D2-40在結(jié)直腸癌淋巴道轉(zhuǎn)移中的研究進展

鄧 洪綜述，徐 亮審校

（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胃腸外科，四川瀘州646000）

D2-40在結(jié)直腸癌淋巴道轉(zhuǎn)移中的研究進展

鄧 洪綜述，徐 亮審校

（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院胃腸外科，四川瀘州646000）

D2-40； 胃腸腫瘤； 淋巴管； 結(jié)直腸癌； 轉(zhuǎn)移； 綜述

結(jié)直腸癌是臨床最常見的惡性腫瘤之一，在全球范圍內(nèi)，結(jié)直腸癌的發(fā)病率處于惡性腫瘤的第3位，而在歐洲發(fā)達國家，結(jié)直腸癌的發(fā)病率處于第2位[1]。據(jù)統(tǒng)計，美國2011～2012年結(jié)直腸癌新發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)均居美國癌癥發(fā)病數(shù)和死亡數(shù)的第3位[2]。在我國，隨著居民生活水平的不斷提高、飲食習(xí)慣的改變，結(jié)直腸癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。當(dāng)前，結(jié)直腸癌發(fā)病率僅次于肺癌、胃癌，位于第3位，病死率次于肺癌、胃癌、肝癌、食管癌，位于第5位[3]。盡管結(jié)直腸癌以手術(shù)治療為主已得到廣泛認(rèn)同，并取得一定成效，但其5年生存率仍不滿意。淋巴道轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌最常見的轉(zhuǎn)移、擴散途徑，也是影響預(yù)后的最主要因素。D2-40是最新發(fā)現(xiàn)的淋巴管內(nèi)皮細胞特異性標(biāo)記物，其與結(jié)直腸癌淋巴道轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究在國內(nèi)外已有一些報道，現(xiàn)作一簡要綜述。

1 淋巴管內(nèi)皮細胞標(biāo)志物

1.1 D2-40分子生物學(xué)結(jié)構(gòu)及功能 D2-40是一種表達于淋巴管內(nèi)皮細胞的蛋白質(zhì)分子，早先在研究生殖細胞腫瘤和胚胎睪丸的精母細胞瘤時，Marks等[4]發(fā)現(xiàn)，其為一種唾液酸糖蛋白，由166個氨基酸構(gòu)成，可與表達于胎兒睪丸、睪丸生殖細胞腫瘤表面的癌胚抗原M2A特異結(jié)合。起初研究發(fā)現(xiàn)，D2-40對精母細胞瘤和無性細胞瘤的診斷具有重要價值，而后研究發(fā)現(xiàn)，D2-40可識別在O-藕聯(lián)唾液酸糖蛋白上分化的固有抵抗性抗原決定表位，且僅在淋巴管內(nèi)皮細胞表達，而在血管內(nèi)皮細胞上不表達，因此認(rèn)為，D2-40可作為淋巴管特異性標(biāo)記物。在此后，其被廣泛用于標(biāo)記淋巴管而運用于多種惡性腫瘤與淋巴道侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[5-7]。同時在研究中也發(fā)現(xiàn)，D2-40同樣表達于許多正常組織，包括間質(zhì)細胞、肌上皮細胞、間皮細胞、基底細胞、濾泡樹突狀細胞和部分皮膚上皮細胞，以及某些腫瘤，包括淋巴管瘤、卡波肉瘤、精原細胞瘤、血管內(nèi)皮瘤、樣間皮瘤、成肌纖維細胞瘤、多形性腺瘤、神經(jīng)鞘瘤、腦脊膜瘤、顱咽管瘤等[8]。此外，Nakamura等[9]研究發(fā)現(xiàn)，在腦發(fā)育過程中，D2-40在大腦的未成熟腦膜、脈絡(luò)叢和室管膜及小腦的浦肯野細胞層、外粒細胞層表達。進一步研究發(fā)現(xiàn)，D2-40還能特異性識別腎小球足突細胞膜蛋白（podoplanin），其是近年來發(fā)現(xiàn)的另一種特異性的淋巴管內(nèi)皮標(biāo)志物。但是與目前已作為商品化的D2-40抗體相比，D2-40較podoplarnin具有更高的敏感性和特異性，且在和石蠟包埋的病理切片染色反應(yīng)時毫不受影響。盡管D2-40可于皮膚真皮、前列腺和乳腺的基底細胞等表達，但其在淋巴管標(biāo)記方面的特異性仍具有重大意義。

