桑寄生質量標準的研究

商麗麗，孫秋，白楊

白城市食品藥品檢驗所，吉林白城 137000

桑寄生為桑寄生科植物桑寄生Taxi11us chinensis(DC.)Danse的干燥帶葉莖枝。冬季至次春采割，除去粗莖，切段，干燥，或蒸后干燥[1]。桑寄生入藥始載于《神農本草經》，名“桑上寄生”，列入上品。《名醫別錄》云：“一名蔦，生弘農川谷桑樹上，三月三日采莖葉，陰干。”《新修本草》載：“此多生槲、櫸、柳、水楊、楓等樹上，子黃，大如小棗子。惟虢州有桑上者，子汁甚粘，核大似小豆；葉無陰陽，如細柳葉而厚；晚莖粗短。江南人相承用為續斷，殊不相關。且寄生實九月始熟而黃。”《蜀本草》云：“按諸樹多有寄生，莖葉并相似。”又云：“葉如橘而厚軟，莖如槐而肥脆，今處處有。方家惟須桑上者，然非自采即難以別，可斷莖而視之，以色深黃者為驗。《圖經本草》葉似龍膽而厚闊，莖短似雞腳，作樹形。三月、四月花，黃赤色，六月、七月結子黃綠色，如小豆，以汁稠粘者良也。”綜上所述，古代所用的桑寄生，系來源于桑寄生科不同屬的數種植物，除現作桑寄生入藥的鈍果寄生屬、梨果寄生屬外，尚包括槲寄生屬植物。

歷史上，槲寄生和桑寄生用名較為混亂，且由于二者功效相似及用藥習慣的沿襲，臨床上二者一直是混用的。從《名醫別錄》到《本草綱目》的一些本草著作，關于桑上寄生一項大都指槲寄生，直至近代。《植物學大辭典》1918年將Lorantheceae譯為槲寄生，于是“槲寄生”一詞在藥學界廣為應用了。到1977年版《中華人民共和國藥典》已將槲寄生與桑寄生分別列為兩種中藥，它們分屬桑寄生科的桑寄生屬和槲寄生屬[2]。現質量標準[1]中不含含量測定項槲皮素，為了控制桑寄生的質量，更好的區別桑寄生與槲寄生，特研究設立了高效液相色譜法(HPLC)測定桑寄生中槲皮素的含量[3]，此方法操作很簡單，數據比較穩定，結果很準確。

1 材料與儀器

1.1 材料

圖1 HPLC色譜圖

中藥材桑寄生批號：20151012、20151013、20151014、20151032、21051033、20151034、20151035、20151036、20151047、20151048；槲寄生陰性對照藥材（中國藥品生物制品檢定所）批號：121038-201014；桑寄生陽性對照藥材（中國藥品生物制品檢定所）批號：121075-200402對照品：槲皮素（中國藥品生物制品檢定所）批號：100081-200406；含量測定所用的甲醇為青島試劑廠生產的色譜純，其他試劑均為分析純。

1.2 使用的儀器

Agi1ent高效液相色譜儀；檢測器為ΜV-2450型紫外-可見分光；工作站為Sepμ 3000色譜。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agi1ent SB-C18 色譜柱（4.6×250 mm,5μm）；柱溫30℃。流速：1.0 mL/min、流動相：甲醇：0.5%磷酸溶液(47:53)；檢測波長：360 nm。理論板數按槲皮素峰計算不得低于2500[4]。

2.2 對照品溶液的配置

精密稱取對照品槲皮素10 mg，置100 mL量瓶中，適量加80%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10 mL，至50 mL量瓶中，加80%甲醇稀釋至刻度，制成每1 mL含20 μg的槲皮素對照品溶液。

2.3 供試品溶液的配置

取10批桑寄生樣品粉末（過4號篩）各約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（23-2）50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，取出，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續濾液即得[6]。

2.4 檢測波長的確定

紫外-可見分光光度法，采用的儀器為北京普析TI-1901，以槲皮素對照品溶液的溶劑甲醇為空白對照，掃描200～400的紫外光區，測的槲皮素的最大吸收為260 nm，即為檢測波長。

2.5 陰性對照溶液制備

取槲寄生對照藥材粉末約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（23-2）50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，取出，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續濾液即得陰性對照溶液。

2.6 陽性對照溶液的制備

取桑寄生對照藥材粉末約1 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇-鹽酸（23-2）50 mL，稱定重量，加熱回流2 h，取出，放冷，用甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續濾液即得陽性對照溶液。

2.7 測定法

分別精密吸取對照品溶液10μL、陰性對照溶液10 μL、陽性對照溶液10 μL和10批供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測定，即得。見圖1。

