NOS在側支血管生長中對血管VE-cadherin表達及通透性的影響

楊 光，金春子*（吉林省延邊大學附屬醫院，吉林 延邊 133000）

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NOS在側支血管生長中對血管VE-cadherin表達及通透性的影響

楊 光，金春子*
（吉林省延邊大學附屬醫院，吉林 延邊 133000）

【摘要】目的 探究氧化氮合酶（NOS）在側支血管生長中對血管VE-cadherin表達及通透性的影響。方法 選取40只成年SD（Sprague-Dawley）大鼠作為研究對象，采用隨機數字表法分為正常組及研究組（股動脈結扎并腹腔注射NOS）各20只。采用蘇木素-伊紅染色法、伊文思藍通透性實驗觀察兩組大鼠側支血管生長中血管VE-cadherin表達及通透性變化情況。結果 研究組大鼠實施股動脈結扎誘導側支血管生長并腹腔注射NOS存活1周后，其血管VE-cadherin表達（190.2±22.8），與正常組（169.5±15.5）相比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；VE-cadherin通透性指標上，研究組伊文思藍滲出量（37.5±5.8）ng/mg，與正常組（80.5±11.0）ng/mg相比較，組間差異有統計學意義（P＜0.05）。結論 NOS能夠顯著提高血管VE-cadherin表達，從而降低血管通透性以及阻斷側支血管炎癥的形成與發展，對血管疾病的治療具有重要應用價值，值得在臨床中推廣使用。

【關鍵詞】側支血管；血管內皮鈣粘蛋白；伊文思藍；通透性

如何降低血管通透性以及阻斷側支血管炎癥的形成與發展成為當前國內外醫學界關注的焦點問題。為此，本次研究針對NOS在側支血管生長中對血管VE-cadherin表達及通透性的影響展開深入分析，現將結果報道如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料

選取40只成年SD（Sprague-Dawley）大鼠作為研究對象，其中雄性22只，雌性18只，體重220～250 g，平均體重（235±10）g，均為某醫學院實驗動物學部自行培育繁殖的健康SD鼠。

1.2 方法

臨床研究人員采用隨機數字表法分為正常組及研究組（股動脈結扎并腹腔注射NOS），各20只。研究組股動脈結扎并腹腔注射NOS步驟如下。研究用大鼠經過適應性觀察后采用15%水合氯酸溶液實施腹腔麻醉，其使用劑量標準為300 mg/kg。取仰臥位并將其四肢充分固定之后暴露腹部皮膚并絡合碘消毒，在其腹腔部位與腿部交匯之處腹股溝韌帶下方部位逐層分離皮膚組織，分離出股動脈后切斷其余小分支并使用醫用棉線實施雙結扎，并向其結扎后的股動脈注入NOS抑制劑。之后使用生理鹽水進行細致消毒后逐層關閉創口。將所有實驗用大鼠放置在25℃環境中培養1周后選取培養部位生理切片放入4%多聚甲醛溶液固定15 min，隨后放入0.5%伊紅染液予以染色90 s后平放于室溫條件下自然風干，之后采用高倍光學顯微鏡觀察組織形態變化情況并做相應記錄。隨后進行伊文思藍（Evanceblue，EB）通透性實驗，首先配置伊文思藍溶液，將2%伊文思藍（美國Sigma-Aldrich公司生產）50 mg溶解于10 mL生理鹽水并經超聲波振蕩溶解。其次，打開實驗用大鼠胸腔，從其左心室-升主動脈將50 mL生理鹽水注入，當無殘余血液流出后依次切開皮膚組織并取出側支血管及其附近組織放入樣本管。第三，定量檢測。使用甲酰胺將對2%伊文思藍進行稀釋，濃度以20 ng/μL為宜。隨后制作伊文思藍標準曲線，將經過稀釋的伊文思藍溶液對半稀釋成為10 ng/μ、5 ng/μ、2.5 ng/μ、1.25 ng/μ等幾個標準值。將制備好的樣本在60℃孵育箱中培養24 h，以10000 r/min離心30 min后去除上清液后詳細記錄分光光度計620 nm處的吸光值并根據已經繪制的標準曲線計算其通透性[1]。

