六種血常規項目聯合應用推斷死亡時間的實驗研究

韓 瑋 馬 原 唐 暉 李偉靜 李常蘭 任素萍 焦章平 于 群

1.北京市公安局豐臺分局物證鑒定所，北京 100072；2.軍事醫學科學院野戰輸血研究所，北京 100850；3.北京市公安局朝陽分局物證鑒定所，北京 100036；4.北京市公安局法醫檢驗鑒定中心，北京 100192

死亡時間推斷在刑事案件的偵破工作中具有重要意義，可以為偵察工作提供線索、劃定偵察范圍、確定犯罪嫌疑人有無作案時間或確認案件性質、闡明作案過程等[1]。 本研究通過檢測6 種血常規項目隨保存時間的變化，并與紅細胞ATP 含量參數[2]相比較，探討6 種血常規項目聯合應用推斷死亡時間的可行性，以尋求更為簡便推斷死亡時間的方法。

1 材料與方法

1.1 材料

選取健康捐血者12 名， 均為來自北京市公安局豐臺分局的志愿者，男、女各6 名，無血液疾病或代謝性疾病，年齡25～40 歲，采血前均告知采血量、可能風險并簽訂 《捐血志愿書》。 嚴格依照無菌操作規程，2010 年3 月由執業護士用EDTA 真空采血管各采集全血40 mL。

1.2 方法

1.2.1 血樣分組及保存

將全血搖勻后， 即刻將各個血樣以每份500 μL分裝到EP 管中，置于25℃恒溫箱中保存。 各組樣本分別在0、4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44 h 時間點取1 份待檢。

1.2.2 6 種血液常規項目檢測

將血樣搖勻， 然后將EP 管放入Sysmex-Poch-100i 血液分析儀（Sysmex 公司，日本）樣品槽中，測定6 項指標，包括：平均紅細胞體積（MCA）、平均血小板體積（MPV）、紅細胞分布寬度（RDW）、血小板分布寬度（PDW）、淋巴細胞絕對值（W-SCC）、淋巴細胞百分率（W-SCR）；同時測定血紅蛋白（HGB）濃度（g/L），以備計算紅細胞ATP 含量。

1.2.3 紅細胞ATP 含量測定

1.2.3.1 紅細胞ATP 待檢標本處理 取40 μL 血樣加入裝有1000 μL 等滲PBS 緩沖液的EP 管中，搖勻，置于干熱器中100℃加熱10 min，自然冷卻后13 000 r/min離心3 min，取上清液即為ATP 待檢標本。

1.2.3.2 ATP 含量測定 采用改良后生物發光法[3]。 全部試劑為中國科學院上海植物生理研究所產品。

1.2.3.3 紅細胞ATP 含量計算 紅細胞ATP 含量（μmol/gHb）=26×樣本ATP 濃度值/血紅蛋白濃度值。

1.3 統計學方法

全部數據采用SAS 9.2 統計軟件進行統計學分析。

1.3.1 各指標回歸方程及聯合方程分析

對上述6 種血常規項目及紅細胞ATP 含量 （用[項目]表示）隨保存（死亡）時間（用PMI 表示）的變化分別進行線性回歸分析，推導回歸方程，并對相關系數進行相關性檢驗；6 種血常規項目的全部數據匯總，采用最小二乘法擬合出六元一次的聯合方程。

1.3.2 各組殘差（偏離時間）計算

以各項目、指標的原始數據分別代入線性回歸方程和聯合方程，計算殘差（估計保存時間與實際保存時間之差），同一時間點上12 個殘差絕對值的均值為各時間點推測的平均偏離時間，各血常規項目的殘差分別與同一時間點的ATP 指標殘差及聯合方程的殘差進行成對t 檢驗。以P ＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 6 種血常規項目、ATP 指標回歸分析及聯合方程擬合分析

6 種血常規項目及ATP 指標與保存時間的回歸分析結果見表1。相關分析結果顯示，6 種血常規項目及ATP 指標與保存時間的相關性差異有統計學意義（P ＜0.05）。

