IL-10、IL-17在子宮內膜癌中的表達及其與臨床病理的關系

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IL-10、IL-17在子宮內膜癌中的表達及其與臨床病理的關系

歐陽小明，史文靜，冀天星，郝卓芳，廖德貴

(廣州醫科大學附屬第二醫院，廣東 廣州510260)

子宮內膜癌(endometrial carcinoma)作為臨床常見的婦科惡性腫瘤，多發生于50歲及以上的絕經婦女，并且其發病率有呈逐漸升高的趨勢，嚴重威脅患者的健康和生命質量。關于其發病機制，目前尚無統一結論，有研究證實多種細胞因子可能參與了子宮內膜癌的發生及發展過程[1]。白細胞介素10(interleukin-10，IL-10)主要由T調節細胞(regulatory T cells，Treg)分泌，具有抑制功能性T淋巴細胞活性和抗腫瘤免疫反應等功能。T輔助淋巴細胞(T helper 17 cells，Th17)作為可以誘導組織產生炎癥反應的CD4+T細胞亞群，它通過分泌白細胞介素17(interleukin-17，IL-17)使中性粒細胞聚集而引起機體產生炎癥性反應。有研究表明Treg和Th17保持平衡可維持機體的免疫穩態，失衡將導致機體發生癌變，而這種失衡與癌癥的臨床病理因素也有關[2]。本研究試圖通過檢測子宮內膜癌患者體內IL-10和IL-17的表達，以探討其與臨床病理特征之間的關系。

1資料與方法

1.1　一般資料

選擇2012年1月-2014年1月我院收治的子宮內膜癌和良性子宮病變患者為研究對象。子宮內膜癌63例，年齡36-71歲，平均(55.0±6.3)歲，其中絕經45例，未絕經18例；內膜樣腺癌39例，內膜樣腺癌伴鱗化14例，內膜樣腺癌伴黏液性腺癌10例；IA期43例，IB期15例，Ⅱ期5例；G1級32例，G2級24例，G3級7例；腫瘤大小≤1 cm者15例，1-2 cm者28例，≥2 cm者20例；未出現肌壁浸潤者40例，浸潤≤1/2肌壁者19例，浸潤>1/2肌壁者4例。良性子宮病變患者175例，年齡33-75歲，平均(53.3±7.5)歲，其中絕經126例，未絕經者49例；子宮肌瘤者58例，子宮腺肌瘤73例，子宮內膜異位癥者44例。 納入標準：①所有的患者術后均經病理檢查結果確診；②子宮內膜癌的病理分期標準參照2009年國際婦產聯盟(FIGO)子宮內膜癌手術-病理分期[3]；③兩組患者無自身免疫性疾??；④術前無放化療史；⑤患者及家屬知情同意，并簽署知情同意書；⑥符合醫學倫理學要求。子宮內膜癌手術的范圍包括廣泛子宮切除術及雙附件切除術，如果出現惡性腫瘤浸潤肌層、中或低分化或者特殊的組織類型時進行的是盆腔淋巴結清掃手術，單純的子宮切除手術已經排除了惡性腫瘤。

1.2　方法

1.2.1標本采集手術前1天，分別抽取患者外周靜脈血3 ml,并以255 r/min的速度進行離心5 min，將離心后的上清液置于EP試管中保存在-80℃環境下，留待后用。手術后半小時內切取小塊子宮內膜組織并以10%的福爾馬林進行固定，標本均采用蘇木素-伊紅(HE)和鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復合物免疫組織化學(SABC-IHC)染色。