1.2 其他淋巴管內(nèi)皮細胞標(biāo)志物

1.2.1 血管內(nèi)皮生長因子受體-3（VEGFR-3） VEGFR-3是一種酪氨酸激酶受體，是最早被發(fā)現(xiàn)的淋巴管內(nèi)皮標(biāo)記物，其配體有血管內(nèi)皮生長因子A（VEGF-A）、VEGFB、VEGF-C和VEGF-D，其中VEGF-C和VEGF-D在調(diào)節(jié)淋巴管內(nèi)皮細胞生長上的作用已被廣泛認(rèn)可。VEG FR-3雖然名為血管內(nèi)皮生長因子受體，但僅在胚胎靜脈血管內(nèi)皮細胞表達，出生后就不再于血管內(nèi)皮表達，而表達于淋巴管內(nèi)皮細胞，故VEGFR-3曾被認(rèn)為是淋巴管特異性標(biāo)記物。但VEGFR-3在某些腫瘤細胞和腫瘤的微血管內(nèi)皮也有表達。因此，VEGFR-3用于鑒別血管內(nèi)皮和淋巴管內(nèi)皮的特異性是有限的。

1.2.2 淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸-1（LYVE-1） LYVE-1是分布于淋巴管內(nèi)腔面上的含有322個氨基酸的膜蛋白，是被發(fā)現(xiàn)的又一淋巴管內(nèi)皮特異性標(biāo)記物，其配體是透明質(zhì)酸。LYVE-1與CD44糖蛋白同源，在淋巴管腔面和外表面有同等表達，其生理功能是將透明質(zhì)酸通過淋巴內(nèi)皮轉(zhuǎn)運至淋巴。LYVE-1也并非淋巴管內(nèi)皮所特有，其可表達于人正常的肺組織血管、肝血竇及部分腫瘤微血管中。

1.2.3 podoplarnin podoplarnin是一種黏液型跨膜糖蛋白，定位于腎小球足突細胞膜，另外主要表達于小淋巴管，而不表達于具有平滑肌結(jié)構(gòu)的大淋巴管。podoplarnin是于1999年發(fā)現(xiàn)的僅表達于淋巴管內(nèi)皮細胞的一種膜蛋白，其后有學(xué)者用其標(biāo)記微淋巴管獲得成功，進而認(rèn)為podoplarnin也是一種淋巴管內(nèi)皮標(biāo)記物[10]。Fiedler等[11]研究發(fā)現(xiàn)，podoplarnin和CD34聯(lián)合染色可以區(qū)分毛細血管和淋巴管。但大量研究也發(fā)現(xiàn)，podoplarnin不僅表達于淋巴管內(nèi)皮細胞，也表達于一些正常組織和良性腫瘤，如腎足細胞、成骨細胞、肺泡Ⅱ型細胞以及血管瘤和血管肉瘤內(nèi)[11]。

1.2.4 同源異型核轉(zhuǎn)錄因子基因產(chǎn)物-1（Prox-1） Prox-1是從黑腹果蠅Prospero基因克隆的同源基因，與胚胎淋巴管出芽生長、內(nèi)皮細胞的分化相關(guān)（在胚胎發(fā)育時期，淋巴管是以出芽方式自靜脈內(nèi)皮細胞生成），是淋巴管發(fā)育所不可缺少的轉(zhuǎn)錄因子[12]。Wigle等[13]研究發(fā)現(xiàn)，敲除Prox-1基因后，胚胎發(fā)育過程中靜脈內(nèi)皮細胞無法向淋巴內(nèi)皮細胞定向分化，說明Prox-1是淋巴管生成的一種調(diào)控因子，且Prox-1可使podoplarnin和VEGFR-3的表達增高，因此認(rèn)為，Prox-1在胚胎淋巴脈管形成的分子機制中發(fā)揮著非常重要的作用。Prox-1主要表達于淋巴管內(nèi)皮，但在其他組織和細胞中也有表達，包括角膜、肝細胞、心臟等，但在內(nèi)皮細胞中，僅表達于胚胎和成人的淋巴管內(nèi)皮。但有研究表明，聯(lián)合Prox-1與LYVE-1檢測可以更好地標(biāo)示淋巴管內(nèi)皮細胞[14-15]。

