原發性腎病綜合征與血小板活化因子水解酶的相關性分析*

田 魯，胡亞琳，操 軒

(湖北省黃石市中心醫院腎內科，湖北 黃石 435000)

PNS臨床并不少見，其已成為腎小球疾病中最為常見類型。PNS發病機制并未十分明確，該病主要因腎小球濾過膜對蛋白等通透性增高，進而致蛋白大量丟失，引起一系列生理及病理變化［1］。PNS以蛋白尿、低蛋白血癥、血脂升高及水腫等為主要臨床表現，其病情進展嚴重影響患者的生活質量，并威脅人民生命健康。隨著臨床研究深入，發現PAF－AH水平變化與PNS發生發展具有密切關聯，且與激素治療療效具有密切關聯。血小板活化因子可促進免疫復合物沉積，降低腎小球率過濾及激活炎癥細胞釋放炎性物質，增強濾過膜通透性，PAF－AH為血小板活化因子水解酶，其水平變化對病情進展具有重要意義［2，3］。本研究旨在探討PAF－AH與PNS之間相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選擇本科室收治的初治PNS患者48例及同期健康體檢人員30例入選本研究，均經研究對象及家屬知情同意，且符合倫理委員會基本要求。48例PNS患者依據病理類型分為STNS組31例，男16例，女15 例，年齡 2～14 歲，平均(8.2±3.4)歲;NTNS組 17例，男10例，女7 例，年齡3～13 歲，平均(7.8±3.1)歲。48例患者確診后均經激素治療，并觀察6個月，根據其對激素敏感程度分為SSNS組19例，男10例，女 9 例，年齡 2～11 歲，平均(7.9±3.0)歲;SRNS 組15 例，男 9例，女 6 例，年齡 3～13 歲，平均(8.3±3.5)歲;SDNS組14例，男7例，女7例，年齡2～12歲，平均(7.7±3.3)歲。30例健康人員作為對照組，年齡 3～15 歲，平均(8.4±3.5)歲。經分析，STNS 組、NTNS 組、健康對照組之間以及SSNS組、SRNS組、SDNS組、健康對照組之間一般資料如年齡、性別構成等比較無統計學差異，均 P＞0.05.

1.2 診斷標準:①原發性腎病綜合征診斷標準依據2001年全國兒科腎病組《小兒腎小球疾病的臨床分類、診斷及治療》制定相關診斷標準:大量蛋白尿，24h尿蛋白含量≥50mg/Kg，血漿白蛋白＜30g/L，血漿膽固醇＞5.7mmoL/L，伴有不同程度水腫［4］。②激素敏感診斷標準:激素敏感型激素治療≤8周尿蛋白轉陰;激素耐藥型激素治療8周尿蛋白仍表現未陽性患者;激素依賴型患者對激素敏感，減量治療或者停藥后1個月復發，且重復兩次以上者［5］。

1.3 病例納入標準:①符合PNS診斷標準;②初治患者，且未應用激素治療;③簽署知情同意。

1.4 病例排除標準:①繼發性NS;②合并先天性心臟病、腫瘤、嚴重肝功能下降患者;③癲癇等精神病史患者。

1.5 方 法

1.5.1 標本采取:48例PNS患者及30例健康人員均于激素治療前抽取外周血2mL，應用復方枸櫞酸鈉ACD抗凝，靜置，提取上清液，置于－20°C冰箱內保存。

1.5.2 PAF－AH 測定:具體操作嚴格按照 PAF－AH 試劑盒(購自美國Cayman公司)說明書進行，①設置無酶對照孔(空白孔)2孔，加入10ul DTNB及15ul化驗用緩沖液;②設置2孔陽性對照孔，加入10ul DTNB及10ul PAF－AH、5ul化驗用緩沖液;③設置樣品孔，每樣本3孔，加10ul DTNB及10ul樣品、5ul緩沖液，加入PAF－AH且應使每 min增加的吸光度值于 0.01～0.1之間;④加入200ul底物溶液于每孔，均勻震搖30s，混勻;⑤于讀板儀上414處讀取一個時間周期吸光度值(至少5個時間點的值)，兩個時間點最小值測定酶活性;⑥PAF－AH計算:使用酶水解底物顯色法檢測，于分光光度計上讀取不同時間A值，并于讀板儀414出讀取一個周期吸光度值，計算PAF－AH活性。