1.2.2檢測方法采用雙夾心酶聯免疫吸附法(ELISA)測定患者的血清IL-10和IL-17水平，IL-10、IL-17的ELISA試劑盒均由美國R&D公司提供，吸光度值采用酶標儀為美國BIORAD680型測量，波長為450 nm，操作過程嚴格按照試劑盒說明書進行；將SABC-IHC染色的組織標本切厚度為4 μm的薄片并常規脫蠟脫水→1份3%的雙氧水+10份蒸餾水→在室溫下，滅活內源性過氧化物酶10 min，并以濃度為0.01 mol/L的枸櫞酸鹽進行抗原修復后再5%BSA室溫下保存10 min→4℃下孵育1∶100兔抗人IL-10單抗(由北京博奧森公司提供)+1∶50兔抗人IL-17單抗(Abcam公司提供)→37℃下孵育30 min的1∶100羊抗兔IgG(武漢博士德公司提供)+37℃下孵育30 min的1∶100鏈霉親和素-生物素-過氧化物酶復合物(武漢博士德公司提供)→室溫下DAB(武漢博士德公司提供)顯色5-30 min→顯微鏡下控制顯色時間，并以蘇木素復染色2 min+脫水+透明的中性樹膠進行封片，并在顯微鏡下觀察。其中陰性對照選用PBS代替一抗。最后通過IPP6.0圖像軟件以分析高倍鏡視野(×200)的積分光密度值(integrated option density，IOD)，而切片的IOD值為5個高倍鏡視野下的IOD平均值。

1.3　統計學分析

2結果

2.1　子宮內膜癌與良性子宮病變患者血清IL-10、IL-17的表達情況比較

子宮內膜癌患者與良性子宮病變患者的血清IL-10、IL-17水平比較，差異有統計學意義(P<0.05)，子宮內膜癌患者的血清IL-10、IL-17水平均高于良性子宮病變。見表1。

表1　　子宮內膜癌及良性子宮病變患者血清IL-10、

2.2　子宮內膜癌與良性子宮病變患者組織中IL-10、IL-17表達的IOD值比較

SABC-IHC染色結果顯示抗原陽性物在顯微鏡下呈現為棕黃色或者棕褐色的顆粒，在腫瘤細胞以及間質細胞的細胞質中可見IL-10、IL-17的表達，并且經定量分析發現，IL-10、IL-17在子宮內膜癌和良性子宮病變中的表達差異有統計學意義(P<0.05)，子宮內膜癌組織中IL-10、IL-17的IOD值高于良性子宮病變。見表2。

表2　子宮內膜癌與良性子宮病變患者組織中IL-10、

2.3　子宮內膜癌患者的血清IL-10、IL-17與臨床病理特征之間的關系

子宮內膜癌患者血清IL-10、IL-17在不同分期、不同細胞分級、有無肌層浸潤時，表達差異有統計學意義(P<0.05)，FIGO IA期、G1級以及無肌層浸潤的子宮內膜癌患者血清IL-10水平最低，而IL-17水平則最高；血清IL-10、IL-17的表達在不同組織學類型、腫瘤大小中的差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

3討論

子宮內膜癌作為女性生殖系統常見的惡性腫瘤，常發生于絕經期以及絕經后女性的上皮組織，發病率僅次于卵巢癌和宮頸癌。由于子宮內膜癌發病早期無特異性的臨床表現，因此很難通過臨床表現進行篩查和診斷，而通過了解子宮內膜癌的發病機制，可為臨床初步篩查子宮內膜癌作出重要指導。

表3　子宮內膜癌患者的血清IL-10、IL-17與臨床病理

有研究證實許多細胞因子參與了惡性腫瘤的免疫學機制，IL-10是由Treg分泌的細胞因子，在宮頸癌的相關研究中，IL-10在宮頸癌以及子宮頸上皮內瘤變中的表達高于健康對照組，提示IL-10參與了機體的抗腫瘤免疫反應[4]。Th-17作為CD4+T細胞亞群，它通過參與機體的自身免疫性疾病、腫瘤以及移植物抗宿主等的發生及發展過程而介導炎性反應，并且影響疾病的預后。IL-17作為一種含有多種功能的細胞因子，主要由Th-17所分泌，因此在機體的免疫反應中也具有重要作用。

