HPLC法快速篩查中成藥中三七/人參莖葉代替根和根莖

費毅琴， 楊 萍， 肖 凌， 侯俊杰， 聶 晶

（湖北省食品藥品監督檢驗研究院，湖北武漢430064）

HPLC法快速篩查中成藥中三七/人參莖葉代替根和根莖

費毅琴， 楊 萍， 肖 凌， 侯俊杰， 聶 晶

（湖北省食品藥品監督檢驗研究院，湖北武漢430064）

目的建立HPLC法快速篩查中成藥中以三七/人參莖葉代替根和根莖投料。方法采用HPLC法對含三七/人參的復方丹參片、三七片/膠囊、參苓白術散進行篩查，檢測其中的人參皂苷Rb3，Rg1和Re，色譜柱為Agi1ent E-c1ipse P1us C18（5μm，4.6mm×250mm），流動相為乙腈-水梯度洗脫，體積流量為1.0mL/min，檢測波長為203 nm。結果若檢出人參皂苷Rb3，則為三七莖葉投料；若人參皂苷Rg1/Re比值小于5，則為人參莖葉投料。復方丹參片存在以三七/人參莖葉非法投料的現象。結論本法較原補充檢驗中TLC法準確度高，不存在假陽性的干擾。

三七；人參；莖葉；根和根莖；HPLC；快速篩查；中成藥

三七功效散瘀止血、消腫定痛［1］，人參功效生津養血、安神益智等［1］，在許多中成藥中作為君藥或臣藥使用。但近年來，在國家評價抽驗監管過程中，浙江省藥檢所、北京市藥檢所、湖北省藥檢院均發現中成藥中存在以人參/三七莖葉代替人參、三七根和根莖投料的現象。早在2008年，國家局頒布了復方丹參片藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件［2］，設有三七莖葉皂苷的薄層檢查項，可對該品種的三七投料進行控制。黃捷等用高效液相色譜法對建立的薄層色譜法鑒別復方丹參片中添加三七莖葉進行了驗證，結果高效、準確［3］。但目前僅有針對單品種的檢測方法，尚無直接針對人參/三七莖葉投料的通用檢測方法。本實驗針對這一監管問題，建立HPLC法快速鑒別非法添加人參/三七莖葉中成藥的通用檢測方法，并篩查了部分品種。該法簡便、準確，可應用于含三七、人參的中成藥的快速篩查。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 DIONEX 3000高效液相色譜系統；MS204S/Z、AG135電子天平 （梅特勒-托利多儀器上海有限公司），LC-350A型超聲液中藥處理機（濟寧市中區魯超儀器廠）。

1.2 試藥 人參莖葉皂苷 （111553-200201）、三七莖葉皂苷 （110871-200201）、三七皂苷R1（110745-200517）、人參皂苷 Rg1（110703-200322）、Rb1（110704-200420）、 Rb3 （111686-200501）、 Re（110754-201123）、Rd（111818-201001）均購自中國食品藥品檢定研究院。復方丹參片、三七片/膠囊、參苓白術散均為國家評價抽驗或省抽驗樣品；甲醇、乙腈為色譜純 （TEDIA公司），實驗用水為Mi11i-Q系統制備，磷酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件及系統適用性實驗 Agi1ent Ec1ipse P1us C18色譜柱（5μm，4.6 mm×250 mm）；流動相為乙腈-水，梯度洗脫 （乙腈體積分數在0～5 min為19%，5～30 min為19%～20%，30～31min為20%，31～71 min為20%～40%）；體積流量1.0 mL/min；檢測波長203 nm；進樣量10 μL。理論板數按人參皂苷Rg1峰計算不低于2 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 取人參皂苷Rb3對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.4 mg的溶液；再取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含人參皂苷Rg10.2 mg、人參皂苷Re 0.05 mg的混合溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取固體制劑10倍最小單位量，研碎并混勻，加入甲醇25 mL，密塞，超聲處理 （功率500 W，頻率40 kHz）30 min，濾過，濾液作為供試品溶液。

2.2.3 模擬復方丹參制劑樣品的制備 取處方中藥材，按工藝制成模擬復方丹參制劑樣品。

2.3 方法驗證

2.3.1 專屬性試驗 取模擬標準工藝的復方丹參制劑樣品，按 “2.2.2”項下提取，進樣，即為正常復方丹參制劑供試品色譜圖，通過比較模擬復方丹參制劑圖 （圖1A）、三七莖葉投料的復方丹參樣品圖 （圖1D）和人參莖葉投料的復方丹參樣品圖 （圖1F），可得出該法不存在假陽性的干擾。

2.3.2 耐用性試驗 取同一供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件，用Agi1ent Ec1ipse P1us C18（5μm，4.6 mm×250 mm）、Phenomenex Gemini-C18（5μm，4.6 mm×250 mm））、U1timate XB-SCX（5μm，4.6mm×250mm）三種色譜柱試驗，結果一致。

2.3.3 判定結果 供試品色譜圖中若檢出人參皂苷Rb3，則為三七莖葉投料 （圖1D）；若人參皂苷Rg1/Re比值小于5，則為人參莖葉投料 （圖1G）。

2.4 樣品檢測 按照上述建立的方法對涉及三七、人參投料的3個中成藥品種共計50批樣品進行實驗，結果見表1。

表1 測定結果Tab.1 Results of detection

3 討論

周家明、黃躍進等對三七莖葉開發利用［4-8］中指出，三七莖葉的活性成分與三七相似，且對血液心血管等系統作用與三七根皂苷相似。但兩者價格可能達到近10倍的差異。部分生產企業受利益驅使，又對自身產品質量的重視程度不夠，基于成本，采用質量較差的原料，甚至有目的地故意減少三七或人參投藥量，使成分含有量剛好達到法定標準的限度要求，或添加不同藥用部位、同科植物以降低生產成本，以次充好。這種現象時有發生。