1.6 觀察指標:①觀察不同類型腎病綜合征患者血小板活化因子水解酶差異;②觀察激素敏感性不同患者血小板活化因子水解酶差異;③分析不同類型原發性腎病綜合征與血小板活化因子水解酶之間相關性。

1.7 統計學處理:采用SPSS13.0統計軟件進行統計分析，采用χ2檢驗計數資料，計量資料以(±s)表示，并采取t檢驗，PAF－AH活性與原發性腎病綜合征關系采取perason相關分析，P＜0.05，統計學差異顯著。

2 結果

2.1 不同類型腎病綜合征患者血小板活化因子水解酶差異分析:STNS組 PAF－AH 活性為(51.9±8.3)umoL·min－1·L－1，均高于 NTNS 組及健康對照組，均P＜0.05;且NTNS組PAF－AH活性高于健康對照組，均 P＜0.05。見表 1。

表1 不同類型腎病綜合征患者血小板活化因子水解酶差異分析(±s)

表1 不同類型腎病綜合征患者血小板活化因子水解酶差異分析(±s)

tSTNS NTNS=6.351;tSTNS對照組 =19.656;tNTNS對照組 =11.754;P＜0.05

組別 例數 PAF－AH(umoL·min－1·L STNS 組 31 51.9±8.3 NTNS 組 17 37.1±6.5對照組 30 17.8±4.7 F 21.896

2.2 激素敏感性不同患者血小板活化因子水解酶差異分析:SSNS 組 PAF－AH 活性為(56.7±8.9)umoL/min·L，均高于 SRNS 組、SDNS 組、對照組，P＜0.05，且SRNS組、SDNS組PAF－AH活性均高于對照組，P＜0.05。見表2。

表2 激素敏感性不同患者血小板活化因子水解酶差異分析(±s)

表2 激素敏感性不同患者血小板活化因子水解酶差異分析(±s)

tSSNS SRNS=4.762;tSSNS SDNS=7.705;tSSNS對照組 =20.009;tSRNS SDNS=3.569;tSRNS對照組=15.414;tSDNS對照組=10.509;P＜0.05

組別 例數 PAF－AH(umoL·min－1·L－1)SSNS 組 19 56.7±8.9 SRNS 組 15 43.7±6.4 SDNS 組 14 35.4±6.1對照組 30 17.8±4.7 F 29.854

2.3 不同類型原發性腎病綜合征與血小板活化因子水解酶活性之間相關性分析:經perason分析，PAFAH活性與原發性腎病綜合征之間有明顯相關分析，其中，rSTNS=0.618;rNTNS=0.524;rSSNS=0.717;rSRNS=0.567.;rSDNS=0.327，P＜0.05。

3 討論

原發性腎病綜合征發病機制并未明確，可分為STNS及NTNS。目前，臨床主要以STNS多見，病理類型主要為微小病變腎炎，NTNS主要見于學齡期兒童，病理類型主要為非微小病變腎炎［6～8］。PNS嚴重影響患者生活質量，并威脅機體健康。臨床針對PNS，多采取糖皮質激素治療。相關研究表明，不同類型PNS對激素治療反應并不一致，STNS多為激素完全效應，而NTNS多位部分效應，或無反應［9］。患者對激素治療敏感性不一致，不利于無反應類型患者治療。因此，研究PNS發病機制及不同類型對激素治療敏感性差異機制極為必要，以期對臨床干預提供可能性指導。

