IL-23R基因多態性與口腔扁平苔癬的相關研究

和　慧，劉長歡，肖　欣，陳英新

(吉林大學口腔醫院 VIP綜合科，吉林 長春130021)

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IL-23R基因多態性與口腔扁平苔癬的相關研究

和慧，劉長歡，肖欣，陳英新*

(吉林大學口腔醫院 VIP綜合科，吉林 長春130021)

摘要：目的研究東北地區IL-23R基因多態性與口腔扁平苔癬的相關性。方法采用聚合酶鏈反應—限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)檢測66例口腔扁平苔癬患者(其中糜爛型21例)和70例健康健康對照者的IL-23R的兩個SNP位點(rs10889677和rs11465817)，分析IL-23R基因多態性與口腔扁平苔癬的相關性。結果 ①rs10889677、 rs11465817位點等位基因、基因型分布頻率在病例組和對照組間差異無統計學意義(P>0.05)；② rs10889677位點基因型分布頻率在糜爛型與對照組比較差異有統計學意義(P=0.024)， CC+CA基因型個體發生糜爛型的風險是AA基因型的3.115倍(95%CI:1.135~8.548)。結論東北地區OLP人群IL-23R基因rs11465817位點SNP與OLP疾病易感性無明顯相關性;rs10889677位點存在多態性變異，可能與 OLP 的疾病易感性和嚴重程度有關。

(ChinJLabDiagn,2015,19:0722)

口腔扁平苔癬(OLP)是常見的口腔粘膜慢性炎癥性疾病。其中0.4%-5.6%病例可發生惡變，被WHO列為癌前病變。IL-23是針對炎癥性疾病、自身免疫疾病和腫瘤研究的細胞因子[1]，IL-23R 是調控IL-23 生物活性的關鍵。相關文獻已報道了IL-23R在炎性疾病、自身免疫性疾病的發病機制以及惡性腫瘤的易感性里占重要地位，但其在口腔扁平苔癬的研究幾近空白。本研究選取IL-23R基因具有潛在功能性的單核苷酸多態性(rs10889677和rs11465817)為研究位點，以探討該基因與OLP遺傳易感性的關系。

1材料與方法

1.1研究對象病例組為2013年9月～2014年10月到吉林大學口腔醫院就診，臨床診斷符合《口腔粘膜病學》(2010 年第 3 版)OLP 診斷標準，且無其他自身免疫性疾病的東北地區居民共66例。對照組為東北地區健康人70例。

1.2DNA樣本與引物合成所有患者均抽取靜脈血5 mL,EDTA抗凝管低溫(-20℃)保存,全血基因組DNA快速提取試劑盒(北京博邁德科技發展有限公司)提取基因組DNA；健康組采用口腔黏膜拭子采取口腔內脫落細胞，口腔拭子基因組DNA提取試劑盒(北京康為世紀生物科技有限公司)提取基因組DNA，備測。引物由上海生物工程，有限公司合成引物序列分別為rs10889677:5’-CTGTGCTCCTACCATCACCA-3’,5’-TGCTGTTTTTGTGCCTGTATG-3’。 rs11465817:5’-CATTAAGTAAGAGATGAAAACTTTGG-3’,5’-CTGTAGTGAGCTGTGACCATG-3’。

1.3PCR與基因測序總反應體系為25μL：PCR擴增條件為94℃預先變性1 min，而后94℃ 30s、62℃ 30 s、72℃ 30s ，5 個循環,然后94℃ 30 s、58℃ 30 s、72℃ 30 s進行30個循環；最后 72℃延伸 5 min。將PCR 產物送上海生工測序部進行基因測序。

1.4統計學分析使用Chromas軟件根據IL-23R目的基因位點正常堿基排列序列尋找目的位點的等位基因,并計算等位基因的表現頻率。計算各組等位基因頻率,確認其是否符合Hardy-Weinberg平衡定律。多態性等位基因頻率比較采用SPSS17.0軟件進行卡方檢驗，P<0.05為具有統計學意義。多態性位點與疾病風險的相關性檢驗用比值比(OR)及其95%可信區間(95%CI)表示，檢驗水準α=0.05。

2結果

2.1病例組及健康對照組均符合Hardy-Weinberg平衡定律，基因遺傳平衡具有群體性。

2.2IL-23R基因2位點病例組與對照組等位基因及基因型分布比較由表1可見,病例組和對照組IL-23R基因2個多態性位點等位基因及基因型分布差異無統計學意義(P>0.05)。

表1　IL-23R基因等位基因、基因型頻率在病例組和對照組中的分布〔例數(%)〕

2.3IL-23R基因2位點基因型分布頻率在糜爛型、普通型和對照組中的分布比較由表2可看出：rs11465817位點在普通病例組和糜爛型中基因型分布與對照組比較,差異無統計學意義(P>0.05)；rs10889677位點基因型分布在普通病例組與對照組比較差異無統計學意義(P>0.05)，而糜爛型與對照組比較,差異有統計學意義(P=0.024)，危險分析顯示CC+CA基因型與純合突變型AA相比其OR值為3.115(95%CI為1.135-8.548),提示含有C等位基因的CC+CA基因型對OLP的疾病易感性和嚴重程度風險增加2.115倍。