早在D2-40廣泛應(yīng)用之前，研究人員常采用2個或2個以上標(biāo)記物聯(lián)合鑒定腫瘤淋巴管。如LYVE-1和Prox-1聯(lián)合鑒定肝淋巴管，VEGFR-3聯(lián)合podoplarnin檢測血管肉瘤和卡波肉瘤中的淋巴管，所得結(jié)果更加準(zhǔn)確[16]。這樣做雖可以提高檢測的準(zhǔn)確性，但敏感性卻不佳，陽性率較實際偏低，且可能增加實驗過程中的誤差。這就不難理解，在運用淋巴管標(biāo)記物進行研究的同時，學(xué)者仍致力于淋巴管標(biāo)志物特異性的相關(guān)研究，且正在深入進行。

2 D2 -40 的應(yīng)用及相關(guān)研究

D2-40定位于淋巴管內(nèi)皮細胞的細胞膜和細胞質(zhì)，采用免疫組化（Envision法）染色后，顯示為棕黃色顆粒。最早應(yīng)用D2-40檢測腫瘤淋巴管來進行研究是乳腺癌，有學(xué)者在對比蘇木精-伊紅染色（HE染色）和D2-40 Envision法染色標(biāo)記乳腺癌中的淋巴管后，發(fā)現(xiàn)D2-40檢出率較明顯高于HE染色，D2-40能更良好地標(biāo)記出淋巴管，尤其在分化程度差、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性率更高，并由此推測腫瘤淋巴管的檢測對于判斷腫瘤的預(yù)后有重要意義[17-18]。許俊龍等[19]應(yīng)用D2-40研究早期胃癌時發(fā)現(xiàn)，在正常胃黏膜組織中，D2-40染色陽性的脈管在黏膜下層數(shù)目最多，而在黏膜固有層、肌層及漿膜層均有少量表達；在早期胃癌中，D2-40也呈現(xiàn)高表達，其顯示的微淋巴管在腫瘤中心區(qū)和邊緣區(qū)形態(tài)上無明顯差異，而在中心區(qū)分布要多于邊緣區(qū)。Coskun等[20]在對65例胃癌的研究中以D2-40標(biāo)記淋巴管，結(jié)果顯示，腫瘤周圍均有D2-40標(biāo)記的淋巴管，瘤周微淋巴管密度（LMVD）與腫瘤大小、TNM分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有無遠處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。Ozardili等[21]在腎癌的淋巴管研究中發(fā)現(xiàn)，腫瘤周圍LMVD和臨床各病理參數(shù)無關(guān)，但腫瘤中心區(qū)LMVD與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。

在應(yīng)用D2-40和CD34聯(lián)合檢測結(jié)直腸癌淋巴管時，Saad等[22]發(fā)現(xiàn)，幾乎所有的腫瘤組織均存在淋巴管生成，且LMVD與CD34標(biāo)記的微血管密度呈正相關(guān)。Barresi等[23]研究Ⅰ期結(jié)直腸癌顯示，D2-40標(biāo)記的LMVD與淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移相關(guān)，有淋巴管侵犯的病例LMVD則更高。孫建軍等[24]成功建立人結(jié)腸腺癌裸鼠原位種植瘤后，以D2-40、LYVE-1檢測腫瘤淋巴管顯示，無瘤組D2-40、LYVE-1陽性表達率極低，而結(jié)腸癌種植組D2-40、LYVE-1表達則呈強陽性，LMVD明顯高于無瘤組，且多分布在腫瘤組織與正常組織交界處，瘤內(nèi)幾乎無陽性脈管。趙楊等[25]以D2-40聯(lián)合VEGF-C、VEGFR-3研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌的LMVD明顯高于大腸腺瘤和正常大腸黏膜，大腸癌LMVD與VEGF-C、VEGFR-3的表達呈顯著正相關(guān)。Kenney等[26]以D2-40研究淋巴管在正常大腸組織、大腸息肉、腺瘤、大腸癌以及炎性腸病（潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病）的表達位置時，發(fā)現(xiàn)炎性反應(yīng)或腫瘤微環(huán)境可能促使淋巴管新生。黃振宇等[27]以D2-40和CD34聯(lián)合檢測52例結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移患者的原發(fā)灶、肝轉(zhuǎn)移灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的新生淋巴管密度和新生血管密度，結(jié)果顯示，新生淋巴管密度明顯高于新生血管密度，提示淋巴管新生在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移中起重要作用。姚明等[28]研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌組織中D2-40標(biāo)記淋巴管計數(shù)顯著高于正常組織，且與腫瘤的浸潤深度、大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)，但與患者年齡、性別、腫瘤部位和分化程度無關(guān)，由此認(rèn)為，瘤周LMVD對結(jié)直腸癌患者預(yù)后的判斷有重要意義。

