廈門禽類標(biāo)本禽流感病毒檢出率的相關(guān)因素分析

蘇成豪，顏玉炳，劉紅蓮，蔣麗娜，沈惠燕

廈門禽類標(biāo)本禽流感病毒檢出率的相關(guān)因素分析

蘇成豪，顏玉炳，劉紅蓮，蔣麗娜，沈惠燕

目的 探索廈門禽類標(biāo)本禽流感病毒陽性檢出率的相關(guān)因素。方法 在2011年1月-2014年7月間，收集廈門市禽類外環(huán)境標(biāo)本，采用熒光定量RT-PCR方法對標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測，分析禽流感病毒陽性檢出率的相關(guān)因素。結(jié)果 593份標(biāo)本中，檢出禽流感陽性178份，陽性率為30%，來源于城鄉(xiāng)活禽市場的標(biāo)本高于家禽規(guī)模養(yǎng)殖場和家禽散養(yǎng)戶的標(biāo)本，禽類飲水、清洗禽類污水、籠具表面擦拭標(biāo)本和案板表面擦拭標(biāo)本陽性率較禽類糞便標(biāo)本高，第一季度標(biāo)本的陽性率高于其余季度的標(biāo)本，標(biāo)本送檢及時，陽性率越高。結(jié)論 監(jiān)測場所、標(biāo)本種類、標(biāo)本采集時間、標(biāo)本送檢是否及時與禽流感病毒陽性檢出率相關(guān)。

外環(huán)境；禽流感病毒；陽性率；相關(guān)因素

近年來，人禽流感疫情日益受到關(guān)注，各地普遍加強了禽類外環(huán)境禽流感病原學(xué)監(jiān)測工作, 通過及時分析H5N1、H7N9等禽流感病毒在外環(huán)境的分布及變異情況，為流感大流行的預(yù)警提供了依據(jù)。禽類外環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒陽性檢出率受到多種因素的影響，為提高監(jiān)測的準(zhǔn)確性，進(jìn)而為防控提供可靠的依據(jù)，特將本地區(qū)近幾年來的監(jiān)測情況進(jìn)行分析，報告如下。

1 材料與方法

1.1 監(jiān)測點的設(shè)置 據(jù)每年中國疾病預(yù)防控制中心《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測方案(2011 年版)》的要求，在廈門市6個區(qū)均設(shè)立了監(jiān)測點，監(jiān)測場所類型包括城鄉(xiāng)活禽市場、家禽散養(yǎng)戶集中地、家禽規(guī)模養(yǎng)殖場。

1.2 監(jiān)測時間 2011年1月-2014年7月間，按每年監(jiān)測方案要求按月或按季度定期開展禽類外環(huán)境標(biāo)本采樣，每次監(jiān)測提前幾天了解監(jiān)測點的情況，避免在監(jiān)測點消毒后2 d內(nèi)采樣。在甲型H7N9禽流感疫情流行期間，部分月份開展了應(yīng)急監(jiān)測，所采集的標(biāo)本也納入分析。

1.3 標(biāo)本采集及信息錄入 每次采集各類標(biāo)本包括籠具表面擦拭子、宰殺或擺放禽肉案板表面擦拭子、糞便、清洗禽類的污水、禽類飲用水等，填寫“環(huán)境標(biāo)本采樣登記表”錄入國家“傳染病監(jiān)測技術(shù)平臺信息管理系統(tǒng)”。

1.4 標(biāo)本運輸、處理 要求所有標(biāo)本采集后在4 ℃條件下、48 h內(nèi)運送至網(wǎng)絡(luò)實驗室。實驗室收到標(biāo)本后應(yīng)立即進(jìn)行標(biāo)本處理，并將標(biāo)本分裝為3份，1份用于核酸檢測，1份留樣保存，1份備送國家流感中心進(jìn)行復(fù)核。留樣標(biāo)本要求在-70 ℃或以下保存。

