熱休克蛋白27在人腦星形膠質細胞瘤中的表達及意義

陳曉杰 南飛飛 張明智△

1）山東中醫藥大學第一臨床醫學院 2）鄭州大學第一附屬醫院 鄭州 450052

熱休克蛋白（heat shock protein，HSP）由美國學者最初在高溫環境的細胞中發現。是一個高度保守的多肽類蛋白質家族，其成員眾多、含量豐富、廣泛存在。研究證實，其合成受很多應激因素的影響，如感染、中毒、惡變以及缺血等。目前，其分類主要按照分子量大小劃分，包括HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP27等。在其家族中，與腫瘤關系較為密切的主要有HSP90和HSP27［1-2］。

1 資料與方法

1．1 一般資料 選擇2009-01—2012-12平頂山市第一人民醫院神經外科經手術切除的12例星形膠質細胞瘤手術標本（膠質瘤組），診斷全部有病理檢查支持，男7例，女5例；年齡36～72歲。所有患者術前均未經放化療。病理診斷和分級全部按2007年WHO 中樞神經系統腫瘤分類標準確定：Ⅱ級7例，Ⅲ級3例，Ⅳ級2例。另選取12例同期住院的經手術切除的正常腦組織患者（正常腦組織組），男8例，女4例；年齡18～49歲。標本切除離體后，6h內放入-80 ℃冰箱保存。

1．2 方法

1．2．1 常規HE染色：二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）各15min，二甲苯：無水乙醇＝1：1 2min，100%乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各5min，80%乙醇5min，蒸餾水5min，蘇木精液染色5min，流水稍洗1～3 s，1%鹽酸乙醇1～3s，0．5%伊紅液染色1～3min，蒸餾水稍洗1～2s，80%乙醇稍洗1～2s，95%乙醇（Ⅰ）、（Ⅱ）各3 s，無水乙醇5～10 min，石炭酸二甲苯5～10 min，二甲苯（Ⅰ）、（Ⅱ）、（Ⅲ）各2min，中性樹膠封固［3］。

1．2．2 免疫組織化學方法：檢測HSP27蛋白在人腦星形膠質細胞瘤、瘤旁以及正常腦組織中表達情況。①免疫組化二步法：脫蠟、水化組織切片，預處理組織切片，蒸餾水漂洗，置于TBS 中10 min，一抗孵育10～30 min，TBS 漂洗10 min，EnVisionTM 孵育10～30 min，TBS漂洗10 min，色源底物溶液孵育10min，蒸餾水漂洗，復染及封片，顯微鏡下觀察［3］。②判定免疫組化結果的標準：由本院2位病理科醫師進行雙盲閱片，對每張切片進行10個高倍鏡下（×400）視野內陽性細胞隨機計數，陽性細胞數為最終判斷標準：沒有著色為0分，淡黃色著色為1分，棕黃色著色為2分，棕褐色著色為3分；判斷陽性范圍：0分為＜5%，1分為5%～25%，2分為26%～50%，3分為51%～75%，4分為＞75%；最終判定結果為二者相加分數：陰性（-）為＜2分，弱陽性（＋）為2～3分，中度陽性（＋＋）為4～5分，強陽性（＋＋＋）為6～7分［3］。

1．3 統計學處理 對所有數據的統計學處理采用SPSS 13．0軟件，配對設計等級資料。P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 HSP27表達檢測結果 根據免疫組織化學染色的結果顯示，細胞染色定位于胞質內，呈棕黃色，彌漫狀分布為HSP27表達陽性。人腦星形膠質細胞瘤組織HSP27總陽性表達率和強陽性表達率分別為100．00%（12／12）、50．00%（6／12）；瘤旁組織為100．00%（12／12）、25．00%（3／12）；正常腦組織為91．66%（11／12）、25．00%（3／12）。根據Wilcoxon符號秩檢驗結果看出，人腦星形膠質細胞瘤旁組織及正常腦組織中HSP27的表達差異無統計學意義（P＞0．05）。但人腦星形膠質細胞瘤組織中分別與二者的表達相比，差異有統計學意義（P＜0．05）。

2．2 HSP27的表達與臨床病理特征二者之間關系 腫瘤不同生長部位、腫瘤不同分化程度、腫瘤的體積、周圍衛星結節轉移個數等對HSP27的表達差異無統計學意義（P＞0．05）。

