老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原G-6A位點基因多態性的相關性研究

王毅鵬，金醒昉，何 燕，楊文慧，魏云鴻

·論著·

老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原G-6A位點基因多態性的相關性研究

王毅鵬，金醒昉，何 燕，楊文慧，魏云鴻

目的 探討老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原(AGT)基因G-6A位點基因多態性的關系。方法 選擇2010年12月—2013年11月昆明市延安醫院干療/老年病科及云南省精神病院收治的老年高血壓患者400例，根據患者是否并發抑郁癥分為高血壓并抑郁癥組和高血壓組，各200例；另選取同期就診于昆明市延安醫院體檢中心的200例老年體檢健康者作為健康對照組。采用基因測序方法檢測AGT基因G-6A位點基因多態性。結果 (1)高血壓并抑郁癥組和高血壓組AGT基因G-6A位點G/G基因型所占比例高于健康對照組、A/A基因型所占比例低于健康對照組，高血壓并抑郁癥組AGT基因G-6A位點GG基因型所占比例高于高血壓組(P<0.05)。(2)高血壓并抑郁癥組和高血壓組等位基因頻率分布分別與健康對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，OR(95%CI)分別為3.389(2.475，4.651)、2.336(1.698，3.215)；高血壓并抑郁癥組和高血壓組等位基因頻率分布比較，差異有統計學意義(P<0.05)，OR(95%CI)為1.452(1.094，1.928)。結論 AGT基因G-6A位點基因多態性與老年高血壓并抑郁癥遺傳易患性有關，攜帶AGT基因G-6A位點G/G基因型及G等位基因的高血壓患者患抑郁癥的風險較高，攜帶AGT基因G-6A位點A/A基因型及A等位基因的人群患高血壓及高血壓并抑郁癥的風險較低。

血管緊張素原；老年人；高血壓；抑郁癥；基因多態性

國內外眾多研究發現，抑郁癥與心血管疾病有關，特別是與高血壓關系密切[1]。流行病學研究表明，高血壓與抑郁癥的發生發展有關，心血管疾病患者常伴有抑郁癥狀，其中高血壓患者抑郁癥患病率明顯增高[2]。目前，隨著社會老齡化進程加快，老年人口數量日益增多，人均壽命明顯延長，老年高血壓合并抑郁癥的發生率越來越高，但其發生機制尚不明確。高血壓和抑郁癥均具有明顯的家族聚集性，提示高血壓和抑郁癥的發病機制可能與遺傳有關。有研究顯示，血管緊張素原(Angiotensinogen，AGT)基因多態性與高血壓有關，與抑郁癥可能也有關，但其在老年高血壓并抑郁癥的發生發展中發揮著怎樣的作用目前尚不明確。因此，本研究對老年高血壓并抑郁癥與AGT基因 G-6A位點基因多態性的相關性進行研究，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2010年12月—2013年11月昆明市延安醫院干療/老年病科及云南省精神病院收治的老年高血壓患者400例，根據患者是否并發抑郁癥分為高血壓并抑郁癥組和高血壓組，各200例，均為昆明地區漢族人。高血壓的診斷參照第7版《內科學》中的相關診斷標準，抑郁癥的診斷參照第3版《國際精神與行為障礙分類診斷標準(ICD-10)》中的相關診斷標準，均排除腦意外急性期、近期有手術、創傷或精神性創傷等應激狀態、精神分裂癥等其他精神疾病、繼發性高血壓、感染、肝腎功能不全、自身免疫性疾病及腫瘤、試驗前1周服用過血管緊張素轉化酶抑制劑和血管緊張素受體阻滯劑患者。另選取同期就診于昆明市延安醫院體檢中心的200例老年體檢健康者作為健康對照組，排除高血壓、腦梗死、神經疾病、心理疾病、自身免疫性疾病、癌癥及其他慢性疾病。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集 采用乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA)抗凝管，取受檢者空腹(禁食12 h后)靜脈血2 ml，置于-80 ℃冰箱中保存，為提取基因組DNA做準備。

1.2.2 DNA的提取 采用AXYGEN公司“AxyPrep血基因組DNA試劑盒”從收集到的全血標本中提取基因組DNA，保存于-80 ℃冰箱中。

1.2.3 目的片段聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction，PCR) (1)根據AGT基因G-6A位點特征，用軟件Primer 5.0設計引物序列，交由上海生物工程有限公司(Sangon)合成引物，G-6A位點上游引物序列為5′-ATCTGGCTGTGCTATTGTTGG-3′，下游引物序列為5′-ACATCTGAGAGAGACAAGACCGA-3′，PCR目的片段長度為706 bp。(2)PCR：選用25 μl PCR體系，由PCR Master Mix(2×)12.5 μl(Fermentas公司)、上下游引物各0.5 μl、DNA模板3 μl、滅菌無核酸酶水8 μl組成，放置于梯度PCR儀(美國BIO-RAD公司)中進行反應，PCR條件為95 ℃變性5 min后，按94 ℃變性30 s，58 ℃退火35 s，72 ℃延伸40 s，以上三步循環35次，最后72 ℃延伸5 min。PCR完成后用瓊脂糖凝膠電泳對PCR產物進行檢驗。