隨著臨床研究深入，發現血小板活化因子(platelet activating factor，PAF)在PNS疾病進展中起著重要作用［10］。相關研究表明，PAF可促進免疫復合物沉積、降低腎小球率過濾及誘導炎癥細胞腎內浸潤等，增加腎小球基底膜對蛋白的通透性。有報道表明，PAF水平與PNS活動密度具有密切關聯。PAF－AH可水解PAF，使其失活，對維持PAF機體內水平具有重要作用，因此，PAF－AH水平變化對PNS發生發展具有重要意義。相關研究表明，PAF通過改變膜通透性參與PNS進展，其甘油骨架sn－2位置的乙酰基團為其生物學活性的重要基團及活性中心，而PAF－AH可水解PAF的sn－2位置的乙酰基團，進而降解異常表達的PAF。本研究經測定不同類型PNS患者PAF－AH活性，結果表明，STNS組及NTNS組均高于健康對照組，且STNS組患者高于NTNS組，與國外研究較為一致。PNS患者PAF－AH活性增高，可能因PAF激活PAFAH啟動子相關，導致活性升高。NTNS組PAF－AH活性低于STNS組，導致PAF降解不完善，此可能為NTNS患兒腎臟損傷嚴重，且臨床干預較難取的較佳效果原因之一。本研究進一步測定對激素敏感性不一致患者PAF－AH活性差異，結果表明SSNS組高于SRNS組、SDNS組、對照組，相關研究表明，此可能與激素激活PAF－AH活性相關，導致PAF降解理想，疾病更易控制。SDNS組患者PAF－AH活性低于SSNS組，可能為機體內PAF增高，但PAF－AH活性相對不足，需更多外源性PAF－AH活性才能完全降解，故表現為激素治療仍然敏感，但減量或停藥后病情反復。本研究經perason分析，PAF－AH活性與不同類型原發性腎病綜合征之間有明顯相關，表明不同類型PNS患者機體內PAF－AH活性不一致。

［1］ 崔玉波.霉酚酸酯治療原發性腎病綜合征的臨床療效及對尿蛋白的影響［J］.中國基層醫藥，2014，9(8):1189～1190.

［2］ 薛邦錄，劉彤，劉毅，等.原發性腎病綜合征患者脂蛋白(a)等脂質的變化與分析［J］.檢驗醫學與臨床，2005，7(3):110～111.

［3］ 吳健，張雄，袁成林，等.脂蛋白相關磷脂酶 A2基因Val279Phe和Ile198Thr突變與腦梗死的相關性［J］.國際腦血管病雜志，2011，19(6):437～441.

［4］ 周維燕，潘斌斌，杜新.原發性腎病綜合征繼發甲狀腺功能異常的機制及治療［J］.國際內分泌代謝雜志，2012，32(6):418～420.

［5］ Prerna Rastogi，Alice Rickard，David J，et al.Klumpp urothelial cell platelet－activating factor production is mediated via calcium－independent phospholipase A2γ［J］.Published in final edited form as:Urology，2011，77(1):248.

［6］ Neesha Hussain，J Anastasia Zello，Jovanka Vasilevska－Ristovska，et al.The rationale and design of Insight into nephrotic syndrome:investigating genes，health and therapeutics(INSIGHT):a prospective cohort study of childhood nephrotic syndrome［J］.BMC Nephrol，2013，14(18):25～28.

［7］ 李紹梅，薛雯，溫文龍，等.原發性腎病綜合征合并急性腎損傷患者尿中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白和腎損傷因子1的變化及其意義［J］.中國綜合臨床，2013，29(12):1287～1290.

［8］ Lionel C Clement，Camille Mace，Carmen Avila－Casado，et al.Circulating angiopoietin－like 4 links proteinuria with hypertriglyceridemia in nephrotic syndrome［J］.Published in final edited form as:Nat Med，2014，20(1):37～46.

［9］ 夏天保，李杰，婁曉同，等.上海地區漢族健康人群血小板活化因子乙酰水解酶基因7號外顯子593位點T/C單核苷酸多態性的研究［J］.解放軍醫學雜志，2012，37(8):815～818.

［10］ Bryce A，Kerlin，Rose Ayoob，Smoyer.Epidemiology and pathophysiologyofnephroticsyndrome– associated thromboembolic disease［J］.Clin Am Soc Nephrol，2012，7(3):513～520.