3 討論

腦星形膠質細胞瘤是人類最常見的神經系統腫瘤之一，腦星形膠質細胞瘤的治療以手術為主，臨床需手術切除的大多數患者為中晚期患者，治療效果差，預后不良，當前5a生存率在確診該病患者中僅有50%左右。HSP是一類多肽類蛋白質家族，結構復雜且廣泛存在于各種組織，維持蛋白質的穩定性是其主要作用，相當于分子伴侶。其與腫瘤的關系密切，在目前腫瘤學研究中受到越來越多的重視。HSP27分子量較小，為27kD，在HSP 龐大家族中屬于小分子量的HSP，HSP27在很多腫瘤細胞中異常高表達，如卵巢癌、結腸癌、乳腺癌、腎癌、肝癌、骨癌、前列腺癌、肺（非小細胞）癌、食管癌、膀胱癌等，特別是起源于腺癌的腫瘤［3］。在這些腫瘤細胞中，HSP27異常高表達，因此有可能增加這些腫瘤細胞對抗人體免疫系統的能力，從而逃離免疫系統介導的凋亡過程。大量對于結腸癌和卵巢癌等腺癌組織的研究表明，腫瘤細胞的分化程度、腫瘤的浸潤深度和淋巴結轉移的數目與HSP27的異常表達呈正相關。分化程度越差、腫瘤浸潤越深、淋巴結轉移數目越多則HSP27 的表達越顯著。肺癌的組織學類型與HSP27的表達關系密切，可通過非小細胞肺癌組織中HSP27的表達，判斷其增殖分化的程度，從而為臨床療效和預后的判斷、治療計劃的制定提供重要的參考信息。本研究運用免疫組化檢測了瘤組織、瘤旁組織以及正常組織HSP27的陽性表達率，發現腦星形膠質細胞瘤組織中HSP27的陽性表達基本高于癌旁組織和正常腦組織，提示隨著腦星形膠質細胞的惡變HSP27的表達量有所增加。腫瘤不同生長部位、不同分化程度、體積、周圍衛星結節轉移個數均不影響HSP27的表達。腫瘤標志物能夠提示機體腫瘤細胞的存在。神經膠質瘤起源于中樞神經系統的膠質細胞，成分復雜，異質性很高，包括星形膠質細胞瘤、少突膠質細胞瘤和室管膜瘤等多個亞型。星形膠質細胞瘤是中樞神經系統最常見的一種腫瘤，目前仍缺乏敏感特異的標志物分子。尋找精確、非主觀因素決定的分子腫瘤標志物對星形膠質細胞瘤的診斷、治療和預后判斷均具有重要的理論意義［4］。腫瘤標志物為星形膠質細胞瘤的早期診斷及預后提供依據［5］。根據周金橋研究［6］我們發現，HSP27的表達與腫瘤有極其密切的聯系，許多腫瘤組織中均HSP27的高表達，但對其進一步的研究，如具體聯系及機制有待深入。對于HSP27 與腫瘤的關系更深入研究有助于更好地了解腫瘤發病的機制，并在此基礎上找到一個以HSP27為目標新的檢測和治療腫瘤的方法。

［1］Castro GN，Cayado-Gutiérrez N，Moncalero VL，et al．Hsp27（HSPB1）：apossible surrogate molecular marker for loss of heterozygosity（LOH）of chromosome 1p in oligodendrogliomas but not in astrocytomas［J］．Cell stress ＆ Chaperones，2012，17（6）：779-790．

［2］Alam R，Schultz CR，Golembieski WA，et al．PTEN suppresses SPARC-induced pMAPKAPK2 and inhibits SPARC-induced Ser78HSP27phosphorylation in glioma［J］．Neuro Oncol，2013，15（4）：451-456．

［3］邵少慰．病理學實驗教程［M］．武漢：華中科技大學出版社，2010：15-20；72-80．

［4］Vila-Carriles WH，Zhou ZH，Bubien JK，et al．Participation of the chaperone Hsc70in the trafficking and functional expression of ASIC2in glioma cells［J］．J Biol Chem，2007，282（47）：34 381-34 389．

［5］McClung HM，Golembieski WA，Schultz CR，et al．Deletion of the SPARC acidic domain or EGF-like module reduces SPARC-induced migration and signaling through p38 MAPK／HSP27in glioma［J］．Carcinogenesis，2012，33（2）：275-284．

［6］周金橋，王景濤，劉秋紅，等．人腦星形膠質細胞瘤惡性程度相關蛋白表達譜的分析與鑒定［J］．中華神經醫學雜志，2012，11（8）：780-783．