1.2.4 PCR產物純化 將PCR產物用AxyPrep PCR清潔試劑盒(Axygen公司)進行純化。

1.2.5 基因測序 將純化后的PCR產物送到上海生物工程有限公司進行基因測序，儀器為ABI-PRISM3730，試劑為BigDyeterminator v3.1。

2 結果

2.1 3組基本資料比較 3組受檢者性別、年齡、FBG、TC、TG及LDL-C比較，差異無統計學意義(P>0.05)；3組受檢者HDL-C和UA比較，差異有統計學意義(P<0.05，見表1)。

表1 3組基本資料比較

注：FBG=空腹血糖，TC=總膽固醇，TG=三酰甘油，LDL-C=低密度脂蛋白膽固醇，HDL-C=高密度脂蛋白膽固醇，UA=血尿酸；與高血壓并抑郁癥組比較，*P<0.05；與高血壓組比較，△P<0.05

2.2 基因型分析 PCR目的產物電泳后，紫外線燈下可見706 bp長度電泳條帶(見圖1)。基因測序見AGT基因G-6A位點的3種基因型(見圖2)。3組受檢者AGT基因G-6A位點基因型分布和等位基因頻率分布比較，差異有統計學意義(P<0.05)；其中高血壓并抑郁癥組和高血壓組AGT基因G-6A位點G/G基因型所占比例高于健康對照組、A/A基因型所占比例低于健康對照組，高血壓并抑郁癥組AGT基因G-6A位點G/G基因型所占比例高于高血壓組，差異有統計學意義(P<0.05)。高血壓并抑郁癥組和高血壓組等位基因頻率分布與健康對照組比較，差異有統計學意義(χ2值分別為60.330、27.758，P<0.05)，OR(95%CI)分別為3.389(2.475，4.651)、2.336(1.698，3.215)；高血壓并抑郁癥組和高血壓組等位基因頻率分布比較，差異有統計學意義(χ2=6.697，P=0.010)，OR(95%CI)為1.452(1.094，1.928)。

表2 3組AGT基因G-6A位點基因型及等位基因頻率分布比較

〔n(%)〕

Table 2 Comparison of frequency distribution of genotype and allele about AGT gene G-6A site among 3 groups

組別例數基因型A/A A/G G/G等位基因頻率A G健康對照組200128(64 0)65(32 5)7(3 5)321(80 3)79(19 7)高血壓組20070(35 0)?114(57 0)16(8 0)?254(63 5)?146(36 5)高血壓并抑郁癥組20040(20 0)?▲138(69 0)22(11 0)?▲218(54 5)?▲182(45 5)χ2值84 25660 953P值0 0000 000

注：與健康對照組比較，*P<0.05；與高血壓組比較，▲P<0.05

圖1 AGT基因G-6A位點PCR擴增目的片段的瓊脂糖凝膠電泳結果

Figure 1 Results of agarose gel electrophoresis about AGT gene G-6A site PCR amplification fragment

圖2 AGT基因G-6A位點基因測序結果

3 討論

原發性高血壓簡稱高血壓，是以血壓升高為主要臨床表現的綜合征，其伴或不伴有多種心血管疾病危險因素。血壓升高將影響多種重要臟器的結構與功能，導致臟器功能衰竭，到目前為止高血壓仍是心血管疾病死亡的主要原因之一[2]。臨床流行病學研究發現，高血壓患者中抑郁癥發病率明顯升高，提示高血壓與抑郁癥間具有重要聯系[3-4]。隨著社會老齡化進程的加快，老年人口數量日益增多，同時人們生活節奏加快、壓力增加，導致老年高血壓并抑郁癥的發生率越來越高。張帆等[5]對2 274例高血壓患者進行調查，發現抑郁癥發生率為5.7%；馬麗娜等[6]研究結果顯示，老年高血壓患者抑郁癥發生率為38.36%。

