丙型肝炎病毒感染者病毒載量與血脂代謝指標的相關性分析

宋培新, 李　雷, 陶　月, 董必晟, 鄭　楠

(1. 南京大學醫學院附屬鼓樓醫院, 江蘇 南京, 210008;

2. 南京大學醫學院 公共健康研究中心, 江蘇 南京, 210093)

丙型肝炎病毒感染者病毒載量與血脂代謝指標的相關性分析

宋培新1, 李雷1, 陶月1, 董必晟2, 鄭楠2

(1. 南京大學醫學院附屬鼓樓醫院, 江蘇 南京, 210008;

2. 南京大學醫學院 公共健康研究中心, 江蘇 南京, 210093)

摘要:目的探討丙型肝炎病毒感染者血脂代謝狀況及與外周血病毒載量的相關性。方法75例丙型肝炎病毒感染者分為HCV RNA高復制組、低復制組及陰性組。利用熒光定量PCR方法檢測外周血HCV RNA水平，應用全自動生化分析儀檢測患者TG、CHO、ApoA1、ApoB、HDL-C、LDL-C等血脂代謝指標。結果 甘油三酯(TG)、脂蛋白ApoB和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)在HCV RNA陰性組和高復制組有顯著差異，上述3個指標均與HCV RNA呈正相關。結論慢性丙型肝炎病毒感染伴隨著TG、ApoB、LDL-C水平的上升，且與病毒載量呈正相關關系，并提示通過有效的抗病毒治療可能有助于血脂代謝紊亂的糾正。

關鍵詞:丙型肝炎病毒; 血脂指標; 相關性

Analysis in correlation between serum hepatitis

C virus load and lipid metabolic components in

慢性丙型肝炎是一個具有全球影響的公共健康問題，共感染了約1.7億人，是肝硬化及原發性肝癌的常見病因之一。由于缺乏有效的疫苗，其感染趨勢未得到有效控制。通過抗病毒治療雖然可以延緩部分患者的病情進展，但目前治療方法單一，主要給予α干擾素及利巴韋林治療，副作用較大，且治療費用高昂，部分患者由于不能承受而終止治療。雖然近年來在丙型肝炎的抗病毒治療方面取得了一些進展，如蛋白酶抑制劑，仍然存在上述的問題。近年來部分學者觀察到慢性丙型肝炎患者存在脂代謝紊亂的現象，并可增加心血管事件的發生率。作者認為由于LDL、ApoB等血脂代謝指標自身受到患者年齡、性別等諸多因素影響，故本研究采用設置年齡、性別等干擾因素分布特征相同的對照組進行對比研究，以進一步明確慢性丙型肝炎患者血脂代謝指標與病毒載量的相關性[1]。

1資料與方法

1.1　研究對象

收集2012年1月—2013年12月就診南京大學醫學院附屬鼓樓醫院的慢性HCV感染者，診斷標準符合2010年中華醫學會肝病學分會公布的《丙型肝炎防治指南》[1]。本研究均選擇40周歲以下、未給予抗病毒治療且無其他慢性基礎病患者。研究對象共分為3組，分別是HCV RNA陰性組(抗HCV陽性)，HCV低復制組(HCV RNA 103～105copies/mL)，HCV高復制組(HCV RNA >105copies/mL)。標本量分別為25例、24例、26例，平均年齡分別為(31.5±4.6)歲、(32.3±3.2)歲、(34.7±5.8)歲，性別構成(男/女)分別為13/12、13/11、12/14。

1.2　方法

HCV抗體檢測：北京萬泰生物藥業股份有限公司的丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒，檢測步驟及陽性判別標準參照產品說明書。檢測儀器為Tecan Freedom全自動酶免分析一體機。

HCV RNA定量檢測：采用中山大學達安基因股份有限公司的丙型肝炎病毒核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)，檢測儀器為Agilment Technologies公司的Stratagene Mx3000P。既往研究[2]曾取HCV RNA>107copies/mL為高復制組，但本院HCV RNA定量檢測結果中HCV RNA>107copies/mL占陽性結果的比例僅為5%～6%，故本研究以105copies/mL劃分為低復制組和高復制組。

生化分析：檢測儀器為Beckman Coulter全自動生化分析儀，檢測指標包括甘油三酯

(TG)、膽固醇(CHO)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白B(ApoB)。

1.3　統計學處理

采用SPSS17.0統計軟件進行數據的統計分析。計量數據采用均數±標準差表示, 多組間均數的多重比較采用單因素方差分析及最小顯著差異LSD-t檢驗，對LSD-t檢驗有顯著性差異的指標再進行Dunnett-t檢驗進一步驗證，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