作者查閱相關文獻發現，關于IL-10、IL-17在子宮內膜癌發生機制中的作用的研究還相對較少，本研究試圖從這一角度出發，對子宮內膜癌的發生機制展開研究。結果顯示，子宮內膜癌患者的血清IL-10水平均高于良性子宮病變，差異有統計學意義。說明Treg細胞分泌的IL-10參與了機體對惡性腫瘤的免疫耐受過程，與有關研究結果一致[5]。并且子宮內膜癌患者的血清IL-17高于良性子宮病變，可能與子宮內膜癌時，可能誘導機體發生炎癥性反應，從而引起機體的Th-17分泌IL-17來介導機體的免疫反應有關。SABC-IHC染色結果發現子宮內膜癌組織中IL-10、IL-17的IOD值均高于良性子宮病變，進一步說明了子宮內膜癌時，炎癥因子參與了機體的免疫過程，從而增強機體的抗腫瘤免疫能力，與相關研究結果一致[5]。

有研究表明Treg/Th17保持平衡狀態有利于機體維持免疫穩定，而失衡將導致機體產生各種惡性病變，并且臨床研究證實Treg的水平可以評估宮頸癌的分化程度，Th-17的水平則與宮頸癌的臨床病理特征如臨床分期以及有無轉移等，有明顯的正相關關系[6]。本研究結果顯示，子宮內膜癌患者血清IL-10、IL-17在不同分期、不同細胞分級、有無肌層浸潤時表達差異有統計學意義，FIGO IA期、G1級以及無肌層浸潤的子宮內膜癌患者血清IL-10水平最低，而IL-17水平最高。結果提示子宮內膜癌進展越快，IL-10水平越高，而IL-17越低，因此兩者可作為評估子宮內膜癌進展情況的重要指標。而在不同組織學類型以及腫瘤大小中，血清IL-10，IL-17的表達無差異，與有關研究結果相似[7]。

綜上所述，IL-10，IL-17可能參與了子宮內膜癌的發生及發展過程，而通過檢測兩者在子宮內膜癌中的表達可評估惡性腫瘤的進展情況，從而為臨床治療提供指導。

參考文獻：

[1]Santacana M,Maiques O,Valls J,et al.A 9-protein biomarker molecular signature for predicting histologic type in endometrial carcinomaby immunohistochemistry[J].Hum Pathol,2014,45(12):2394.

[2]Maruyama T,Kono K,Mizukami Y,et al.Distribution of Th17 cells and FoxP3(+) regulatory T cells in tumor-infiltrating lymphocytes,tumor-draining lymph nodes and peripheral blood lymphocytes in patients with gastric cancer[J].Cancer Sci,2010,101(9):1947.

[3]Colombo N,Preti E,Landoni F,et al.Endometrial cancer:ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis,treatment and follow-up[J].Ann Oncol,2011,22(6):35.

[4]劉驥,黃明莉,王寶菊,等.子宮內膜癌血管生成相關因子的研究進展[J].現代生物醫學進展,2014,14(9):1790.

[5]李林,程矗,段瑞岐,等.IL-10、IL-17在子宮內膜癌中的表達及意義[J].四川大學學報(醫學版),2014,45(5):793.

[6]李林,程矗,段瑞岐,等.白細胞介素-10，-17及叉狀/翼狀螺旋轉錄因子，維甲酸相關孤兒受體-γt在子宮內膜癌中的表達及意義[J].中華婦幼臨床醫學雜志(電子版),2013,9(5):599.

[7]Yamagami W,Susumu N,Tanaka H,et al.Immunofluorescence-detected infiltration of CD4+FOXP3+ regulatory T cells is relevant to the prognosis of patients with endometrial cancer[J].Int J Gynecol Cancer,2011,21(9):1628.

(收稿日期：2014-06-09)

文章編號：1007-4287(2015)05-0791-03