醒酒益肝顆粒處方工藝及質量標準

鄭 飛， 戴雨霖， 王一博， 李曉宇， 越 皓， 劉淑瑩，2*

（1.長春中醫藥大學吉林省人參科學研究院，吉林 長春130117；2.中國科學院長春應用化學研究所，吉林長春130022）

醒酒益肝顆粒處方工藝及質量標準

鄭 飛1， 戴雨霖1， 王一博1， 李曉宇1， 越 皓1， 劉淑瑩1，2*

（1.長春中醫藥大學吉林省人參科學研究院，吉林 長春130117；2.中國科學院長春應用化學研究所，吉林長春130022）

目的優選醒酒益肝顆粒 （人參與葛花）的處方與制備工藝并建立質量標準。方法采用濕法制粒技術，通過單因素試驗優選處方工藝；采用薄層色譜法對葛花及人參進行薄層鑒別，采用高效液相色譜法測定鳶尾苷的含有量。結果最佳處方工藝為藥材提取物-可溶性淀粉-乳糖 （2∶2∶1），潤濕劑為70%乙醇；薄層鑒別斑點清晰，陰性無干擾；鳶尾苷在0.140 0～0.420 1mg/mL范圍內呈良好線性關系，平均回收率為100.19%。結論顆粒劑的處方工藝合理可行，所建立的質量控制方法專屬性強，重復性好，可用于醒酒益肝顆粒的質量控制。

醒酒益肝顆粒；人參；葛花；處方；制備；質量標準

醒酒益肝顆粒由葛花、人參、靈芝等藥材配伍而成，具有疏肝利膽、解酒醒脾之功效［1-3］，對酒精性脂肪肝，化學性肝損傷等具有明顯的保護作用［4-5］。前期試驗中通過RRLC-Q-TOF對葛花與人參配伍物質基礎的研究結果表明，人參與葛花配伍提取，人參可以促進葛花中異黃酮類成分的溶出，同時人參中的人參皂苷含有量比人參單煎液中的含有量有所增加，這為制劑開發提供了基礎理論支撐［6］。為更好地發揮其療效，便于患者攜帶及服用，將其開發為顆粒劑；同時為使其具有良好的顆粒成型性和質量可控性，本實驗在對該制劑的提取工藝及質量評價的前期研究基礎上［7］，對該制劑的處方工藝進行優選，并建立其質量標準。

1 材料

1.1 儀器 BT25S型電子精密天平 （賽多利斯科學儀器北京有限公司）；XMTD-8222型恒溫鼓風干燥箱 （上海精宏實驗設備有限公司）；ZF-20D暗箱式紫外分析儀（上海顧村電光儀器廠）；WP-VP-Ⅲ-40型實驗室專用超純水機 （四川沃特爾科技發展有限公司）；Agi1ent 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫科技有限公司）。

1.2 試藥 藥材干燥提取物粉末 （自制）；鳶尾苷對照品、葛花對照藥材、人參對照藥材 （中國食品藥品檢定研究院，批號：201001、200912、201110）；可溶性淀粉、乳糖均為藥用級；硅膠G、硅膠GF254薄層板；甲醇、乙腈為色譜級。

2 方法與結果

2.1 醒酒益肝顆粒的制備 按處方量稱取人參、葛花等藥材，加相當于8倍藥材量的70%乙醇回流提取2次，每次1 h，120目篩網濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.15（50℃測），備用；醇提藥渣與靈芝等藥材，加8倍于藥材量的水煎煮2次，每次2 h，濾過，合并濾液，濃縮至相對密度為1.10～1.15（50℃測），合并醇提液與水煎液，噴霧得干燥粉末，備用；取處方量干燥粉末及各輔料，過篩，混合，加入適量乙醇制軟材，14目標準篩制粒，50～60℃干燥，整粒［8-9］，即得。

2.2 顆粒的成型率 按照 《中國藥典》2010年版一部附錄IC“顆粒劑制劑通則”項下要求，照粒度測定法 （附錄ⅪB雙篩分法）測定，不能通過一號篩與能通過五號篩的總和，不得過15%。

