胃癌組織Tiam1表達及其與臨床病理特征和生存的關系

王娟霞 周永寧 鄒紹靜 任濤文 張志鎰

·論著·

胃癌組織Tiam1表達及其與臨床病理特征和生存的關系

王娟霞 周永寧 鄒紹靜 任濤文 張志鎰

目的 探討胃癌組織Tiam1在胃癌的發生、發展過程中的作用。方法 運用免疫組化法結合組織芯片技術聯合檢測189例胃癌、54例癌旁、30例正常組織及59例對應的淋巴結中的Tiam1蛋白表達情況。結果 Tiam1蛋白在胃癌組織、癌旁組織及正常胃黏膜的表達陽性率分別為85.7%、74.1%和16.7%, 比較差異有統計學意義(χ2=67.448, P＜0.001)。Tiam1蛋白表達與淋巴結轉移、分化程度及浸潤深度密切相關(P＜0.05)。胃癌原發灶Tiam1蛋白表達陽性率(85.0%)高于相對應的淋巴結轉移灶(65.0%) (χ2=4.267, P＜0.05)。Tiam1蛋白表達陽性具有顯著的生存危險, 是獨立的生存期預測因子。結論 Tiam1蛋白表達與臨床病理特征密切相關, 其表達方式與患者的生存期密切相關, 可作為獨立的生存期預測因子。

胃癌組織；Tiam1蛋白；免疫組化；臨床病理特征；生存期

Tiam1可以在PH功能區參與下誘導細胞膜皺褶, 細胞膜皺褶是腫瘤細胞運動和轉移的一個指標［1,2］。本研究檢測189例胃癌、54例癌旁、30例正常組織及59例對應的淋巴結中Tiam1蛋白的表達情況, 以研究其表達與胃癌的相關性。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 癌組織189例, 相對應淋巴結為59例(其中有轉移灶40例), 癌旁54例［取材距癌組織邊緣≥6 cm,經蘇木精-伊紅染色(HE染色)證實均無癌細胞］。所有標本均為武威市腫瘤醫院1999～2004年保存完好胃癌術后的石蠟標本。Tiam1蛋白一抗購自美國Santa Cruz公司 , 免疫組化試劑盒購自北京中杉金橋生物技術有限公司。取30例胃癌的陰性切斷(胃正常黏膜)與胃癌組織作對照。男145例,女44例。年齡30～73歲, 中位年齡55歲。根據WHO分類法, 低分化型100例, 高中分化型89例；T1(局限于黏膜層)7例, T2(侵及肌層)39例, T3(侵及漿膜層)86例, T4(侵及漿膜外)57例；有淋巴結轉移116例, 無淋巴結轉移73例。依據Lauren分型, 腸型97例, 彌漫型85例, 混合型7例。腫瘤直徑≥5 cm者119例, 腫瘤直徑＜5 cm者70例。

1.2 方法 所選蠟塊制成4 μm厚切片, 免疫組化染色按試劑盒步驟操作。用已知表達抗體的組織做陽性對照, 用磷酸鹽緩沖液(PBS緩沖液)代替一抗作為陰性對照。免疫組化染色陽性表達主要位于細胞漿或細胞膜, 呈淡黃色或棕黃色或棕褐色顆粒。按半定量評分方法如下：根據腫瘤細胞的染色范圍, 陽性細胞數＜5%、5%～25%、26%～50%、＞50%分別標記為0、1、2、3分；對每張切片陽性細胞的染色強度按無著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色分別標記為0、1、2、3分, 根據兩項評分之和判斷結果, ≥3分者為陽性, ＜3分者為陰性。

1.3 統計學方法 采用SPSS15.0 統計學軟件整理分析數據。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。采用Kaplan-Meier曲線分析單因素生存分析, 生存期預測相關性采用COX回歸分析。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 Tiam1表達 Tiam1在胃癌組、癌旁組及正常對照組的表達陽性率分別為85.7%(162/189)、74.1%(40/54)和16.7% (5/30)。可見, Tiam1蛋白主要在細胞漿表達, 少有胞膜表達, 呈棕黃色或棕褐色染色顆粒。胃癌組Tiam1表達陽性率與癌旁組和對照組相比差異均有統計學意義(χ2=4.057、68.172, P＜0.05)。癌旁組和對照組相比, 差異有統計學意義(χ2=25.554, P＜0.001)。

2.2 Tiam1表達與臨床病理特征 胃癌中Tiam1的表達與淋巴結轉移、浸潤深度以及分化程度關系緊密(P＜0.05), 而與年齡、腫瘤大小、Borrman分型和Lauren分型無顯著相關性。見表1。

2.3 淋巴結轉移灶Tiam1表.19例未轉移淋巴結(59例淋巴結)Tiam1的表達陽性率為15.8%(3/19), 40例淋巴結轉移灶Tiam1的表達陽性率為65.0%(26/40)。與之相對應的40例原發灶胃癌組織Tiam1的表達陽性率為85.0%(34/40), 兩者比較差異有統計學意義(χ2=4.267, P＜0.05)。