圖1 參照物和樣品的HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chrom atogram s of reference substances and sam p les

對復方丹參片中檢出三七莖葉的樣品，按補充檢驗方法［3］檢驗，結果與液相方法一致，見圖2。本實驗建立的HPLC快速鑒別非法添加三七/人參莖葉的中成藥，較原補充檢驗中TLC法，準確度高，不存在假陽性的干擾，建議將此通用型檢測方法納入補充檢驗方法。

筆者僅對3個中成藥品種進行檢測，從檢測結果可看出，復方丹參片存在以三七/人參莖葉非法投料的現象，而在三七片/膠囊、參苓白術散兩個品種尚未發現，其他三七、人參投料的中成藥品種是否存在此問題，值得繼續關注。

在分離人參皂苷時，參考文獻［9-14］考察乙腈-水、甲醇-水多種比例梯度洗脫，最終選擇 “2.1”項的比例，能使人參皂苷Rg1、Re和Rb3達到理想的分離效果。

圖2 三七莖葉皂苷TLC圖Fig.2 TLC for notoginseng leaf triterpenes

參考文獻：

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：8-11.

［2］國家食品藥品監督管理局稽查局，國家食品藥品監督管理局藥品市場監督辦公室.藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件匯編 （2003—2008年）［S］.2008：187-189.

［3］黃 捷，覃紅萍.復方丹參片中非法添加的三七莖葉的檢測［J］.中國藥業，2011，20（14）：32-33.

［4］黃躍進.三七傳統非藥用部位的開發探討［J］.中醫藥信息，1999（6）：19.

［5］周家明，崔秀明，曾鴻超，等.三七莖葉的綜合開發利用［J］.現代中藥研究與實踐，2009，23（3）：32-33.

［6］魏均嫻，唐寶書，王菊芳，等.三七葉皂苷成分的研究［J］.華西藥學雜志，1986，1（1）：7.

［7］黃 鳳，向飛軍，伍杰雄.三七葉皂苷成分及其單體提取分離進展［J］.中藥材，2009，32（6）：999-1005.

［8］李珂珂，楊秀偉.人參莖葉化學成分的研究進展［J］.中國現代中藥，2012，14（1）：47-50.

［9］馮 中，李曉燕，劉 波，等.HPLC法測定不同廠家復方丹參片中三七皂苷R1和人參皂苷Re、Rg1、Rb1含量［J］.中成藥，2009，31（1）：71-74.

［10］程 靜，梅 群，何繼祥，等.HPLC梯度洗脫法同時測定紫丹活血片中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量［J］.中成藥，2008，30（6）：864-867.

［11］劉燦仿，汶耀琴，王 弘，等.RP-HPLC梯度洗脫法測定心腦貫通滴丸中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及人參皂苷Rb1的含量［J］.中成藥，2007，29（8）：1167-1169.

［12］陳寒梅，趙廣才.人參莖葉皂苷中人參皂苷Re含量的反相高效液相色譜測定方法的改進［J］.時珍國醫國藥，2009，20（2）：461-462.

［13］金美花，崔恩姬.高效液相色譜法測定活力源片中人參莖葉總皂苷含量［J］.中國藥業，2009，18（5）：31-32.

［14］張雯潔，李忠瓊，胡旭佳.HPLC法測定三七中人參皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量［J］.中國藥品標準，2003，4（4）：35-37.

Rapid screening of stem s and leaves in the place of roots and rhizom es of Panax ginseng and Panax notoginseng by HPLC

FEIYi-qin， YANG Ping， XIAO Ling， HOU Jun-jie， NIE Jing
（Hubei Institute for Food and Drug Control，Wuhan 430064，China）

AIMTo estab1ish an HPLC method to rapid1y identify the stems and 1eaves in the p1ace of root and rhizome of Panax ginseng and Panax notoginseng，which shou1d not be added in Chinese patentmedicines.METHODSHPLCwas used to ana1yze ginsenoside Rb3，Rg1and Re in Compound Danshen Tab1ets，Sanqi Tab-1ets/Capsu1es and Shen1in Baizhu Powder.The co1umn was Agi1ent Ec1ipse P1us C18（5μm，4.6 mm×250 mm）with acetonitri1e-water as themobi1e phase in a gradientmanner.The detection wave1ength was set at203 nm with 1.0 mL/min of f1ow rate.RESULTSIf ginsenoside Rb3 was checked out it showed that stems and 1eaves of P. notoginseng was added in.If the specific va1ue of ginsenoside Rg1and Re was 1ess than five it showed that stems and 1eaves of Panax ginseng was added in.This examination revea1ed that there existed adu1teration in Compound Danshen Tab1ets.CONCLUSIONThe method ismore accurate than TLC in supp1ementa1 testing method，and exc1udes the possibi1ity of the fa1se positive.

Panax notoginseng；Panax ginseng；stems and 1eaves；roots and rhizomes；HPLC；rapid screening；Chinese patentmedicine

R927.2

A

1001-1528（2015）08-1730-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.08.021

2014-08-22

費毅琴，女，主管中藥師，從事中藥檢驗及質量標準研究。Te1：（027）87272513，E-mai1：pryci11a@163.com