成型率=（能通過1號篩但不能通過5號篩的顆粒質量/顆?？傎|量）×100%

2.3 顆粒溶化性的測定 按照 《中國藥典》2010年版一部附錄 IC“顆粒劑制劑通則”項下要求，取供試品10 g，加熱水200 mL，攪拌5 min，立即觀察［10］，記錄溶化時間。

2.4 輔料用量的考察［11-12］糖粉、可溶性淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素等為常用輔料，經過預試驗單因素考察結果，確定選用顆粒成型性較好、溶化性合格的可溶性淀粉與乳糖 （2∶1）合用為輔料。取藥材提取物干燥粉末適量，分別加入不同比例的輔料，按 “2.1”項下方法制粒，以顆粒的成型率和溶化性為考核指標，結果見表1，結果表明當藥物與輔料用量比為1∶1.5、1∶2時，顆粒成型率均較高，且溶化性均符合規定，考慮到患者服用量越少越好，最終確定藥物與輔料用量比為1∶1.5，見表1。

表1 輔料用量的篩選Tab.1 Determ ining the consum ption of excipients

2.5 潤濕劑的考察［13-14］中藥浸膏的制粒常選擇乙醇溶液作為潤濕劑，考察不同體積分數的乙醇溶液對顆粒成型率及溶化性的影響。取藥材提取物干燥粉末5份，每份5 g，各加入可溶性淀粉5 g，乳糖2.5 g，分別噴以體積分數為 80%、75%、70%、65%、60%的乙醇溶液制軟材，按 “2.1”項下方法制粒，結果發現60%乙醇和65%乙醇含水量較大，導致制粒困難，顆粒呈長條狀；75%乙醇和80%乙醇制粒較容易，但是制得的顆粒松散，而70%乙醇為潤濕劑制粒，成型性良好，溶化性亦符合規定。因此，確定70%乙醇溶液作為醒酒益肝顆粒的潤濕劑。

2.6 驗證試驗［15］按優選的處方稱取提取物干燥粉末及輔料100 g，共3份，按最佳成型工藝條件制備 3批顆粒，結果成型率分別為 90.0%、92.0%、89.0%，溶化性均符合規定，且工藝穩定，適合工業化生產。故確定最佳處方工藝為藥材提取物-可溶性淀粉-乳糖 （2∶2∶1），采用濕法制粒工藝，以70%乙醇為潤濕劑，制軟材，干燥，整粒。

2.7 臨界相對濕度 （CRH）的測定［16-19］按最佳成型工藝制備醒酒益肝顆粒，取干燥顆粒適量，共7份，裝入已干燥至恒定質量的扁形稱量瓶內，不超過5 mm，準確稱定質量，打開瓶蓋，分別置于盛有不同相對濕度鹽 （RH%）的飽和溶液的玻璃干燥器內，飽和溶液分別為MgC12·6H2O、K2CO3·2H2O、NaBr·2H2O、NaNO2、NaC1、KC1、KNO3，相對濕度分別為 33.00%、43.16%、57.00%、64.00%、75.30%、84.34%、93.58%，25℃放置24 h后準確稱定質量，計算吸濕率。以吸濕率 （%）為縱坐標，相對濕度 （%）為橫坐標作圖，繪制吸濕平衡曲線 （見圖1），曲線兩端切線交點的橫坐標即為其CRH（約70%），故在制備過程中生產車間、分裝車間的相對濕度應控制＜70%。

圖1 醒酒益肝顆粒吸濕曲線Fig.1 Curves for Xingjiu Yigan G ranules moisture absorption

2.8 定性鑒別

2.8.1 葛花［20-21］取本品顆粒4 g，研碎，加甲醇50 mL，超聲30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇10 mL使溶解，作為供試品溶液。另取葛花對照藥材2 g，同法制得對照藥材溶液。取處方中缺葛花的藥材，按制備工藝制成陰性顆粒，按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。照 《中國藥典》薄層色譜法 （附錄W B）項下試驗，吸取上述3種溶液各10μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水 （7∶2.5∶0.15）為展開劑［22-24］，飽和，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視，見圖2。結果表明，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置，顯相同顏色斑點，陰性無干擾。