2.8 線性關系考察

實驗對濃度為20 μg/mL的槲皮素對照品溶液進行線性考察。 精密吸取對照品溶液 2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL 注入高效液相色譜儀（HPLC）中，按照上述條件測定吸收峰面積，計算進樣量，以峰面積積分值橫坐標，進樣量為縱坐標（μg），根據面積歸一化法繪制出標準曲線，得到槲皮素回歸方程Y=3147.214x+268.159,r=0.9996，實驗采用的對照品濃度呈現良好的線性關系。

隨機抽取中藥材桑寄生供試品溶液（批號：20151036），精密程定 0.5 g、1.0 g、1.5 g、2.0 g、2.5 g、2.6 g 依據供試品制備方法制備溶液，精密吸取對照品溶液及上述供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀（HPLC）中，按照上述條件測定吸收峰面積，計算進樣量，以峰面積積分值橫坐標，進樣量為縱坐標（μg），根據面積歸一化法繪制出標準曲線，得到槲皮素回歸方程Y=3514.214x+204.197，r=0.9991，實驗采用的供試品濃度同樣呈現良好的線性關系。

2.9 藥物穩定性的試驗

精密吸取同一份供試液，依次在0 h，3 h，6 h，12 h和24 h進行測定，共考察24 h。統計峰面積平均為3245.41，RSD為1.0%,說明槲皮素至少在24 h內相對穩定。

2.10 精密度試驗

精密吸取同一份供試品溶液10μL，連續重復進樣9次，測定吸收峰面積，結果吸收峰面積的平均值為3 262.04，RSD 為 1.0%（n=9）。

2.11 系統重復性試驗

取對同一批量的樣品按以上敘述含量測定方法連續進行9次平行試驗測定，計算其含量，結果供試品中槲皮素的平均含量為1.61mg/g,相對標準偏差為為0.7%(n=9)。

2.12 方法回收率試驗

隨機抽取已經知道含量的中藥材桑寄生供試品（批號：20151014），精密稱取 8份，每份為 2 g，分別精密注入含槲皮素0.1012 mg/mL的對照品溶液1.0 mL,按上述試驗方法進行測定，計算其回收率，結果見表1。

表1 桑寄生中槲皮素的加樣回收試驗結果

2.13 樣品測定結果

按照前述方法配置供試品溶液與對照品溶液，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測定計算其含量，樣品測定的結果見表2。

3 討論

①為加強對中藥材在流通領域中的監督管理,我省對易混淆中藥材品種進行了重點監督抽驗,從監督抽驗情況看,中藥材在部分經營單位和醫療使用單位仍有混用現象,其中以桑寄生與槲寄生的混用現象為多。桑寄生和槲寄生歷史上就有混用的情況。桑寄生是華南、江南、西南地區藥材流通的主流產品。槲寄生是東北、華北、西北地區的主流品種。雖然桑寄生和槲寄生的藥理作用相近，但有效成作用機制分均不同。曾有人提議，將桑寄生、槲寄生合并用，這是沒有充足理論依據的[8-10]。

②該實驗針對桑寄生和槲寄生成分的不同，對桑寄生的含量進行測定，是對桑寄生的質量標準進一步提高，原標準無含量測定，現選擇增加槲皮素的含量測定，可以在質量標準對桑寄生的來源質量進行控制，從而達到對產品的質量進行更好的監控，減少經營單位和醫療使用單位的混用現象。

[1]桑寄生[S].中華人民共和國藥典一部，2015:299.

[2]桑寄生[S].中華人民共和國藥典，1997.

[3]張協君，朱開晰，趙明惠，等.不同寄主來源的桑寄生藥材槲皮苷與槲皮素含量分析 [J].時珍國醫國藥，2011（7）：1604.

[4]地錦草 [S].中華人民共和國藥典一部，2015：127.

[5]周風雨.桑寄生和槲寄生不宜混用 [J].中國中醫藥信息雜志，2009，3(3)：109.

[6]蘇本偉，張協君，朱開晰，等.桑寄生中槲皮素的提取工藝[J].中國醫院藥學雜志，2014，34(19):1638-1641.

[7]紫外-可見分光光度法[S].中華人民共和國藥典四部，2015：38.

[8]傅茂東，劉群，韓瑩.談中藥材桑寄生與槲寄生的混用現象與建議[J].山東醫藥工業,2003,22(2)：42.

[9]肖玉燕，翁金月，樊建霜.槲寄生古今論 [J].海峽藥學，2008，20(2)：45-47.

[10]吳云燕.桑寄生與槲寄生的鑒別[J].實用中醫藥雜志，2007,12(23)：806

[11]李永華，陳棟，朱開昕，等.對桑寄生使用混亂的分析[J].廣西中醫學院學報,2007，10(2):60-71.

[12]孫艷秋.槲寄生的研究進展[J].中草藥,2000(6):471-474.

[13]董政起，朱靜，金光株.HPLC指紋圖譜鑒別桑寄生和槲寄生[J].吉林中醫藥，2007，27（2）：56-57.