢驗無統計學意義（P>0.05）。

3.3血液中免疫功能指標IgG，IgA，IgM，C3，C4含量檢測，A組與B組之間檢查結果經配對t檢驗均無統計學意義（P>0.05）。B組之間檢查結果經單因素方差分析亦無統計學意義（P>0.05）。

4 結論

正常角膜可以通過免疫屏障來面對外界刺激。在角膜周圍存在少量的免疫活性細胞， 而角膜基質層中存在一定濃度的Ig，角膜中的主要的Ig是IgG，其次為IgA，兩者的比例為10：1。免疫球蛋白是角膜體液免疫反應的基礎。淚液中免疫球蛋白較強的抗體活性決定了其在免疫防御系統中的重要作用。但由于淚液采集和測定方法不同，正常值變異很大，故臨床通過監測免疫功能血清含量更為普遍且具有一定意義[4]。研究中采用的藥物貝伐單抗（Bevacizumab），又稱Avastin，能通過直接作用于血管內皮細胞抗體，阻止VEGF與內皮細胞表面的受體結合，該藥具有抑制血管通透性增加，細胞外基質變性，血管內皮細胞遷移等作用[5]從而阻止血管滲漏和新生血管的形成 。Kemt等[6]證明Avastin對眼睛前后節都沒有毒副作用。

實驗中，于球結膜下注射貝伐單抗后，觀察到角膜新生血管有所減退，部分角膜排斥患者排斥反應減輕，藥物治療能明顯抑制CNV。同時經檢測血液中VEGF和IgG，IgA，IgM，C3和C4的含量無明顯改變，考慮該藥物在減少新生血管的同時，對全身血液中血管內皮生長因子水平及免疫水平無明顯影響，但臨床觀察到伴隨CNV減少的同時，眼部植片的排斥反應確有減輕，是否僅對局部的免疫反應有影響，還需進一步有針對性的研究，從而了解該藥物在抑制新生血管同時是否有重建眼前房相關免疫偏離（ACAID）的作用，為避免角膜移植術后免疫反應的加重及角膜植片排斥率的增加而找到一種有效控制角膜移植術后CNV和減輕排斥反應的藥物。

參考文獻：

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[4]楊朝忠，耿燕，姚曉明.眼表移植學[M].北京：軍事醫學科學出版社，2008：115-263.

[5]金有豫.藥理學[M].5版.北京：人民衛生出版社，2001.

[6]袁中芳，魏增濤，王曉燕.重組內皮抑素抑制兔角膜新生血管的實驗研究[J].山東大學耳鼻喉眼學報，2006.編輯/蘇小梅