2.8.2 人參［25-26］取本品顆粒4 g，研碎，加三氯甲烷200 mL，加熱回流1 h，棄去三氯甲烷液，藥渣揮干溶劑，加1 mL水攪拌潤濕，加水飽和正丁醇10 mL，超聲處理30 min，吸取上清液加3倍量氨試液，搖勻，放置分層，取上層液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，即得供試品溶液。同法制成對照藥材溶液；取處方中缺人參的藥材，按制備工藝制成陰性顆粒，按供試品溶液制備方法制成陰性樣品溶液。照 《中國藥典》薄層色譜法 （附錄VIB）試驗，吸取上述溶液各10μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水 （65∶35∶10）放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液［23］，在105℃加熱至斑點顯色清晰，見圖3。結果表明，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置，顯相同顏色斑點，陰性無干擾。

圖2 葛花TLC圖Fig.2 TLC chromatogram of Puerariae Flos

圖3 人參TLC圖Fig.3 TLC chromatogram of Ginseng Radix

2.9 鳶尾苷的測定［27-28］

2.9.1 對照品溶液的制備 取鳶尾苷對照品約7.0 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.9.2 供試品溶液的制備 取自制顆粒約5 g，精密稱定，研細，置50mL量瓶中，加甲醇適量，超聲處理使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，濾過，即得。

2.9.3 陰性空白溶液的制備 按處方取除葛花的藥材，按工藝條件制備成缺葛花的陰性顆粒，按“2.9.2”項下方法制成陰性空白溶液，即得。

2.9.4 色譜條件 Agi1ent Zorbax SB-C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，3.5μm）；柱溫30℃；流動相A為0.1%甲酸-水，B為乙腈，梯度洗脫（0～12 min，15%B；12～18 min，50%B）；體積流量0.4 mL/min；進樣量5μL；檢測波長264 nm。色譜圖見圖4。

圖4 鳶尾苷HPLC色譜圖Fig 4 HPLC chrom atogram s of tectoridin

2.9.5 線性關系考察 精密量取鳶尾苷對照品溶液1、1.5、2、2.5、3 m L，分別置于5 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾；各進樣5μL測定，記錄峰面積，以鳶尾苷對照品質量濃度 （X）對峰面積 （Y）進行線性回歸，得回歸方程為Y=1 899.9X-46.6，r=0.999 8，鳶尾苷在0.140 0～0.420 1 mg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.9.6 中間精密度試驗 分別取兩批平行樣品3份，共6份，按 “2.9.2”項下制備供試品溶液，測定峰面積，計算，結果鳶尾苷的RSD為1.37%，表明儀器精密度良好。

2.9.7 重復性試驗 取同一批樣品6份，按“2.9.2.”項下制備供試品溶液，測定峰面積，結果鳶尾苷的RSD為0.84%，表明測定方法重復性良好。

2.9.8 穩定性試驗 在本實驗條件下，取供試品溶液分別在室溫放置0、2、4、8、10、12 h，測定峰面積，結果鳶尾苷的RSD為0.94%，表明供試品溶液至少在12 h內穩定。

2.9.9 回收率試驗 精密吸取已知含有量的供試品6份，分別精密加入0.188 mg/mL的鳶尾苷對照品溶液0.2 mL，按 “2.9.2”項下制備供試品溶液，測定峰面積，計算回收率，結果見表2，平均回收率為99.94%，表明此方法可行。

表2 鳶尾苷的加樣回收率試驗結果 （n=6）Tab 2 Resu lts of recovery tests for tectoridin（n=6）

2.9.10 樣品測定 取3批自制顆粒各5 g，按“2.9.2”項下制備供試品溶液，測定峰面積，計算樣品中鳶尾苷的量，結果見表3?？紤]工業化實際生產的因素，在平均含有量的基礎上下調20%［17］，即醒酒益肝顆粒中鳶尾苷含有量不得少于2.67 mg/g。