1.5 實驗室檢測 網(wǎng)絡(luò)實驗室收到標(biāo)本后1周內(nèi)對標(biāo)本進(jìn)行流感病毒A型和B型核酸檢測，A型流感病毒核酸陽性標(biāo)本進(jìn)一步進(jìn)行H5、H7、H9、N1、N2、N7亞型檢測，對2013年4月份以后采集的標(biāo)本進(jìn)行H7N9核酸檢測。以上任何一種核酸檢測結(jié)果為陽性即判定結(jié)果陽性。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 從“傳染病監(jiān)測技術(shù)平臺信息管理系統(tǒng)”中導(dǎo)出監(jiān)測數(shù)據(jù)，建立Excel數(shù)據(jù)庫，利用SAS9.1軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，定性資料采用卡方檢驗或趨勢卡方檢驗，多重比較采用卡方分割法，多因素分析用PROC GENMOD命令擬合負(fù)二項回歸分析模型,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 總體監(jiān)測情況分析 共收集禽類外環(huán)境標(biāo)本593份，檢出禽流感陽性標(biāo)本178份，陽性率為30%，其中H9陽性124份(占69.7%)，H5陽性14份(占7.9%)，H7陽性3份(占1.7%)，H5和H9交叉陽性3份(占1.7%)，H7和H9交叉陽性25份(占14.0%)，未分型9份(占5.1%)。

2.2 不同地區(qū)監(jiān)測結(jié)果分析 海滄、湖里、集美、思明、同安和翔安六個區(qū)的禽流感病毒陽性檢出率分別為32.6%(46/141)、31.6%(30/95)、31.3%(31/99)、31.3%(40/128)、28.3%(17/60)和20.0%(14/70)，雖略有差異，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.16，P=0.526)。

2.3 不同監(jiān)測場所監(jiān)測結(jié)果分析 不同監(jiān)測場所禽流感病毒陽性檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=48.20，P<0.001)，城鄉(xiāng)活禽市場的陽性率高達(dá)36.2%(175/483)，遠(yuǎn)大于家禽散養(yǎng)戶集中地的5%(3/60)和家禽規(guī)模養(yǎng)殖場0%(0/50)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)，而家禽散養(yǎng)戶集中地和家禽規(guī)模養(yǎng)殖場比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.249)。

2.4 不同標(biāo)本類型監(jiān)測結(jié)果分析 不同標(biāo)本類型禽流感病毒陽性檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=18.37，P=0.001)，糞便標(biāo)本的陽性率為20.9%(54/258)，低于籠具表面擦拭標(biāo)本的38.4%(58/151)、禽類飲水的35.4%(35/99)、清洗禽類的污水的34.8%(16/46)和案板表面的擦拭標(biāo)本的38.5%(15/39)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，其余標(biāo)本的兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.5 不同季度監(jiān)測結(jié)果分析 不同季度禽流感病毒陽性檢出率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=45.62，P<0.001)，其中第一季度的陽性率最高46.8%(89/190)，其次為第三季度33.7%(31/92)，而第二季度和第四季度標(biāo)本的陽性率相對較低分別為19.5%(45/231)和16.3%(13/80)。兩兩比較顯示，除第二季度和第四季度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義外(P>0.05)，其余各組兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

2.6 采樣至檢測時間間隔與禽流感病毒陽性檢出率的相關(guān)分析 標(biāo)本采樣、送檢、檢測3個環(huán)節(jié)的時間間隔越長，禽流感病毒陽性檢出率越低，趨勢卡方檢驗顯示，3個變化趨勢均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。

2.7 外環(huán)境禽流感陽性檢出率相關(guān)因素的負(fù)二項回歸分析 以上述單因素分析提到的7個變量為自變量，采用負(fù)二項回歸分析的方法確定外環(huán)境禽流感陽性檢出率的獨立相關(guān)因素，結(jié)果見表1。監(jiān)測場所、標(biāo)本類型、采樣時間、采樣至送檢時間間隔是外環(huán)境禽流感病毒陽性檢出率的獨立相關(guān)因素。

3 討 論

流感病毒實驗室檢測最常用的方法是Real time RT-PCR[1]，它具有較高的靈敏度和特異度且操作簡單、快捷，基于該檢測方法從監(jiān)測地區(qū)、監(jiān)測場所、標(biāo)本種類、采樣時間及采樣至檢測時間間隔等方面探討外環(huán)境禽流感病毒檢出率的相關(guān)因素。此外，標(biāo)本檢測人員、檢測試劑及儀器的一致性最大程度保證了不同批次標(biāo)本的檢測基礎(chǔ)條件的可比性。

規(guī)模化養(yǎng)殖場與家禽散養(yǎng)戶集中的地區(qū)的禽類外環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒陽性檢出率較低，這與該類場所禽類大多在出生后即接種了禽流感疫苗，導(dǎo)致機體平均免疫抗體水平較高有關(guān)，而城鄉(xiāng)活禽市場外環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒陽性檢出率較高，這與王英[2]、王喜云[3]、孫曉強[4]等人的研究結(jié)果一致，主要原因與該場所動物種類和來源復(fù)雜多樣，外環(huán)境消毒不到位，一些非高致病的禽流感病毒(如H7N9，H9N2)利于在狹小密集的籠具或存欄內(nèi)迅速傳播，導(dǎo)致活禽市場成為甲型流感病毒傳播及重組的主要病毒庫有關(guān)，這與目前人感染高致病性禽流感患者的禽類暴露來源主要是城鄉(xiāng)活禽市場而非規(guī)模化養(yǎng)殖場或家禽散養(yǎng)戶集中地是基本一致的。

