氯吡格雷對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶含量及CYP3A4活性的影響

氯吡格雷對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶含量及CYP3A4活性的影響

楊光遠韓梅王明富陳鋒孔繁和張磊藝趙曉輝劉明遠

(佳木斯大學，黑龍江佳木斯154007)

摘要〔〕目的探討氯吡格雷對大鼠肝微粒體細胞色素P450 (CYP450) 含量及CYP3A4活性的影響。方法以生理鹽水為對照，對照組大鼠灌胃給予1 ml生理鹽水，氯吡格雷組大鼠每日灌胃給予6.75 mg/kg的氯吡格雷，連續7 d，然后測定大鼠肝微體中CYP450含量及CYP3A4活性。結果與對照組比較，氯吡格雷組的肝微粒體CYP450含量無變化( P>0.05)，CYP3A4活性明顯降低 (P<0.01)。結論氯吡格雷對CYP450含量無影響，但對CYP3A4活性有抑制作用。

關鍵詞〔〕氯吡格雷;CYP450; CYP3A4

中圖分類號〔〕R969.2〔文獻標識碼〕A〔

基金項目：黑龍江省教育廳面上項目資助(No.12511571)

通訊作者：劉明遠(1973-)，女，副教授，博士，碩士生導師，主要從事藥物分析及藥物代謝研究。

第一作者：楊光遠(1975-)，男，副教授，主要從事心血管藥理及藥物相互作用研究。

氯吡格雷是一類具有抗血小板作用的噻吩并吡啶衍生物，需要經肝細胞色素P450酶生物轉化為有活性的代謝物方能起作用。催化激活氯吡格雷的肝細胞色素P450酶主要為CYP3A4，其他肝細胞色素P450酶如：CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9及CYP2C19也參與氯吡格雷的代謝過程〔1〕。藥物對肝微粒體CYP450酶的作用是藥物間發生相互作用的重要機制之一，氯吡格雷與多種藥物聯用發生代謝性相互作用的報道屢見不鮮，如質子泵抑制劑〔2〕、降脂藥〔3〕、鈣通道阻滯藥〔4〕及選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRI)類抗抑郁藥等〔5〕。關于氯吡格雷口服給藥對肝微粒體酶的影響，目前尚未見文獻報道。本試驗旨在探討氯吡格雷對大鼠肝細胞色素P450酶含量及肝微粒體中最重要的亞型CYP3A4活性的影響，以考察其是否會在臨床聯合用藥時存在潛在的代謝性相互作用。

1材料與方法

1.1試驗動物體重200～250 g的Wistar雄性大鼠，佳木斯大學實驗動物中心提供，合格證號：SCXK-(黑)2013-001)。

1.2試劑與儀器硫酸氫氯吡格雷對照品(中國食品藥品檢定研究院)；咪達唑侖(含量>98%，徐州恩華藥業集團有限責任公司)；1′-羥基咪達唑侖(含量>98%，Sigma公司)； Agilent 1100高效液相色譜系統(Agilent公司，美國)；QTRAP型三重四極桿串聯質譜儀(Applied Biosystem公司，美國)。

1.3方法

1.3.1大鼠給藥方案健康Wistar大鼠18只，雄性，隨機分成三組，每組6只，各組等體積連續7 d給予生理鹽水或相應藥物。對照組灌胃給予生理鹽水；氯吡格雷組，灌胃給予氯吡格雷6.75 mg/kg；苯巴比妥組每日按75 mg/kg劑量腹腔注射苯巴比妥。

1.3.2大鼠肝微粒體的制備上述各組大鼠末次給藥后，第2日拉頸椎處死動物，打開腹腔，取出肝臟，立即放入0.25 mol/L冰冷的蔗糖溶液(pH7.4)中清洗，冰上用剪刀將肝臟剪碎，洗至無血色；取2 g已剪碎的肝臟，加入1 ml蔗糖溶液，用組織勻漿機于冰浴中制成勻漿；4℃下，先將樣品 20 000 r/min離心20 min后，再取上清液，于100 000 r/min離心60 min，棄去上清液，用0.1 mmol/L Tris鹽酸(Tris-HCl)緩沖液(pH7.4)將沉淀懸浮均勻，-80℃保存。