表3 醒酒益肝顆粒中鳶尾苷測定結果Tab.3 Evaluation of tectoridin content in Xingjiu Yigan G ranules

3 討論

在預實驗制粒過程中發現，藥材提取物粉末中含糖量較高、吸濕性較強、易結塊，因此，輔料的種類、用量及潤濕劑對顆粒的成型率及溶化性有較大影響，故選擇成型性和溶化性為考察指標，對輔料及用量、潤濕劑進行優選。預實驗中分別考察糖粉、可溶性淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素等常用輔料，結果發現單一使用一種輔料制粒時，其成型率均較低，或制粒時黏性較強，易粘篩網。故在單一輔料篩選的基礎上，進一步考察同時使用兩種輔料對成型率、溶化性的影響，最終確定選用可溶性淀粉及乳糖。

葛花的薄層鑒別中主要鑒別的成分為異黃酮類成分，在查閱相關文獻的基礎上，對展開劑進行考察［三氯甲烷-甲醇-水 （7∶2.5∶2.5）、三氯甲烷-甲醇-水 （7∶2.5∶1.5）、三氯甲烷-甲醇-水（7∶2.5∶0.5）等］，結果三氯甲烷-甲醇-水（7∶2.5∶1.5）所得到的薄層色譜圖斑點清晰可見，且Rf值適中。因此，選擇三氯甲烷-甲醇-水（7∶2.5∶1.5）為展開劑。人參的薄層鑒別中主要鑒別成分為皂苷類成分，其前處理方法主要目的是分離純化得到人參皂苷類成分，在參考 《中國藥典》和查閱相關文獻的基礎上，對展開劑進行考察［三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水 （15∶40∶22∶10）、三氯甲烷-甲醇-水 （65∶35∶10），結果三氯甲烷-甲醇-水 （65∶35∶10）］所得到的薄層色譜圖斑點清晰可見，且Rf值適中。因此，選擇三氯甲烷-甲醇-水 （65∶35∶10）為展開劑。

葛花的主要化學成分有異黃酮類、皂苷類、揮發油類、甾醇類、生物堿和氨基酸等。其有效活性成分主要為異黃酮類及皂苷類且以異黃酮類成分的含量最高。異黃酮類成分中主要含有鳶尾苷、葛花苷、尼泊爾鳶尾素等，其中鳶尾苷相對含有量較高，且查閱相關文獻報道鳶尾苷較葛花苷穩定［29-30］，故選擇鳶尾苷作為定量測定的指標。前期試驗中通過RRLC-Q-TOF對葛花化學成分及與人參配伍過程中各化學成分的變化進行研究，同時定量分析異黃酮類及人參皂苷類成分，故液相條件中流動相選擇梯度洗脫。

中藥水提物中糖類成分較多，制得顆粒后易吸濕而粘連。因此需要控制顆粒生產、分裝、儲存、運輸時的環境濕度。本品的臨界相對濕度為70%，在生產上易控制。

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Preparation and quality standard of Xingjiu Yigan Granules

ZHENG Fei1， DAIYu-1in1， WANG Yi-bo1， LIXiao-yu1， YUE Hao1， LIU Shu-ying1，2*

1.Jilin Ginseng Academy，Changchun University of ChineseMedicine，Changchun 130117，China；2.Changchun Instituteof Applied Chemistry，Chinese Academy of Sciences，Changchun 130022，China）

Xingjiu Yigan Granu1es；Ginseng Radix；Puerariae Flos；prescription；preparation；qua1ity standard

R944

A

1001-1528（2015）08-1708-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.016

2014-09-08

國家科技支撐計劃 （2011BAI03B00）

鄭 飛 （1987—），女，碩士，研究實習員，主要從事新劑型新技術研究與新產品開發。Te1：18686680346，E-mai1：zhengfei-1986@126.com

*通信作者：劉淑瑩（1943—），女，博士，研究員，從事中藥化學和有機質譜學研究。E-mai1：sy1iu@ciac.j1.cn