高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定九制大黃丸中5組分含量

李 莉，宋俊驪，王志梅，李曉敏，吳海霞，劉艷麗

（1．河北省邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 邯鄲 056004； 2．河北省邯鄲市中心血站，河北 邯鄲 056001）

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定九制大黃丸中5組分含量

李 莉1，宋俊驪1，王志梅2，李曉敏1，吳海霞1，劉艷麗1

（1．河北省邯鄲市食品藥品檢驗(yàn)中心，河北 邯鄲 056004； 2．河北省邯鄲市中心血站，河北 邯鄲 056001）

目的 建立同時(shí)測(cè)定九制大黃丸中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚含量的高效液相色譜(HPLC)法。方法 色譜柱為C18柱(250 mm×4．6 mm，5 m)，流動(dòng)相為甲醇-0．1%磷酸溶液(77∶23)，流速1．0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫40℃，進(jìn)樣量20 L。結(jié)果 蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的進(jìn)樣質(zhì)量濃度線性范圍分別為4．6～92 g／mL，3．8～76 g／mL，4．0～800 g／mL，5．0～100 g／mL和17．6～352 g／mL，平均回收率分別為99．38%，99．04%，99．72%，99．59%和99．52%，RSD分別為0．80%，1．02%，0．50%，0．54%，0．92%(n=6)。結(jié)論 HPLC法可同時(shí)測(cè)定九制大黃丸中5組分的含量，專屬性強(qiáng)，分離效果好。

高效液相色譜法；九制大黃丸；蘆薈大黃素；大黃酸；大黃素；大黃酚；大黃素甲醚

九制大黃丸適用于胃腸積滯、口渴不休、停食停水、胸?zé)嵝臒⒋蟊阍锝Y(jié)、小便赤黃等癥[1]，原標(biāo)準(zhǔn)中無定性和定量檢查項(xiàng)，不能很好地控制藥品質(zhì)量。本試驗(yàn)中采用高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測(cè)定九制大黃丸中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量，方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC-2010AHT型高效液相色譜儀（日本島津）；Lcsolution色譜工作站。蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為 110795-200605，110757-200206，110756-200110，110796-201017，110758-201013）；甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為純化水；九制大黃丸（甘肅岷海制藥有限責(zé)任公司，水丸，規(guī)格為每50粒重3 g，批號(hào)為120401，120803，130312）；陰性樣品(邯鄲摩羅丹藥業(yè)股份有限公司提供)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Thermo BDS HYPERSIL C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-0．1%磷酸（77∶23）；流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20 μL。在此條件下，蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的保留時(shí)間分別為4．719，5．686，8．672，12．266，17．037 min，理論板數(shù)分別為5 471，5 920，8 622，11 419和11 998。色譜圖見圖1。

A．供試品溶液 B．對(duì)照品溶液 C．陰性對(duì)照品溶液圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

精密稱取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋成1 mL中含蘆薈大黃素0．23 mg、大黃酸 0．19 mg、大黃素 2．00 mg、大黃酚0．25 mg、大黃素甲醚0．88 mg的溶液，作為對(duì)照品貯備溶液。取本品水丸適量，研細(xì)，取約0．5 g，分置錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，置水浴上加熱回流1 h，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液 10 mL，置燒瓶中，蒸干，加 8%鹽酸溶液15 mL，超聲處理2 min，再加三氯甲烷10 mL，加熱回流1 h，立即冷卻，用三氯甲烷強(qiáng)力振搖提取4次，每次15 mL，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙猓浦?5 mL容量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用0．45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋成1 mL中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃素甲醚各10 μg及大黃酚15 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取對(duì)照品貯備溶液 1．0，5．0，10．0，15．0，20．0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度(μg／mL)為縱坐標(biāo)、相應(yīng)峰面積（A）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程與線性范圍見表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n=5）