6 種血常規項目聯合與保存時間的擬合分析，得到擬合方程PMI=-129.07-0.15[MCV]-27.75[W-SCR]-1.68[W-SCC]+3.18[RDW]+0.47[PDW]+2.54[MPV]，其r2為0.9663，擬合分析結果顯示，6 種血常規項目在聯合方程中與保存時間的相關性差異有統計學意義（P ＜0.05）。

比較來看各方程決定系數（r2）差距較大，6 種血常規項目的決定系數 （r2） 為0.7～0.8，ATP 指標r2為0.9126，聯合方程的r2為0.9663。

2.2 6 種血常規項目、聯合方程與ATP 指標殘差（偏離時間）的比較

6 種血常規項目、聯合方程與ATP 指標殘差結果見表2。 6 種血常規項目平均殘差值在2.44～2.99 之間，ATP 指標平均殘差值為1.86， 聯合方程平均殘差值為1.35。 同時可以看到，6 種血常規項目殘差值在各個時間點上與ATP 指標或聯合方程的殘差值進行成對t 檢驗，差異有高度統計學意義（P ＜0.01）；ATP指標殘差值在各個時間點上與聯合方程的殘差值進行成對t 檢驗，差異有高度統計學意義（P ＜0.01）。

表1 6 種血常規項目及紅細胞ATP 含量與保存時間的線性回歸分析

表2 6 種血常規項目、聯合方程與ATP 指標殘差（偏離時間）的比較（h）

3 討論

死亡時間常通過死后尸體現象、體液化學變化、直腸溫度、昆蟲學原理等方法進行分析推斷[4-6]。Medea 等[7]曾指出，生命代謝在死后繼續進行直到代謝底物耗竭為止。隨著DNA 技術的發展，一些研究嘗試利用DNA 降解和蛋白質降解規律推斷死亡時間[8-9]。紅細胞ATP 這一參數推斷死亡時間亦具有較好的應用情景[1]。 上述方法或誤差較大，或檢測繁瑣費時。 尋找簡便快捷的死亡時間推斷方法， 應該為廣大法醫工作者所關注。

至于如何判斷某回歸方程的應用價值，龔志強等[1]認為r2>0.9 的因子，其方程可用于死亡時間的推斷。但是劉茜等[10]認為，評價方程不應僅考慮r2值，還應該注意評價方程在推斷死亡時間時產生的預測偏離時間。 筆者較為認同劉茜等[10]的觀點，根據法醫辦案經驗，對死亡時間推斷其誤差應控制在2 h 左右為佳，否則其實際應用意義將大打折扣。

實驗結果顯示，6 種血常規項目其r2值明顯低于ATP，且偏離時間高于ATP，誤差偏大，不適于單獨應用于死亡時間推斷。 但同時也看到，6 種血常規項目的聯合方程其r2值為0.9663，而且偏離時間為1.35 h，均明顯優于ATP 指標，更遠超各血常規單項。陳瑤清[11]和陶濤等[12]均報道應用多種人玻璃體液化學成分推斷死亡時間，后者研究葡萄糖、鉀、鈣[13]、鎂[14-15]、磷和微量蛋白等11 種指標，認為葡萄糖、鉀離子和無機磷與死亡時間的相關性好， 并建立三指標聯合回歸方程；鉀離子與死亡時間最具有線性關系，但由于各自研究中的影響因素差異，造成直線回歸方程斜率和截距的不同[16-20]。用逐步回歸法建立多元回歸方程，可以提高對死亡時間估計的準確性。

綜上所述，以偏離時間2 h 左右為標準，筆者認為，聯合應用6 種血常規項目是一個較為準確實用的推斷死亡時間的方法， 而且血常規項目檢測極為方便、快捷，價格便宜，實際應用效果優于紅細胞ATP含量這一參數。 這一研究結果還提示，多項目聯合應用其實際推斷效果遠優于單個項目，在死亡時間推斷這一重要研究領域應該對此給予高度重視。

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