1.3.3肝微粒體蛋白濃度測定〔6〕以牛血清白蛋白為標準，用NaOH稀釋肝微粒體樣品，依照標準曲線計算肝微粒體中蛋白濃度。

1.3.4肝微粒體CYP450含量測定〔7〕分別記錄450 nm和490 nm下各樣品的吸收度，根據下式計算CYP450的含量，CYP450(nmol/mg protein)=〔A(450 nm-490 nm)1000〕/(91C)。

1.3.5肝微粒體CYP3A4亞型活性測定依據文獻選取咪達唑侖作為CYP3A4的特異性底物〔8〕，每個樣品建立500 μl孵育體系。孵育體系中各成分及其終濃度、反應終止過程見文獻〔9〕。經樣品處理后，采用高效液相色譜-質譜聯用技術測定咪達唑侖的代謝產物1′-羥基咪達唑侖的濃度，并計算出該代謝產物的生成速度。

1.4統計學方法應用SPSS10.0軟件進行t檢驗。

2結果

2.1各組大鼠肝微粒體中CYP450含量氯吡格雷給藥組CYP450 含量〔(0.74±0.22)nmol/mg prot〕略高于對照組〔(0.72±0.24)nmol/mg prot〕，但二者之間無統計學差異(P>0.05);與對照組比較，苯巴比妥鈉給藥組CYP450含量〔(1.64±0.33)nmol/mg prot〕明顯增加(P<0.01)。

2.2各組大鼠肝微粒體CYP3A4活性對照組大鼠肝微粒體CYP 3A4的活性為(0.059 ± 0.012)nmol·mg-1·min-1，氯吡格雷給藥組大鼠肝微粒體CYP 3A4的活性為(0.042±0.007)nmol·mg-1·min-1，氯吡格雷給藥組明顯低于對照組(P<0.05)。

3討論

心血管藥物應用的長期性增加了其與其他藥物聯合應用的機會，發生藥物間相互作用的可能性也隨之增加。氯吡格雷是臨床常用的抗血小板聚集藥物，研究表明，氯吡格雷可明顯降低經皮冠狀動脈介入術(PCI) 和急性冠脈綜合征(ACS)后各種缺血事件的發生率〔10〕。氯吡格雷與其他藥物聯用在老年人中非常常見。藥物聯用時，在吸收、分布、代謝、排泄4個階段均可發生藥物間相互作用，其中發生率最高的是代謝性相互作用。CYP450酶系是重要的藥物代謝酶，造成代謝性藥物相互作用的主要原因是CYP450酶系。而CYP3A4是CYP450中最重要的亞族，可參與約50%的藥物代謝〔11〕。對CYP3A4 活性有明顯影響的藥物，如與CYP3A4底物聯用，很可能會引起極其嚴重的藥物相互作用。

本試驗結果提示，氯吡格雷可能會改變合并用藥時經CYP3A4代謝藥物的代謝速率，為避免發生不良反應，應注意減少后者的用量。大鼠和人之間在藥物對肝微粒體酶的作用方面存在一定的種屬差異〔12〕，因此，氯吡格雷在臨床上是否會出現抑制CYP3A4活性的作用，還需進一步研究。

4參考文獻

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9劉明遠，楊光遠，王躍新，等.褪黑素對大鼠肝微粒體細胞色素P450酶亞型CYP2C9、CYP2D6、CYP3A4活性的影響〔J〕.中國老年學雜志,2011;31(11)：2018-9.

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11Smith DA，Jones BC.Speculations on the substrate structure-activity relationship ( SSAR) of cytochrome P450 enzymes〔J〕.Biochem Pharmacol，1992;44(11):2089-98.

12Graham MJ，Lake BG.Induction of drug metabolism: species differences and toxicological relevance〔J〕.Toxicology，2008;254(3):184-91.

〔2015-03-11修回〕

(編輯袁左鳴)