腎素-血管緊張素系統(renin-angiotensin system，RAS)在調節水鹽代謝、維持血管張力等方面作用重大[7]，其活性升高在高血壓發生發展中的作用已明確，并有研究顯示其可能增加抑郁癥相關危險[8]。RAS是一個激素系統，主要包括腎素、AGT、血管緊張素轉換酶、血管緊張素Ⅱ1型受體及功能產物血管緊張素Ⅱ。1992年Jeunemaitre等[9]在高血壓同胞配對研究中首次發現AGT基因與高血壓有關。在腎素作用下主要由肝臟合成和釋放的AGT可轉化為血管緊張素Ⅰ，在血管緊張素轉換酶作用下血管緊張素Ⅰ轉換為血管緊張素Ⅱ。血管緊張素Ⅱ與位于靶器官的血管緊張素Ⅱ受體結合可刺激AGT合成增多，使血液循環中AGT水平升高，AGT升高又使血管緊張素Ⅱ生成增加，引起血管收縮，從而導致個體血壓發生改變[10-11]。有研究表明，AGT作為血管緊張素Ⅱ前體，其在腎素、血管緊張素轉化酶等作用下可最終生成血管緊張素Ⅱ[12]。血管緊張素Ⅱ具有縮血管、調節水鹽代謝、增加心肌收縮力和神經系統功能作用，從而引起血壓升高[13]。因此，AGT通過影響血管緊張素Ⅱ產生數量而達到調節血壓的作用。AGT是血管緊張素Ⅱ前體，是RAS系統的唯一底物，血管緊張素Ⅱ水平能隨著AGT水平增加而升高，最終導致血壓升高。

早在2005年Zobel等[14]就指出，焦慮抑郁是一種慢性應激狀態，通過束縛試驗或強迫游泳試驗形成長期慢性應激可建立抑郁癥的動物模型。徐曙等[8]認為，老年抑郁癥患者在慢性應激作用下可激活RAS系統，促使AGT水平升高，最終導致血管緊張素Ⅱ等效應終產物增加。血管緊張素Ⅱ與抑郁焦慮關系的作用機制可能如下：(1)在中樞神經系統中，血管緊張素Ⅱ的主要作用是調節單胺類纖維釋放神經遞質，涉及多巴胺和多巴胺與5-羥色胺(5-HT)平衡的調節；(2)在動物實驗中，血管緊張素轉化酶抑制劑(ACEI)的類似抗抑郁作用可以被納洛酮逆轉，說明血管緊張素Ⅱ與阿片樣受體的作用有關，也說明抑郁與阿片系統功能降低有關[15]。有研究發現，抑郁癥可引起自主神經系統功能和下丘腦-垂體-腎上腺軸功能調節紊亂，從而增加血管緊張性及血管阻力，不利于血壓的控制[16]。

可見，高血壓與抑郁癥的發病均與RAS系統密切相關，而在發現高血壓和抑郁癥具有家族聚集傾向的基礎上，AGT作為RAS的唯一底物，其基因多態性也將成為影響高血壓與抑郁癥發生發展的重要因素。本研究結果顯示，高血壓并抑郁癥組AGT基因G-6A位點G/G基因型及G-6A位點G等位基因分布頻率均高于健康對照組和高血壓組，同時，健康對照組AGT基因 G-6A位點A/A基因型及A等位基因分布頻率均高于高血壓并抑郁癥組和高血壓組。以上結果提示攜帶AGT基因G-6A位點G/G基因型及G-6A位點G等位基因的高血壓患者及健康人群抑郁癥的發病風險較高，攜帶G-6A基因G-6A位點A/A基因型及A等位基因的人群患高血壓及高血壓并抑郁癥的風險較低。通過Genebank查詢AGT基因序列發現，G-6A位點位于核心啟動子區域，推測這個基因位點的基因多態性可能會影響到AGT轉錄的基礎速率，從而使后續翻譯產生的AGT蛋白水平發生差異，從而導致個體血壓、神經系統神經遞質的不同變化，最終影響到高血壓并抑郁癥的發生發展。

總之，AGT基因G-6A位點基因多態性在高血壓及高血壓并抑郁癥的發生發展中具有重要價值，攜帶AGT基因G-6A位點G/G基因型及G等位基因的高血壓患者患抑郁癥的風險較高，攜帶AGT基因G-6A位點A/A基因型及A等位基因的人群患高血壓及高血壓并抑郁癥的風險較低。因此，檢測高血壓患者AGT基因G-6A位點的基因型及等位基因頻率，可以作為預測高血壓患者發生抑郁癥的一項重要指標，為進一步探索高血壓并抑郁癥的發病機制提供了一個新的研究方向。

[1]Patten SB，Williams JVA，Lavorat DH，et al.Major depression as a risk factor for high blood pressure：epidemiologic evidence from a national longitudinal study[J].Psychosomatic Medicine，2009，71(3)：273-279.

[2]陸再英，鐘南山.內科學[M].北京：人民衛生出版社，2009：251-252.

[3]韓晶，殷曉梅，徐斐，等.南京市浦口地區高血壓人群抑郁和焦慮癥狀狀況的病例對照研究[J].中華流行病學雜志，2008，29(2)：125-127.

[4]Cafarov VV，Cromova HA，Cagulin IV，et al.Arterial hypertention，myocardial infarction and stroke：risk of development and psychosocial factors[J].Alaska Med，2007，49(2 Suppl)：117-119.