2.4 Tiam1與生存期 Kaplan-Meier生存曲線分析顯示.101例隨訪胃癌手術患者的半數生存期為28個月.3年與5年的平均生存率分別為46.3%和39.6%。Tiam1表達陽性者的半數生存期是20.000(個月), 胃癌患者中Tiam1表達陰性者生存優勢明顯強于表達陽性者(χ2=8.659, P=0.003)。見圖1。COX多因素回歸分析顯示Tiam1蛋白表達陽性具有顯著的生存危險, 是獨立的生存期預測因子。

3 討論

本研究發現, 在胃癌組織、癌旁組織及正常對照中Tiam1均有表達, 研究結果與續薇等［3］一致。在胃癌組織中, Tiam1的表達陽性率(85.7%)明顯高于其在癌旁組織(74.1%)和正常對照組(16.7%)的表達(P均＜0.05)；癌旁組織和正常對照組的Tiam1表達相比, 差異有統計學意義(P＜0.001)。因此Tiam1很有可能是胃癌的早期分子事件, 其表達在胃癌的發生、發展以及惡性轉化中起促進作用。

在結腸癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、喉癌等多種惡性腫瘤組織中, Tiam1呈陽性表達, 并與其分化程度、侵襲轉移密切相關［4-7］。本研究發現Tiam1蛋白陽性表達率隨胃癌組織分化程度的降低、浸潤深度的增加及伴有淋巴結轉移的發生呈逐漸增強趨勢, 差異有統計學意義(P＜0.05或P＜0.01)。因為Tiam1是Rac1的特異性鳥苷酸轉換因子(GEF), 能夠促進二磷酸鳥苷(GDP)的釋放以及三磷酸鳥苷(GTP)的結合,進而激活Rac1, 再經激酶等信號分子轉導, 激活下游分子,實現調節細胞骨架結構重組, 影響細胞的形體極化過程, 促進細胞運動和遷移, 并進一步誘導腫瘤細胞的侵襲轉移, 參與基因表達調控、細胞增殖與凋亡等。

本試驗發現胃癌原發灶與其對應的淋巴結轉移灶的Tiam1表達差異有統計學意義(P＜0.05)。惡性腫瘤雖然是從發生惡性轉化的細胞單克隆性增值而來, 但在生長過程中,經過多次分裂繁殖產生的子代細胞可出現不同的基因改變或其他大分子的改變, 考慮與腫瘤的異質性有關, 其生長速度、侵襲能力、對生長信號的反應等方面有差異。從Kaplan-Meier生存曲線中, 可以發現Tiam1表達與患者的生存期密切相關, Tiam1表達陽性患者具有顯著生存危險。COX多因素回歸分析表明, Tiam1表達可作為胃癌獨立的預后預測因子, 其與患者的生存期緊密相關, 有助于預期胃癌患者的預后。但有關Tiam1蛋白表達與其他基因間可能存在的調控影響及機制尚須進一步研究。

［1］ Mertens AE, Roovers RC, Collard JG. Regulation of Tiam1-Rac signaling. FEBS Lett.2003, 546(1):11-16.

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［3］ 續薇, 劉力華, 張明威, 等. Tiam1-Rac1 信號轉導通路及其表達量值水平與胃癌惡性表型的相關性研究.中國實驗診斷學.2007.11(4):462-467.

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Expression of Tiam1 in gastric cancer tissue and its relationship with clinicopathologic characteristics and survival time

WANG Juan-xia, ZHOU Yong-ning, ZOU Shao-jing, et al.
Department of Hepatopathy, The Second Hospital of Lanzhou University, Lanzhou 730030, China

Objective To investigate effect of Tiam1 in gastric cancer tissue in occurrence and progress of gastric cancer. Methods Immunohistochemistry combined with tissue microarray were applied in detection of Tiam1 expression i.189 gastric cancer tissue cases, 54 adjacent tissue cases.30 normal tissue cases, and 59 corresponding lymphonodus. Results The positive rates of Tiam1 expression in gastric cancer tissue, adjacent tissue, and normal gastric mucosa were respectively 85.7%, 74.1% an.16.7%, and their difference had statistical significance (χ2=67.448, P＜0.001). Tiam1 expression was closely related with lymphatic metastasis, differentiated degree, and infiltration depth (P＜0.05). The positive rate of primary Tiam1 expression in gastric cancer (85.0%) was higher than corresponding lymphatic metastasis (65.0%) (χ2=4.267, P＜0.05). Positive Tiam1 expression showed remarkably survival risk, and that was an independent survival predictor. Conclusion Tiam1 expression is closely related with clinicopathologic characteristics. Its expression way has close correlation with survival time of patients, and it can be taken as the independent survival predictor.

Gastric cancer tissue; Tiam1 protein; Immunohistochemistry; Clinicopathologic characteristics; Survival time

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.32.001

2015-07-17］

國家自然科學基金(項目編號：30872478)

730030 蘭州大學第二醫院肝病科(王娟霞)；蘭州大學第一醫院消化內科(周永寧 鄒紹靜 任濤文)；甘肅省武威腫瘤醫院(張志鎰)

周永寧