表1 外環(huán)境禽流感陽性檢出率相關(guān)因素的負(fù)二項回歸分析Tab.1 Analysis on positive rate of avian influenza virus in external environment by Negative Binomial Regression

糞便標(biāo)本的禽流感病毒陽性檢出率最低，這與國內(nèi)其他地區(qū)的監(jiān)測結(jié)果基本一致[5-9]，這可能與禽流感病毒為呼吸道傳播病毒，動物糞便標(biāo)本病毒載量小，且糞便標(biāo)本不利于禽流感病毒長期保存有關(guān)。禽類飲水、籠具表面擦拭標(biāo)本、清洗禽類污水和案板表面擦拭標(biāo)本的禽流感病毒陽性檢出率相對較高，這與該類標(biāo)本易于受禽類呼吸道分泌物污染有關(guān)。此外，本研究發(fā)現(xiàn)，糞便陽性標(biāo)本中，大多為單一病毒，而檢出的含有多種禽流感病毒的標(biāo)本大多來自其它類型的標(biāo)本，提示其它類型的標(biāo)本較糞便標(biāo)本更易受不同動物的交叉污染，導(dǎo)致陽性檢出率較高。

廈門市第一季度禽類外環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒陽性檢出率最高，這與本地區(qū)人感染高致病性禽流感的時間分布基本一致，提示春節(jié)前后，是該地區(qū)人感染高致病性禽流感防控的關(guān)鍵時間點。

根據(jù)《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測方案(2011 年版)》要求，所有禽流感外環(huán)境標(biāo)本采集后應(yīng)當(dāng)在48 h內(nèi)運送至相應(yīng)的流感監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)實驗室，保存溫度為4 ℃以下；如未能48 h內(nèi)送至實驗室的，應(yīng)當(dāng)置-70 ℃或以下保存，而在廈門市各監(jiān)測點均不具備-70 ℃或以下保存條件，因此導(dǎo)致采樣至送檢時間超過2 d的標(biāo)本陽性檢出率較低，因此保證送檢的及時性是提高標(biāo)本陽性檢出率的一個重要舉措。

綜上所述，為提高禽類外環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒的陽性檢出率，在滿足監(jiān)測方案要求的前提下，適當(dāng)提高城鄉(xiāng)活禽市場禽類飲水、籠具表面擦拭標(biāo)本、清洗禽類污水和案板表面擦拭標(biāo)本所占的比重，在保存條件未能改善的情況下，所有標(biāo)本要在48 h內(nèi)帶冰送檢。

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Related factors on positive rate of avian influenza virus in external environment of poultry, Xiamen, China

SU Cheng-hao,YAN Yu-bing,LIU Hong-lian,JIANG Li-na,SHEN Hui-yan

(XiamenCentreforDiseasePreventionandControl,Xiamen361021,China)

We explored related factors on positive rate of avian influenza virus in external environment of poultry in Xiamen, China. During January 2011 to July 2014, 593 samples were collected from Avian Influenza Surveillance Network in Xiamen City, and related information was recorded. Real-time RT-PCR was applied to detect the nucleic acid of avian influenza virus and related factors of positive rate of avian influenza virus were analyzed. Results showed that 178 samples of 583 were found to have avian influenza virus, the positive rate was 30%, of which samples from live birds markets in urban and rural regions were higher than those from poultry farms and scatter-feed household, the rate of poultry drinking water, poultry wastewater, wipe samples from cage surface and chopping board was higher than poultry manure; samples collected in the first quarters were higher than those collected in other quarters; the corresponding rate was increased with the timeliness between sampling and submission. It’s concluded that monitoring locations, sample type, the collection time of samples, and timeliness between sampling and submission are the related factors on positive rate of avian influenza virus.

external environment; avian influenza virus; positive rate; related factors

廈門市疾病預(yù)防控制中心，廈門 361021； Email ：1272208372@qq.com

10.3969/j.issn.1002-2694.2015.11.014

R378

A

1002-2694(2015)11-1054-04

2015-02-05；

2015-08-13