以D2-40標(biāo)記結(jié)直腸癌瘤內(nèi)、瘤周以及正常組織淋巴管的大量研究表明，腫瘤內(nèi)、瘤周同正常組織LMVD存在顯著差異，這提示腫瘤內(nèi)或瘤周存在淋巴管新生[22，24-26，28]。進一步研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤內(nèi)與瘤周不僅在淋巴管密度上存在差異，且淋巴管形態(tài)上也有差異，表現(xiàn)為不同區(qū)域的淋巴管密度、管腔形狀大小不一致。瘤內(nèi)淋巴管樣呈細小或條索樣，多呈閉鎖狀；而瘤周淋巴管較瘤內(nèi)更豐富，且管壁較薄，管腔扁大，或呈擴張狀，且發(fā)現(xiàn)癌栓多見于癌周擴張的淋巴管[28-29]。推測其原因可能是由于腫瘤不斷地向外擴張生長，過度生長的腫瘤細胞導(dǎo)致腫瘤中心存在較高的組織壓，又或者淋巴回流障礙引起組織水腫，從而壓迫淋巴管腔；而瘤周處于擴張的淋巴管以及內(nèi)皮細胞間寬大的間隙，都是脫落的癌細胞易于進入淋巴道發(fā)生轉(zhuǎn)移的因素。據(jù)此推測，瘤周LMVD明顯高于瘤內(nèi)，與淋巴管浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；而瘤周處于擴張狀的功能性淋巴管，在淋巴管浸潤和淋巴道轉(zhuǎn)移過程中扮演著十分重要的角色。

3 展 望

D2-40標(biāo)記的LMVD已成為結(jié)直腸癌的一個獨立而重要的預(yù)后因素，但目前國內(nèi)關(guān)于此方面的研究并不多，且研究中尚存在一些問題。例如（1）由于大腸壁的不同層次淋巴管密度也有很大差別，取材及切片部位不一致，將直接導(dǎo)致LMVD的巨大差異；（2）淋巴管特異標(biāo)志物的選擇不同，得出的研究結(jié)果可能有很大差別；（3）淋巴管密度的判讀受觀察者主觀因素的影響，研究者的主觀認(rèn)知和選擇會導(dǎo)致不同的結(jié)果，但這個問題難以在病理閱片中避免。雖然，目前臨床病理研究和動物實驗已陸續(xù)開展，但結(jié)直腸癌淋巴管生成在腫瘤轉(zhuǎn)移中的具體機制和過程還有待進一步研究。然而，是否遏制了淋巴管新生就能阻止淋巴道轉(zhuǎn)移呢？此類研究的開展將會為結(jié)直腸癌的分子水平治療提供新的依據(jù)。

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讀者·作者·編者

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本刊編輯部

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.06.019

：A

：1009-5519（2015）06-0854-03

2014-09-30

2014-10-31）

鄧洪（1984-），男，四川綿陽人，在讀碩士研究生，主要從事胃腸道腫瘤的診療與研究工作；E-mail：bati_stu@126.com。

徐亮（E-mail：33642090@qq.com）。