3組血脂指標的描述性統計結果見表1～3。

表1　3組人群血脂指標比較

表2　3組血脂指標單因素方差分析最小顯著差異LSD-t檢驗的多重比較結果

組1、組2、組3分別代表HCV RNA陰性組、低復制組和高復制組，*P<0.05。

表3　3組患者TG、ApoB、HDL-C、LDL-C水平

組1、組2、組3分別代表HCV RNA陰性組、

低復制組和高復制組，*P<0.05。

對HCV RNA陽性患者(包括低復制組和高復制組)的TG、ApoB、LDL-C等指標與HCV RNA定量log值進行Pearson相關分析，其相關系數及顯著性結果見表4。

表4　TG、ApoB、LDL-C與HCV RNA定量的相關性分析

*P<0.05，**P<0.01。

3結論

近年來，關于慢性丙型肝炎和脂代謝的研究吸引了較多學者的關注，其內容主要集中于以下3個方面: ① 第一個方面是關于載脂蛋白參與丙型肝炎病毒感染肝細胞的生命周期的機制研究。和其他黃病毒成員一樣，丙肝病毒在外周血中主要以與低密度脂蛋白(LDL)結合的方式存在，LDL在病毒入侵過程中與肝細胞表面的LDL受體結合，從而起到了輔助受體的作用[3]。Sabina W等通過實驗發現LDL主要與HCV的包膜糖蛋白E2結合，并促進了病毒入胞，該組學者還通過臨床樣本的對照研究發現，慢性HCV感染者的血清游離LDL水平顯著低于未感染者[4]。除了最早發現的LDL外，Carmine M等[5]通過蛋白質組學方法，發現載脂蛋白ApoA1也參與了HCV的生命周期。該研究首先發現HCV感染者外周血LDL中的ApoA1明顯下降，進一步的HCVcc感染細胞模型發現HCV的非結構蛋白可以誘導ApoA1發生結構性修飾。此外，通過小干擾RNA方法(siRNA)下調細胞內ApoA1的表達可減少培養上清中病毒顆粒和HCV RNA拷貝數的數量; ② 第二個方面，HCV在肝細胞復制、包裝過程中可以引起細胞內脂質代謝的顯著異常。Castera L等[6]研究發現HCV感染者的肝細胞存在普遍的脂肪變性。Andreas M等[7]將經過修飾的毒株Jc1E2FLAG感染Huh7.5細胞，產生了具有感染性的病毒顆粒，成分分析發現其脂質成分中主要為VLDL和LDL，這與在感染HCV之前宿主細胞內自身的脂質成分有很大不同，提示肝細胞內脂蛋白的合成代謝受到了顯著的干擾。有趣的是，有學者[8-9]研究發現，他汀類藥物可以降低慢性丙型肝炎病人外周血中HCV RNA的含量，具體機制尚不明確，推測可能與他汀類藥物調節肝細胞脂質代謝有關; ③ 第三個方面，近年來曾有學者分析了慢性丙型肝炎患者外周血脂類代謝指標以及與病毒載量和肝細胞損傷之間的關系。如中國學者李蘊銣等[2]發現外周血HCV病毒載量與LDL、ApoB的水平呈負相關，與TG、CHO、HDL、ApoA1等其他指標關聯性不大，鞏雪俐等[10]研究結果與其類似。

盡管關于丙肝病毒感染引起宿主脂質代謝異常的現象已經在臨床和基礎研究中被廣泛觀察到，但是各種脂類成分在HCV感染中所起的作用和其在被感染者外周血中的水平變化仍存在較多爭議。如前所述，LDL既可以作為HCV病毒顆粒入胞輔助受體的配體促進病毒感染細胞的過程，又可以與HCV入胞進行競爭從而干擾其感染過程[11]。除了LDL外，HDL中的主要脂蛋白成分ApoA1也在HCV的復制過程中發揮著重要的作用。這種機制上的復雜現象就給HCV感染者外周血脂類代謝指標的變化帶來了較多的影響因素。比如國內的相關研究發現，慢性丙型肝炎患者外周血HCV RNA水平越高，其LDL和ApoB的水平越低，這與本文作者在臨床上的觀察和一些基礎研究的結果存在矛盾，如Castera L等發現肝細胞中產生的HCV病毒顆粒中含有大量的VLDL和LDL成分，從這一方面考慮，當外周血HCV RNA顯著升高時，LDL及其主要的脂蛋白成分ApoB的水平可能也會出現相應的升高。