表2　IL-23R基因rs10889677、rs11465817位點基因型分布頻率在糜爛型、普通型和對照組中的分布

注：表中P值為各組與對照組比較結果

3討論

OLP 為口腔黏膜常見的一種非感染性慢性炎癥，多見于女性。主要損害為黏膜表面出現白色網狀花紋或斑塊，并有部分患者在損害區范圍內發生糜爛，臨床上根據病損基部黏膜狀況分為充血糜爛型或非糜爛型。因口腔扁平苔蘚有癌變潛能，故WHO將其列入潛在惡性病范疇。其病因和發病機制尚不明確，為一種多因素(包括遺傳、自身免疫、精神神經因素、藥物、內分泌與代謝障礙、感染、慢性病灶等)介導的自身免疫反應。近年來對于其發病機制的研究多在T細胞介導的免疫損傷方面。IL-23是2000年發現的，一個擁有異二聚體結構的前炎癥因子，可導致人類T細胞的增殖和γ-干擾素(IFN-γ)的產生。IL-23是連接先天性免疫和獲得性免疫的細胞因子， IL-23 必須通過與靶細胞表面高親和力的特異性IL-23R結合后才能發揮其生物學效應。因此,IL-23R是調控IL-23 生物活性的關鍵。當IL-23 與IL-23R 結合后，誘導幼稚的CD4+ T 淋巴細胞向Th17 細胞分化和增殖，促使Th17細胞分泌大量IL-17，形成IL-23 /IL-23R/Th17 /IL-17通路。該通路是機體炎性反應中的重要組成部分，其功能紊亂是引起自身免疫性疾病的重要原因之一[2，3]。已有研究證實，IL-23R的基因多態性與多種疾病(炎性疾病[4]：如克羅恩病、潰瘍性結腸炎，自身免疫性疾?。喝玢y屑病[5]、強直性脊柱炎[6]、白塞病[7]等，惡性腫瘤：如卵巢癌[8]、食管癌[9]等)易感性及嚴重程度相關聯。

本研究結果顯示：IL-23R基因rs10889677、rs11465817位點基因型及等位基因頻率的分布在病例組和對照組中差異無統計學意義(P>0.05),而在病例組中的糜爛型與普通型分組中發現rs11465817位點基因多態性與OLP的易感性無明顯相關性。rs10889677位點在糜爛型與對照組中基因型頻率分布差異有統計學意義(P<0.05)。危險分析顯示CC+CA基因型與純合突變型AA相比其OR值為3.115,提示含有C等位基因的CC+CA基因型對OLP的疾病易感性和嚴重程度風險增加2.115倍。綜上，IL-23R基因多態性與OLP的易感性與嚴重程度有關。

本研究探討IL-23R基因多態性與OLP的相關性，以期更多對于OLP的基因多態性的研究，為OLP的發病機制提供更多遺傳學依據。

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關鍵詞：IL-23R；基因多態性；口腔扁平苔癬

Association between interleukin 23R gene polymorphisms and oral lichen planusHEHui,LIUChang-huan,XIAOXin,etal.(DepartmentofVIP,StomatologyHospitalofJilinUniversity,Changchun130021,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate single nucleotide polymorphisms(SNP)of interleukin 23R gene with oral lichen planus(OLP) in northeast china,and to provide an important genetic basis in exploring the disease susceptibility and diverse clinical manifestation.Methods66 patients with OLP ( 21 erosive OLP patients) and 70 healthy control subjects were recruited.Genomic DNA was extracted and PCR products spanning two SNPs of the IL-23R gene at positions(rs10889677 and rs11465817)were analyzed.The genotype frequencies were calculated and analyzed.Results ①The rs10889677,rs11465817 allele and genotype frequency distribution of the difference in the case group and the control group had no statistical significance (P>0.05).②The rs10889677 genotype frequency distribution in erosive compared with the control group had significant difference (P=0.024),the CC+CA genotype of the individual risk occurrence of erosion type is 3.115 times of the AA genotype (95%CI:1.135~8.548).ConclusionThe Northeast OLP population of IL-23R gene rs11465817 locus SNP had no significant correlation existed in OLP disease susceptibility;polymorphism of rs10889677 point mutation,may be associated with disease susceptibility and severity of OLP.

Key words:interleukin 23R gene ;single nucleotide poly- morphisms;oral lichen planus

(收稿日期：2015-01-07)

作者簡介：和慧(1988-)，女，吉林大學口腔醫學院研究生；陳英新，教授，碩士生導師，研究方向為口腔粘膜病。

文獻標識碼：A

中圖分類號：R781.5

文章編號：1007-4287(2015)05-0722-03

*通訊作者