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，依法重復(fù)進(jìn)樣5次。結(jié)果蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積積分值的RSD分別為0．6%，0．7%，0．4%，0．3%，0．8%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：在擬訂色譜條件下，依法測(cè)定供試品溶液在室溫下放置0，3，6，12，24 h時(shí)的峰面積。結(jié)果蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積積分值的 RSD分別為0．9%，0．7%，0．6%，0．8%，1．1%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)為120401），依法制備供試品溶液并測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果的 RSD為0．79%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（批號(hào)為120401）6份，精密加入一定量的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對(duì)照品，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

表2 5組分加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2．4 樣品含量測(cè)定

按照擬訂色譜條件，取供試品溶液和對(duì)照品溶液各20 μL，注入色譜儀測(cè)定，用外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果（mg／g）

3 討論

試驗(yàn)過程中，分別以乙腈（每1 L加磷酸二氫鈉3．4 g和十二烷基硫酸鈉）-水（1∶1)[2]19，458、甲醇-0．1%磷酸溶液（77∶23)[2]22為流動(dòng)相，結(jié)果以后者為流動(dòng)相時(shí)，柱效高、分離效果好，且甲醇對(duì)人體的傷害要比乙腈小，故選流動(dòng)相為甲醇-0．1%磷酸溶液。

樣品制備中分別采用加熱回流0．5，1，2 h，超聲處理1 h和 2 h時(shí)測(cè)定結(jié)果差別不大，加熱回流1 h可得到滿意結(jié)果，故采用加熱回流1 h提取[3]。

本試驗(yàn)中所建立的方法具有回收率穩(wěn)定、重復(fù)性好等特點(diǎn)，可以作為九制大黃丸中5組分的含量測(cè)定方法。

[1]WS3-B-0178-90，中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第二冊(cè)）[S]．

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010．

[3]李曉敏，畢雪艷，李小菊，等．高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方清肝膠囊中梔子苷含量[J]．中國(guó)藥業(yè)，2008，10（17）：43-44．

Contents Determination of 5 Kinds of Components in Jiuzhi Rhubarb Pill by HPLC

Li Li1,Song Junli1,Wang Zhimei2,Li Xiaomin1,Wu Haixia1,Liu Yanli1
(1．Handan Municipal Inspection Center for Food and Drug,Handan,Hebei,China 056004; 2．Handan Municipal Blood Center,Handan,Hebei,China 056001)

Objective To establish a HPLC method for simultaneously determining the contents of aloe-emodin,chrysophanic acid, emodin,chrysophanol and rheochrysidin in Jiuzhi Rhubarb Pill．M ethods The C18column(250 mm×4．6 mm，5 m)was adopted with methanol-0．1% phosphoric acid(77∶23)as the mobile phase at a flow rate of 1．0 mL／min,the detection wavelength was 254 nm,the column temperature was 40℃ and the injection volume was 20 μL．Results The linear ranges were 4．6-92 μg／mL for aloe-emodin, 3．8-76 μg／mL for chrysophanic acid,4．0-800 μg／mL for emodin,5．0-100 μg／mL for chrysophanol and 17．6-352 μg／mL for rheochrysidin respectively．Theaveragerecoveryrateswere99．38%(RSD=0．80%),99．04%(RSD=1．02%),99．72%(RSD= 0．50%),99．59%(RSD=0．54%)and 99．52%(RSD=0．92%)respectively(n=6)．Conclusion The HPLC method can simultaneously determine the contents of 5 kinds of components in Jiuzhi Rhubarb Pill and has stong specificity and good separating effects．

HPLC;Jiuzhi Rhubarb Pills;aloe-emodin;chrysophanic acid;emodin;chrysophanol;rheochrysidin

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)05-0034-03

李莉(1974-)，女，大學(xué)本科，副主任藥師，研究方向?yàn)樗幬锓治觯娫挘?310-7052066（電子信箱）llqikai＠126．com。

2014-02-25；

2014-06-27)