由于脂質代謝狀況受到患者年齡、性別、有無高血壓、糖尿病等基礎疾病以及是否飲酒等諸多因素有關，因此給從臨床上觀察HCV感染者脂質代謝指標的變化規律帶了許多感染，因此很容易得出不穩定的觀察結果。本研究為了排除上述的一些常見感染因素，選擇了沒有其他基礎疾病、年齡構成比相似的較年輕人群(所有入選者均小于40歲)作為研究對象，來觀察HCV病毒水平與脂質代謝狀況的關系，并同時設計了多種統計方法以加強研究結果的可靠性。

本研究結果顯示，在血脂指標受其他因素干擾較少的HCV感染的年輕人群中，通過LSD-t和Dunnett-t檢驗發現甘油三酯(TG)、脂蛋白ApoB和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)等三個指標在HCV RNA陰性組和高復制組間有顯著統計學差異，但在陰性組和低復制組，以及低復制組和高復制組間差異不顯著，此結果提示TG、ApoB、LDL-C的水平與HCV RNA的水平存在顯著關聯性。為進一步明確兩者的相關關系，直線回歸分析結果提示上述3個指標均與HCV RNA呈正相關關系，其中LDL-C與HCV RNA滴度的相關系數最高(r=0.624,P<0.001)。對上述指標統計結果的理論解釋如下: ① 跟大部分其他病毒不同，丙肝病毒在外周血中的存在及循環形式是與脂蛋白結合、形成病毒-脂蛋白顆粒(LVP), 結合的脂蛋白主要為低密度脂蛋白(LDL)和極低密度脂蛋白(VLDL)，在LDL和VLDL中以ApoB和TG為主要成分。因此，可以解釋當外周血中存在高滴度病毒時伴隨LDL-C、ApoB、TG水平明顯上升; ② 在與HCV RNA水平存在相關關系的3個指標中，以LDL-C的相關系數最高，而ApoB的相關系數明顯弱于LDL-C，提示在LDL-C中除了ApoB可能還存在其他脂蛋白成分如ApoE參與了病毒-脂蛋白顆粒形成，這與 Bridge.S等[12]的研究結果一致。

既往研究已明確, LDL-C、ApoB、TG等血脂代謝指標的升高是心血管疾病及代謝疾病的危險因素，同時一系列研究也觀察到，慢性丙型肝炎患者的代謝性疾病如代謝綜合征、脂肪肝等發病率顯著上升。本研究發現在慢性丙肝疾病進展過程中，監測并控制LDL-C、ApoB、TG等血脂指標非常重要，并提示通過有效的抗病毒治療可能有助于糾正慢性丙型肝炎患者血脂代謝異常。

參考文獻

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chronic hepatitis C patients

SONG Peixin1, LI Lei1, TAO Yue1, DONG Bisheng2, ZHENG Nan2

1.NanjingDrumTowerHospitalAffiliatedtoMedicalCollegeofNanjingUniversity,

Nanjing,Jiangsu, 210008;2.CenterofPublicHealthResearch,MedicalCollegeofNanjing

University,Nanjing,Jiangsu, 210093

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the correlation between lipid metabolism status and serum viral load in chronic hepatitis C patients. Methods A total of 75 HCV infected patients were divided into three group, including high level of viral replication group, lower level of viral replication group and HCV RNA negative group. Serum HCV level was measured by real-time quantitative PCR, and lipid metabolic components were detected by biochemistry auto-analyzer. ResultsThe levels of triglyceridemia(TG),apolipoprotein B(Apo B)and low density lipoprotein-cholesterol(LDL-C)had significant differences between HCV RNA negative group and high level of viral replication group, and these three indicators were positively correlated with HCV RNA. ConclusionThe levels of TG, ApoB and LDL-C are elevated in chronic hepatitis C patients, and have a positive relationship with serum viral load, which suggesting that anti-viral therapy would probably correct the disorder of lipid metabolism of hepatitis C patients.

KEYWORDS:hepatitis C; lipid metabolic component; relationship

通信作者:鄭楠, E-mail:nanzheng@nju.edu.cn

基金項目:江蘇省自然科學基金(BK2013059); 南京大學博士點基金(2013009112)

收稿日期:2015-03-03

中圖分類號:R 512.6

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2015)11-032-04

DOI:10.7619/jcmp.201511010