1.3 統計學方法

本次研究當中的所有數據均采用SPSS 17.0統計軟件進行處理，計量資料以“x ±s”表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結 果

2.1 NOS在側支血管生長中對血管VE-cadherin表達的影響

研究組大鼠實施股動脈結扎誘導側支血管生長并腹腔注射NOS存活1周后，其血管VE-cadherin表達（190.2±22.8），與正常組（169.5±15.5）相比較，差異有統計學意義（t=8.581，P＜0.05）。

2.2 NOS在側支血管生長中對血管VE-cadherin通透性的影響

VE-cadherin通透性指標上，研究組伊文思藍滲出量（37.5±5.8）ng/mg，與正常組（80.5±11.0）ng/mg相比較，組間差異有統計學意義（t=9.589，P＜0.05）。

3　討 論

根據當前臨床研究證實，血管內皮細胞之間存在三種連接形式。分別是粘附連接、緊密連接、縫隙連接[3]。在上述三種連接相互作用配合之下，維持了機體內部血管的完整性。而在此其中VE-cadherin利用自身的細胞外結構域與分布在周圍的其他VE-cadherin緊密連接，從而形成同型型粘附關系，之后連接至β-catenin，或者有目的性的與plakoglobin（斑珠蛋白）、α-catenin等相連接，構成了血管壁所具有的屏障功能[3]。目前臨床中常見的血管疾病通常是由于主動脈血管腔徑變窄或者在局部區域形成阻塞，繼而導致血管破裂，從而引發的一系列疾病。通過進一步深入研究發現，患有血管疾病的患者自身主動脈發生阻塞之后常常會發生側支血管瘋狂生長現象，盡管該現象在一定程度上能夠提高血氧的輸送量，但是，側支血管通透性的大幅提升，同時也會導致血管炎癥隨之轉移，并朝著深處進一步發展。此外，由于此種情形可以降低VE-cadherin表達，繼而嚴重破壞血管壁組織結構，造成不可逆性通透性增加，加重病情[4]。所以，針對側支血管生長實施干預成為當前控制血管疾病進展的關鍵。

本次研究中研究組大鼠實施股動脈結扎誘導側支血管生長并腹腔注射NOS存活1周后，其血管VE-cadherin表達（190.2±22.8）明顯高于正常組（169.5±15.5），并且在VE-cadherin通透性指標上，研究組伊文思藍滲出量（37.5±5.8）ng/mg顯著低于正常組的（80.5±11.0）ng/mg，結果表明NOS能夠顯著提高血管VE-cadherin表達，從而降低血管通透性以及阻斷側支血管炎癥的形成與發展，對血管疾病的治療具有重要應用價值，值得在臨床中推廣使用。

參考文獻

[1]余 濤,劉曼曼,李 丹,等.去甲斑蝥素對人臍靜脈內皮細胞遷移、黏附、管腔形成能力及血管內皮生長因子受體、內皮細胞鈣黏著蛋白表達的影響[J].中國癌癥雜志,2012,03:232-235.

[2]楊寶林,伍校瓊,羅明英,等.L-NAME對人臍靜脈內皮細胞VE-cadherin表達的影響[J].中國臨床解剖學雜志,2012,04:412-416.

[3]徐洪增,金元哲.1-磷酸鞘氨醇受體激動劑對血管衰老的保護作用[J].中華老年心腦血管病雜志,2014,09:995-997.

[4]徐秀連,王崇樹.Maspin、iNOS及VEGF與胃癌關系的研究現狀[J].腫瘤預防與治療,2013,02:107-111.

［基金項目］國家自然科學基金（81460039）；吉林省科技廳青年科研基金（20140520024JH）；吉林省衛生廳青年科研基金（2014Q043）

［通訊作者］金春子,(1984-)女，吉林延吉人，醫學博士，主治醫師，研究方向:高血壓

【文章編號】ISSN.2095-6681.2015.04.185.02

【文獻標識碼】B

【中圖分類號】R543