[5]張帆，胡大一，楊進剛，等.高血壓合并焦慮、抑郁的發病率和相關危險因素分析[J].首都醫科大學學報，2005，26(2)：140-142.

[6]馬麗娜，李耘，馮明，等.老年高血壓患者合并抑郁特點分析[J].精神醫學雜志，2010，23(2)：101-102.

[7]鐘久昌.ACE2 /Ang-(1-7) 信號與高血壓伴發抑郁癥研究現狀[J].遵義醫學院學報，2014，37(3)：241-243.

[8]徐曙，張寧，李箕君，等.抑郁癥患者血漿血管緊張素Ⅱ水平的變化及其相關性研究[J].南京醫科大學學報：自然科學版，2008，28(6)：775-778.

[9]Jeunemaitre X，Soubrier F，Kotelevtsev YV，et al.Molecular basis of hypertension：Role of angiotensinogen[J].Cell，1992，71(1)：169-180.

[10]姚泰，吳博威.生理學[M].6版.北京：人民衛生出版社，2003：123-124.

[11]Dickson ME，Sigmund CD.Genetic basis of hypertension：revisiting angiotensinogen[J].Hypertension，2006，48(1)：14-20.

[12]Wu SJ，Chiang FT，Chen WJ，et al.Three single-nucleotide polymorphisms of the angiotensinogen gene and susceptibility to hypertension：single locus genotype vs.haplotype analysis[J].Physiol Genomics，2004，17(2)：79-86.

[13]趙則祥.人類原發性高血壓發生機制研究進展[J].中國優生與遺傳雜志，2003，11(4)：140-142.

[14]Zobel AW，Nickel T，Sonntag A，et al.Cortisol response in the combined dexamethasone/CRH test as predictor of relapse in patients with remitted depression:a prospective study[J].Psychiatric Res，2001，35(2)：83-94.

[15]徐曙，張寧，李箕君，等.老年抑郁癥血漿腎素、血管緊張素II與醛固酮研究[J].臨床精神醫學雜志，2008，18(2)：85-87.

[16]姚軍，吳文源，李春波.2型糖尿病伴發抑郁癥患者生活質量研究[J].中國行為醫學科學，2006，15(4)：323-325.

(本文編輯：謝武英)

Correlation between Aged Hypertension Complicated with Depression and Angiotensinogen G-6A Gene Polymorphism

WANGYi-peng，JINXing-fang，HEYan，etal.Yan′anHospitalofKunming,Kunming650051，China

Objective To investigate the correlation between aged hypertension complicated with depression and angiotensinogen G-6A gene polymorphism.Methods From December 2010 to November 2013,400 aged hypertension patients were selected in the Department of Geriatrics，Yan′an Hospital of Kunming and Yunnan Provincial Mental Hospital，and they were divided into groups A(with depression)and B(without depression)according to the incidence of depression，each of 200 cases.A total of 200 healthy cases were selected as control group in the Physical Examination Center of Yan′an Hospital of Kunming at the same time.Gene sequencing method was used to detect the angiotensinogen G-6A gene polymorphism.Results The proportion of G/G genotype of groups A and B were higher than that of control group，respectively，while the proportion of A/A genotype was lower，respectively(P<0.05)；the proportion of G/G genotype of A groups was higher than that of B group(P<0.05).There was statistically significant differences of allele frequency among the three groups(P>0.05)，and the OR(95%CI)of groups A and B was 3.389(2.475，4.651)，2.336(1.698，3.215)when compared with control group.There was statistically significant differences of allele frequency between groups A and B(P>0.05)，and the OR(95%CI)of A group was 1.452(1.094，1.928)when compared with B group.Conclusion angiotensinogen G-6A gene polymorphism is correlated with the hereditary susceptibility of aged hypertension complicated with depression，G/G genotype and G allele can increase the risk of depression in hypertension patients，A/A genotype and A allele can reduce the risk of hypertension and hypertension complicated with depression.

Angiotensinogen；Aged；Hypertension；Depressive disorder；Genetic polymorphism

云南省科技廳計劃項目(2010ZC200)：老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原基因多態性的相關性研究

650051云南省昆明市延安醫院

魏云鴻，650051云南省昆明市延安醫院；E-mail：66560309@qq.com

R 544.1 R 749.41

A

10.3969/j.issn.1008-5971.2015.02.013

2014-09-16；

2015-01-21)

王毅鵬，金醒昉，何燕，等.老年高血壓并抑郁癥與血管緊張素原G-6A位點基因多態性的相關性研究[J].實用心腦肺血管病雜志，2015，23(2)：42-45.[www.syxnf.net]

Wang YP，Jin XF，He Y，et al.Correlation between aged hypertension complicated with depression and angiotensinogen G-6A gene polymorphism[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2015，23(2)：42-45.